摘要：從技術(shù)步驟、分析方法以及實(shí)際應(yīng)用三個(gè)方面對(duì)當(dāng)前藥用植物代謝組學(xué)研究領(lǐng)域的一些理論問題和實(shí)踐中面臨的挑戰(zhàn)進(jìn)行綜述。

關(guān)鍵詞：藥用植物；代謝組學(xué)；功能基因組學(xué)

代謝組學(xué)是對(duì)生物體內(nèi)代謝物進(jìn)行大規(guī)模分析的一項(xiàng)技術(shù)［1］，它是系統(tǒng)生物學(xué)的重要組成部分（如圖1所示），藥用植物代謝組學(xué)主要研究外界因素變化對(duì)植物所造成的影響，如氣候變化、營養(yǎng)脅迫、生物脅迫，以及基因的突變和重組等引起的微小變化，是物種表型分析最強(qiáng)有力的工具之一。在現(xiàn)代中藥研究中，代謝組學(xué)在藥物有效性和安全性、中藥資源和質(zhì)量控制研究等方面具有重要理論意義和應(yīng)用價(jià)值。另外，在對(duì)模式植物突變體文庫或轉(zhuǎn)基因文庫進(jìn)行分析之前，代謝組學(xué)往往是首先考慮采用的研究方法之一。目前，國外已有成功利用代謝組學(xué)技術(shù)對(duì)擬南芥突變株進(jìn)行大規(guī)?；蚝Y選的例子，這為與重要性狀相關(guān)基因功能的闡明和選育可供商業(yè)化利用的轉(zhuǎn)基因作物奠定了基礎(chǔ)。

圖1系統(tǒng)生物學(xué)研究的四個(gè)層次略

目前，還有許多經(jīng)濟(jì)作物的全基因組測(cè)序計(jì)劃尚未完成，由于代謝組學(xué)研究并不要求對(duì)基因組信息的了解，所以在與這些作物有關(guān)的研究領(lǐng)域具有更大的利用價(jià)值，這也是其與轉(zhuǎn)錄組學(xué)和蛋白組學(xué)研究相比的優(yōu)勢(shì)之一。代謝組學(xué)研究涉及與生物技術(shù)、分析化學(xué)、有機(jī)化學(xué)、化學(xué)計(jì)量學(xué)和信息學(xué)相關(guān)的大量知識(shí)，F(xiàn)iehn［2］對(duì)代謝組學(xué)有關(guān)的研究方向進(jìn)行了分類（見表1）。

1代謝組學(xué)研究的技術(shù)步驟

【摘要】從技術(shù)步驟、分析方法以及實(shí)際應(yīng)用三個(gè)方面對(duì)當(dāng)前藥用植物代謝組學(xué)研究領(lǐng)域的一些理論問題和實(shí)踐中面臨的挑戰(zhàn)進(jìn)行綜述。

【關(guān)鍵詞】藥用植物;代謝組學(xué);功能基因組學(xué)

代謝組學(xué)是對(duì)生物體內(nèi)代謝物進(jìn)行大規(guī)模分析的一項(xiàng)技術(shù)[1],它是系統(tǒng)生物學(xué)的重要組成部分(如圖1所示),藥用植物代謝組學(xué)主要研究外界因素變化對(duì)植物所造成的影響,如氣候變化、營養(yǎng)脅迫、生物脅迫,以及基因的突變和重組等引起的微小變化,是物種表型分析最強(qiáng)有力的工具之一。在現(xiàn)代中藥研究中,代謝組學(xué)在藥物有效性和安全性、中藥資源和質(zhì)量控制研究等方面具有重要理論意義和應(yīng)用價(jià)值。另外,在對(duì)模式植物突變體文庫或轉(zhuǎn)基因文庫進(jìn)行分析之前,代謝組學(xué)往往是首先考慮采用的研究方法之一。目前,國外已有成功利用代謝組學(xué)技術(shù)對(duì)擬南芥突變株進(jìn)行大規(guī)模基因篩選的例子,這為與重要性狀相關(guān)基因功能的闡明和選育可供商業(yè)化利用的轉(zhuǎn)基因作物奠定了基礎(chǔ)。

圖1系統(tǒng)生物學(xué)研究的四個(gè)層次略

目前,還有許多經(jīng)濟(jì)作物的全基因組測(cè)序計(jì)劃尚未完成,由于代謝組學(xué)研究并不要求對(duì)基因組信息的了解,所以在與這些作物有關(guān)的研究領(lǐng)域具有更大的利用價(jià)值,這也是其與轉(zhuǎn)錄組學(xué)和蛋白組學(xué)研究相比的優(yōu)勢(shì)之一。代謝組學(xué)研究涉及與生物技術(shù)、分析化學(xué)、有機(jī)化學(xué)、化學(xué)計(jì)量學(xué)和信息學(xué)相關(guān)的大量知識(shí),Fiehn[2]對(duì)代謝組學(xué)有關(guān)的研究方向進(jìn)行了分類(見表1)。

1代謝組學(xué)研究的技術(shù)步驟

論文關(guān)鍵詞：代謝組學(xué)環(huán)境微生物評(píng)述

論文摘要：代謝組學(xué)是效仿基因組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)的研究思想,對(duì)生物體內(nèi)所有代謝物進(jìn)行定量分析,并尋找代謝物與生理病理變化的相對(duì)關(guān)系的研究方式。本文在介紹代謝組學(xué)基本含義的基礎(chǔ)之上，對(duì)代謝組學(xué)的研究方法及其在環(huán)境微生物領(lǐng)域的研究進(jìn)展進(jìn)行了評(píng)述。

一、代謝微生物概述

代謝組學(xué)(metabonomics/metabolomics)是效仿基因組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)的研究思想,對(duì)生物體內(nèi)所有代謝物進(jìn)行定量分析,并尋找代謝物與生理病理變化的相對(duì)關(guān)系的研究方式,是系統(tǒng)生物學(xué)的組成部分。其研究對(duì)象大都是相對(duì)分子質(zhì)量1000以內(nèi)的小分子物質(zhì)。先進(jìn)分析檢測(cè)技術(shù)結(jié)合模式識(shí)別和專家系統(tǒng)等計(jì)算分析方法是代謝組學(xué)研究的基本方法?；瘜W(xué)分析技術(shù)中最常用的是1H核磁共振(1HNMR)以及色譜(毛細(xì)管電泳)-質(zhì)譜聯(lián)用(X-MS)。目前代謝組數(shù)據(jù)處理的主要方法是:應(yīng)用主成分分析(PCA)等將從原始圖譜信息或預(yù)處理后的信息進(jìn)行歸類,并采用相應(yīng)的可視化技術(shù)直觀地表達(dá)出來;建立類別間的數(shù)學(xué)模型,使各類樣品間達(dá)到最大的分離,并利用建立的多參數(shù)模型對(duì)未知的樣本進(jìn)行預(yù)測(cè);最終建立可利用的該領(lǐng)域的應(yīng)用數(shù)據(jù)庫和專家系統(tǒng)。應(yīng)用代謝組學(xué)可進(jìn)行疾病診斷、對(duì)藥物進(jìn)行毒性評(píng)價(jià)和研究植物細(xì)胞代謝等。

二、代謝組學(xué)的研究方法

代謝物組學(xué)分析中,對(duì)于不同類型的代謝產(chǎn)物,往往要采取不同的分析方法進(jìn)行研究。目前,代謝物組學(xué)通常采用紅外光譜法(infraredspectroscopy,IR)、核磁共振(nuclearmagneticresonance,NMR)、質(zhì)譜(massspectrometry,MS)、高效液相色譜(highperformanceliquidchromatography,HPLC)以及各種技術(shù)的耦聯(lián),如氣象色譜耦聯(lián)質(zhì)譜(gaschromatography2massspectrometry,GC/MS)和液相色譜耦聯(lián)質(zhì)譜(liquidchromatography2massspectrometry,LC/MS)來分析研究代謝物并為其繪制圖譜。這些技術(shù)的耦聯(lián)可以提高對(duì)樣品的分辨率、敏感性及選擇度,有利于對(duì)更多的生物體系內(nèi)的代謝物繪制圖譜。一般來說,選擇代謝物組學(xué)分析方法時(shí),其原則是要同時(shí)考慮儀器和技術(shù)的檢測(cè)速度、選擇性和靈敏度,找到一種最適合目標(biāo)化合物的方法。

摘要：目的了解靈芝代謝產(chǎn)物對(duì)腫瘤細(xì)胞的作用。方法①體質(zhì)量為18～22g昆明140只小鼠隨機(jī)分為7組，其中6組左前腋皮下注射S180，然后分別給予生理鹽水、腹腔注射含靈芝代謝產(chǎn)物培養(yǎng)基、環(huán)磷酰胺、腹腔注射含靈芝代謝產(chǎn)物培養(yǎng)基加抗血清組、口服含靈芝代謝產(chǎn)物培養(yǎng)基組和單純腹腔注射抗血清組處理，未注射S180的20只給予生理鹽水，一周后處死各組動(dòng)物觀察各組腫瘤質(zhì)量大小、血清TNF-α水平、血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶變化。結(jié)果腹腔注射含靈芝代謝產(chǎn)物培養(yǎng)基加抗血清組能有效減輕荷瘤小鼠的腫瘤質(zhì)量，其質(zhì)量減輕程度與環(huán)磷酰胺無差異。結(jié)論靈芝代謝產(chǎn)物中的羥基可能參與了抗腫瘤作用。

關(guān)鍵詞：靈芝代謝產(chǎn)物;TNF-α;腫瘤;羥基

靈芝是我國醫(yī)學(xué)寶庫中的靈芝屬藥、食兩用真菌。其在自然界生長(zhǎng)過程中必然要與細(xì)菌等自然界其他微生物爭(zhēng)奪營養(yǎng)，而靈芝作為一種真菌，生長(zhǎng)速度要遠(yuǎn)慢于細(xì)菌，所以作為靈芝能獲勝的法寶之一可能就是其代謝產(chǎn)物，而真菌代謝產(chǎn)物的開發(fā)早已被證明是非常有價(jià)值的，比如歷史上青霉素的發(fā)現(xiàn)就是例證，在這方面我國的發(fā)展步伐卻比較慢，靈芝代謝產(chǎn)物藥理作用的開發(fā)也將豐富我國中藥的用途。對(duì)于靈芝代謝產(chǎn)物的研究目前并不多而且主要集中在其中靈芝多糖的測(cè)定上［1］。但靈芝的代謝產(chǎn)物是否能夠?qū)δ[瘤細(xì)胞有所作用？為解決這個(gè)問題，我們進(jìn)行了如下實(shí)驗(yàn)。

1材料與儀器

1.1試劑環(huán)磷酰胺（CTX）注射液由上海華聯(lián)制藥有限公司生產(chǎn)（生產(chǎn)批號(hào)為071002）。TNF-αELISA試劑盒購于渤海生物公司。肝功能檢測(cè)試劑盒購于上海榮盛公司。

1.2含靈芝的代謝產(chǎn)物培養(yǎng)基取生長(zhǎng)于斜面固體培養(yǎng)基上的靈芝菌泥（約1cm2）接種于100ml液體培養(yǎng)基（含2%黃豆粉，2%蔗糖，0.075%的磷酸二氫鉀，0.03%的硫酸鎂），25℃100r/min條件下培養(yǎng)5d，用濾紙過濾后得到含靈芝的代謝產(chǎn)物培養(yǎng)基。將這些培養(yǎng)基在-20℃條件下保存待用。

摘要摘要：目的探索脂肪細(xì)胞因子瘦素、腫瘤壞死因子α在代謝綜合征發(fā)病機(jī)制中的功能。方法檢測(cè)社區(qū)人群瘦素和腫瘤壞死因子α的血漿水平，采用Logistic回歸分析，經(jīng)過對(duì)年齡和性別的調(diào)整，探究瘦素、腫瘤壞死因子α和代謝綜合征的關(guān)系。結(jié)果瘦素水平愈高發(fā)生代謝綜合征的危險(xiǎn)性愈大，瘦素和代謝綜合征的關(guān)系受性別和年齡的影響，男性比女性對(duì)瘦素水平變化更為敏感，隨年齡增長(zhǎng)瘦素對(duì)代謝綜合征發(fā)生的危險(xiǎn)增大。腫瘤壞死因子α水平愈低發(fā)生代謝綜合征的危險(xiǎn)性愈大，其高水平的患病危險(xiǎn)性是低水平的0538倍。結(jié)論高瘦素性肥胖對(duì)代謝綜合征的影響男性表現(xiàn)得更為明顯，瘦素水平可以作為猜測(cè)代謝綜合征的指標(biāo)，尤其在老年男性中更為有效。

摘要：瘦素；腫瘤壞死因子α；胰島素反抗；代謝綜合征

EffectsofleptinandTNFαonmetabolicsyndrome

Abstract摘要：ObjectiveTodiscovertheeffectsoftheleptinandTNFα(tumornecrosisfactoralpha)inthecauseofmetabolicsyndrome.MethodsTheresearchincludestestingonthelevelofleptinandTNFαinthebloodofresidentsofalocalcommunity,analyzingthecauseofmetabolicsyndromeinrelationtoleptinandTNFαthroughLogisticregressionanalysisbyadjustingageandgender.ResultsThehighertheleptinlevelswere,thehigherriskmetabolicsyndromewas.Therelationshipbetweenleptinlevelsandmetabolicsyndromewasaffectedbyageandgender.Malesweremoresensitivetoleptinthanfemales.Theeffectofleptinonmetabolicsyndromeincreasedwiththeage.ThelowerthelevelofTNFαwas,thehigherriskmetabolicsyndromewas.ThechancesforresidentswithhigherlevelofTNFαtosufferfromdiseasewas0538timesofthoswithlowerlevel.ConclusionObesitywithhighlevelleptinaffectsmetabolicsyndrome,especiallymalesobsity.Leptinlevelcanbeusedasanindicatorinpredictingmetabolicsyndrome.Thismethodisespeciallyeffectivetooldmalepatients.Itisnecessarytodofurtherresearchonthdbiologicalmechanismofmetabolicsyndrome.

Keywords摘要：leptin;tumornecrosisfactoralpha;insulinresistance;metabolicsyndrome

代謝綜合征(metabolicsyndrome,MS)是心血管疾病和糖尿病發(fā)病的主要危險(xiǎn)因素，這些疾病正日益威脅著人類生命健康，不同地區(qū)代謝綜合征的患病情況及影響因素存在很大差異。有探究表明，我國60歲～人群代謝綜合征患病率達(dá)20%〔1〕。目前代謝綜合征的發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚，脂肪分泌多種脂肪激素可能參和其中。本探究旨在探索脂肪細(xì)胞因子瘦素(leptin)及腫瘤壞死因子α(tumornecrosisfactoralpha,TNFα)在代謝綜合征發(fā)病機(jī)制中的功能，為代謝綜合征的防治提供科學(xué)依據(jù)。

摘要：從技術(shù)步驟、分析方法以及實(shí)際應(yīng)用三個(gè)方面對(duì)當(dāng)前藥用植物代謝組學(xué)研究領(lǐng)域的一些理論問題和實(shí)踐中面臨的挑戰(zhàn)進(jìn)行綜述。

關(guān)鍵詞：藥用植物；代謝組學(xué)；功能基因組學(xué)

代謝組學(xué)是對(duì)生物體內(nèi)代謝物進(jìn)行大規(guī)模分析的一項(xiàng)技術(shù)［1］，它是系統(tǒng)生物學(xué)的重要組成部分（如圖1所示），藥用植物代謝組學(xué)主要研究外界因素變化對(duì)植物所造成的影響，如氣候變化、營養(yǎng)脅迫、生物脅迫，以及基因的突變和重組等引起的微小變化，是物種表型分析最強(qiáng)有力的工具之一。在現(xiàn)代中藥研究中，代謝組學(xué)在藥物有效性和安全性、中藥資源和質(zhì)量控制研究等方面具有重要理論意義和應(yīng)用價(jià)值。另外，在對(duì)模式植物突變體文庫或轉(zhuǎn)基因文庫進(jìn)行分析之前，代謝組學(xué)往往是首先考慮采用的研究方法之一。目前，國外已有成功利用代謝組學(xué)技術(shù)對(duì)擬南芥突變株進(jìn)行大規(guī)?；蚝Y選的例子，這為與重要性狀相關(guān)基因功能的闡明和選育可供商業(yè)化利用的轉(zhuǎn)基因作物奠定了基礎(chǔ)。

圖1系統(tǒng)生物學(xué)研究的四個(gè)層次略

目前，還有許多經(jīng)濟(jì)作物的全基因組測(cè)序計(jì)劃尚未完成，由于代謝組學(xué)研究并不要求對(duì)基因組信息的了解，所以在與這些作物有關(guān)的研究領(lǐng)域具有更大的利用價(jià)值，這也是其與轉(zhuǎn)錄組學(xué)和蛋白組學(xué)研究相比的優(yōu)勢(shì)之一。代謝組學(xué)研究涉及與生物技術(shù)、分析化學(xué)、有機(jī)化學(xué)、化學(xué)計(jì)量學(xué)和信息學(xué)相關(guān)的大量知識(shí)，F(xiàn)iehn［2］對(duì)代謝組學(xué)有關(guān)的研究方向進(jìn)行了分類（見表1）。

1代謝組學(xué)研究的技術(shù)步驟

本文對(duì)藥物基因組學(xué)的基本概念和常用麻醉藥的藥物基因組學(xué)研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。

藥物基因組學(xué)是伴隨人類基因組學(xué)研究的迅猛發(fā)展而開辟的藥物遺傳學(xué)研究的新領(lǐng)域，主要闡明藥物代謝、藥物轉(zhuǎn)運(yùn)和藥物靶分子的基因多態(tài)性及藥物作用包括療效和毒副作用之間關(guān)系的學(xué)科。

基因多態(tài)性是藥物基因組學(xué)的研究基礎(chǔ)。藥物效應(yīng)基因所編碼的酶、受體、離子通道作為藥物作用的靶，是藥物基因組學(xué)研究的關(guān)鍵所在。基因多態(tài)性可通過藥物代謝動(dòng)力學(xué)和藥物效應(yīng)動(dòng)力學(xué)改變來影響麻醉藥物的作用。

基因多態(tài)性對(duì)藥代動(dòng)力學(xué)的影響主要是通過相應(yīng)編碼的藥物代謝酶及藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白等的改變而影響藥物的吸收、分布、轉(zhuǎn)運(yùn)、代謝和生物轉(zhuǎn)化等方面。與麻醉藥物代謝有關(guān)的酶有很多，其中對(duì)細(xì)胞色素-P450家族與丁酰膽堿酯酶的研究較多。基因多態(tài)性對(duì)藥效動(dòng)力學(xué)的影響主要是受體蛋白編碼基因的多態(tài)性使個(gè)體對(duì)藥物敏感性發(fā)生差異。

苯二氮卓類藥與基因多態(tài)性：咪唑安定由CYP3A代謝，不同個(gè)體對(duì)咪唑安定的清除率可有五倍的差異。地西泮是由CYP2C19和CYP2D6代謝，基因的差異在臨床上可表現(xiàn)為用藥后鎮(zhèn)靜時(shí)間的延長(zhǎng)。

吸入麻醉藥與基因多態(tài)性：RYR1基因變異與MH密切相關(guān)，現(xiàn)在已知至少有23種不同的RYR1基因多態(tài)性與MH有關(guān)。氟烷性肝炎可能源于機(jī)體對(duì)在CYP2E1作用下產(chǎn)生的氟烷代謝產(chǎn)物的一種免疫反應(yīng)。

摘要：肝藥酶在藥物代謝中具有十分重要的作用。對(duì)肝藥酶的研究方法中，以動(dòng)物肝臟或肝細(xì)胞為基礎(chǔ)，構(gòu)建體外肝代謝系統(tǒng)是體外代謝研究中最重要的環(huán)節(jié)之一。對(duì)體外肝代謝的研究，主要是利用肝微粒體、基因重組CYP450酶系、肝細(xì)胞培養(yǎng)、肝組織切片及離體肝灌流系統(tǒng)等方法。本文綜述近年國內(nèi)外所應(yīng)用的不同體外肝代謝系統(tǒng)，并對(duì)各體外代謝研究方法進(jìn)行比較，指出根據(jù)各系統(tǒng)的特性、不同的實(shí)驗(yàn)要求和目的，選擇適當(dāng)?shù)难芯糠椒ǖ闹匾浴?/p>

關(guān)鍵詞：細(xì)胞色素P450酶；肝微粒體；肝細(xì)胞培養(yǎng)；肝組織切片；離體肝灌流

藥物代謝（drugmetabolism）一般是指藥物的生物轉(zhuǎn)化（drugbiotransformation）。藥物經(jīng)生物轉(zhuǎn)化后，可引起藥物的藥理活性或∕和毒理活性的改變。因此，研究藥物的生物轉(zhuǎn)化，明確其代謝過程，對(duì)新藥開發(fā)、新劑型設(shè)計(jì)及制定合理的臨床用藥方案等方面都具有重要的指導(dǎo)意義。肝臟是藥物生物轉(zhuǎn)化的重要器官，含有參與藥物代謝重要的酶系（細(xì)胞色素P450酶，cytochromeP450，CYP450)，該酶系參與藥物及各種內(nèi)源性和外源性化合物在體內(nèi)的代謝過程。CYP450酶系由三十多種同工酶（亞型）組成，主要有CYP1、CYP2、CYP3三大家族［1］。本文所介紹的各種體外代謝系統(tǒng)均含有一種或多種CYP450酶的同工酶，為研究藥物體外代謝提供了研究的對(duì)象和基礎(chǔ)。動(dòng)物肝體外代謝研究可以較好地排除體內(nèi)因素干擾，直接觀察酶對(duì)底物代謝的選擇性，為整體試驗(yàn)提供可靠的科學(xué)依據(jù)。以肝臟為基礎(chǔ)的體外代謝系統(tǒng)主要包括肝微粒體、基因重組CYP450酶系、肝細(xì)胞、肝組織切片及離體肝灌流。

1肝微粒體

1.1肝微粒體的制備

多數(shù)采用差速離心法［2］，通過高速離心使微粒體與其他成分分離，操作簡(jiǎn)單，無需其他試劑輔助。但較耗時(shí)，設(shè)備要求高，使該法的普及和深入研究受到一定的限制。針對(duì)這些情況，可采用試劑輔助分離的方法［3］，在離心前額外加入一定比例的PEG6000或CaCl2，促進(jìn)微粒體沉降。此法對(duì)設(shè)備要求降低，并縮短了實(shí)驗(yàn)周期。肝微粒體的制備過程均應(yīng)在4℃下進(jìn)行。正確、合理地選擇緩沖液，能起到良好介質(zhì)的作用，按比例加入后進(jìn)行肝組織的破碎和勻漿，才可有效分離肝微粒體和避免細(xì)胞器受損。

摘要：肝藥酶在藥物代謝中具有十分重要的作用。對(duì)肝藥酶的研究方法中，以動(dòng)物肝臟或肝細(xì)胞為基礎(chǔ)，構(gòu)建體外肝代謝系統(tǒng)是體外代謝研究中最重要的環(huán)節(jié)之一。對(duì)體外肝代謝的研究，主要是利用肝微粒體、基因重組CYP450酶系、肝細(xì)胞培養(yǎng)、肝組織切片及離體肝灌流系統(tǒng)等方法。本文綜述近年國內(nèi)外所應(yīng)用的不同體外肝代謝系統(tǒng)，并對(duì)各體外代謝研究方法進(jìn)行比較，指出根據(jù)各系統(tǒng)的特性、不同的實(shí)驗(yàn)要求和目的，選擇適當(dāng)?shù)难芯糠椒ǖ闹匾浴?/p>

關(guān)鍵詞：細(xì)胞色素P450酶；肝微粒體；肝細(xì)胞培養(yǎng)；肝組織切片；離體肝灌流

藥物代謝（drugmetabolism）一般是指藥物的生物轉(zhuǎn)化（drugbiotransformation）。藥物經(jīng)生物轉(zhuǎn)化后，可引起藥物的藥理活性或∕和毒理活性的改變。因此，研究藥物的生物轉(zhuǎn)化，明確其代謝過程，對(duì)新藥開發(fā)、新劑型設(shè)計(jì)及制定合理的臨床用藥方案等方面都具有重要的指導(dǎo)意義。肝臟是藥物生物轉(zhuǎn)化的重要器官，含有參與藥物代謝重要的酶系（細(xì)胞色素P450酶，cytochromeP450，CYP450)，該酶系參與藥物及各種內(nèi)源性和外源性化合物在體內(nèi)的代謝過程。CYP450酶系由三十多種同工酶（亞型）組成，主要有CYP1、CYP2、CYP3三大家族［1］。本文所介紹的各種體外代謝系統(tǒng)均含有一種或多種CYP450酶的同工酶，為研究藥物體外代謝提供了研究的對(duì)象和基礎(chǔ)。動(dòng)物肝體外代謝研究可以較好地排除體內(nèi)因素干擾，直接觀察酶對(duì)底物代謝的選擇性，為整體試驗(yàn)提供可靠的科學(xué)依據(jù)。以肝臟為基礎(chǔ)的體外代謝系統(tǒng)主要包括肝微粒體、基因重組CYP450酶系、肝細(xì)胞、肝組織切片及離體肝灌流。

1肝微粒體

1.1肝微粒體的制備

多數(shù)采用差速離心法［2］，通過高速離心使微粒體與其他成分分離，操作簡(jiǎn)單，無需其他試劑輔助。但較耗時(shí)，設(shè)備要求高，使該法的普及和深入研究受到一定的限制。針對(duì)這些情況，可采用試劑輔助分離的方法［3］，在離心前額外加入一定比例的PEG6000或CaCl2，促進(jìn)微粒體沉降。此法對(duì)設(shè)備要求降低，并縮短了實(shí)驗(yàn)周期。肝微粒體的制備過程均應(yīng)在4℃下進(jìn)行。正確、合理地選擇緩沖液，能起到良好介質(zhì)的作用，按比例加入后進(jìn)行肝組織的破碎和勻漿，才可有效分離肝微粒體和避免細(xì)胞器受損。

摘要：目的了解靈芝代謝產(chǎn)物對(duì)腫瘤細(xì)胞的作用。方法①體質(zhì)量為18～22g昆明140只小鼠隨機(jī)分為7組，其中6組左前腋皮下注射S180，然后分別給予生理鹽水、腹腔注射含靈芝代謝產(chǎn)物培養(yǎng)基、環(huán)磷酰胺、腹腔注射含靈芝代謝產(chǎn)物培養(yǎng)基加抗血清組、口服含靈芝代謝產(chǎn)物培養(yǎng)基組和單純腹腔注射抗血清組處理，未注射S180的20只給予生理鹽水，一周后處死各組動(dòng)物觀察各組腫瘤質(zhì)量大小、血清TNF-α水平、血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶變化。結(jié)果腹腔注射含靈芝代謝產(chǎn)物培養(yǎng)基加抗血清組能有效減輕荷瘤小鼠的腫瘤質(zhì)量，其質(zhì)量減輕程度與環(huán)磷酰胺無差異。結(jié)論靈芝代謝產(chǎn)物中的羥基可能參與了抗腫瘤作用。

關(guān)鍵詞：靈芝代謝產(chǎn)物；TNF-α；腫瘤；羥基

靈芝是我國醫(yī)學(xué)寶庫中的靈芝屬藥、食兩用真菌。其在自然界生長(zhǎng)過程中必然要與細(xì)菌等自然界其他微生物爭(zhēng)奪營養(yǎng)，而靈芝作為一種真菌，生長(zhǎng)速度要遠(yuǎn)慢于細(xì)菌，所以作為靈芝能獲勝的法寶之一可能就是其代謝產(chǎn)物，而真菌代謝產(chǎn)物的開發(fā)早已被證明是非常有價(jià)值的，比如歷史上青霉素的發(fā)現(xiàn)就是例證，在這方面我國的發(fā)展步伐卻比較慢，靈芝代謝產(chǎn)物藥理作用的開發(fā)也將豐富我國中藥的用途。對(duì)于靈芝代謝產(chǎn)物的研究目前并不多而且主要集中在其中靈芝多糖的測(cè)定上［1］。但靈芝的代謝產(chǎn)物是否能夠?qū)δ[瘤細(xì)胞有所作用？為解決這個(gè)問題，我們進(jìn)行了如下實(shí)驗(yàn)。

1材料與儀器

1.1試劑環(huán)磷酰胺（CTX）注射液由上海華聯(lián)制藥有限公司生產(chǎn)（生產(chǎn)批號(hào)為071002）。TNF-αELISA試劑盒購于渤海生物公司。肝功能檢測(cè)試劑盒購于上海榮盛公司。

1.2含靈芝的代謝產(chǎn)物培養(yǎng)基取生長(zhǎng)于斜面固體培養(yǎng)基上的靈芝菌泥（約1cm2）接種于100ml液體培養(yǎng)基（含2%黃豆粉，2%蔗糖，0.075%的磷酸二氫鉀，0.03%的硫酸鎂），25℃100r/min條件下培養(yǎng)5d，用濾紙過濾后得到含靈芝的代謝產(chǎn)物培養(yǎng)基。將這些培養(yǎng)基在-20℃條件下保存待用。