導(dǎo)語(yǔ)：省科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目可行性研究報(bào)告一文來(lái)源于網(wǎng)友上傳，不代表本站觀(guān)點(diǎn)，若需要原創(chuàng)文章可咨詢(xún)客服老師，歡迎參考。

一、立項(xiàng)的背景和意義

二十一世紀(jì)的生命科學(xué)將是基因科學(xué),隨著人類(lèi)基因組圖譜的全部破譯，基因治療腫瘤將使醫(yī)學(xué)科學(xué)進(jìn)入一個(gè)嶄新的時(shí)代。基因治療技術(shù)研究的迅速發(fā)展，IL-24在腫瘤治療方面將會(huì)是一座新的里程碑。

基因治療惡性實(shí)體腫瘤是臨床醫(yī)生面臨的挑戰(zhàn)性課題，由于腫瘤易轉(zhuǎn)移的特性，使手術(shù)、化療和放療等傳統(tǒng)治療方法對(duì)晚期腫瘤的治療有限。研究表明，腫瘤生長(zhǎng)的關(guān)鍵因素是血管形成，實(shí)體瘤表達(dá)，如血管生長(zhǎng)因子、堿性成纖細(xì)胞生長(zhǎng)因子和血小板源性生長(zhǎng)因子等血管形成介導(dǎo)腫瘤產(chǎn)生新血管，利用原發(fā)腫瘤的血管的形成而轉(zhuǎn)移。因此，尋找抑制腫瘤生長(zhǎng)和血管形成進(jìn)而阻止腫瘤轉(zhuǎn)移的方法尤為重要，基因療法為惡性實(shí)體腫瘤的治療提供了這種可能性。理想的功能基因表達(dá)產(chǎn)物應(yīng)能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞調(diào)亡、抑制腫瘤生長(zhǎng)和腫瘤血管形成，對(duì)正常組織細(xì)胞無(wú)明顯毒副作用。白細(xì)胞介素-24（IL-24）具有上述功能。目前,利用白細(xì)胞介素-24（IL-24）對(duì)惡性腫瘤的基因治療,是發(fā)達(dá)國(guó)家的研究熱點(diǎn)之一。

白細(xì)胞介素-24（IL-24）是1995年JiangH等人首先克隆并分離出該細(xì)胞因子，原名稱(chēng)黑色瘤分化相關(guān)抗原（mda－7），2002年，mda－7因其分子結(jié)構(gòu)、基因定位和細(xì)胞因子樣特性而被正式命名為白細(xì)胞介素－24（IL-24）。

研究表明，借助腺病毒表達(dá)載體，將人白細(xì)胞介素－24基因轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞，可特異性抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，誘導(dǎo)其調(diào)亡，但不會(huì)影響正常細(xì)胞。IL-24的這種作用在至少50余種人類(lèi)惡性腫瘤細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中得到證實(shí)，包括黑色素瘤、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤、骨肉瘤、乳腺癌、子宮頸癌、肺癌、結(jié)腸癌、鼻咽癌、前列腺癌、胰腺癌等?？梢哉J(rèn)為IL-24是目前發(fā)現(xiàn)的唯一能即抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)又表達(dá)刺激免疫系統(tǒng)的蛋白基因。目前，P53、P10、Rb等抑癌基因正在用于基因治療的臨床試驗(yàn)（其中重組人P53腺病毒注射液已在我國(guó)生產(chǎn)上市，也是世界上第一個(gè)上市的基因治療藥物），但均不具有通過(guò)刺激免疫應(yīng)答來(lái)殺傷腫瘤細(xì)胞的特性。所以，通過(guò)比較可以證明IL-24的研究有著重要的臨床意義。

通過(guò)腺病毒介導(dǎo)人IL-24基因進(jìn)行治療腫瘤的基因治療的技術(shù)，具有非常重要的社會(huì)、理論和臨床意義?；蛑委煯a(chǎn)品使細(xì)胞產(chǎn)生內(nèi)源性的目的蛋白質(zhì)或多肽，產(chǎn)生特異的生物治療。基因治療使給藥更加特異、高效和安全，達(dá)到醫(yī)學(xué)科學(xué)所期望達(dá)到的最高目標(biāo)?；蛑委熕幬飳?duì)基因工程蛋白質(zhì)或者肽類(lèi)藥物也形成嚴(yán)重的挑戰(zhàn)，用基因治療方法可代替反復(fù)使用、費(fèi)用極高的蛋白質(zhì)藥物，一次注射，可帶來(lái)長(zhǎng)久的療效或根治。

據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）統(tǒng)計(jì)，全世界每年有500多萬(wàn)人死于各種癌癥，每年各種癌癥患者多達(dá)2200萬(wàn)人。我國(guó)每年約有600萬(wàn)腫瘤患者，假如有百分之一的患者使用“重組人白細(xì)胞介素-24腺病毒注射液”，治療一個(gè)療程，用藥20支，其用量為120萬(wàn)支，按每支2000元人民幣計(jì)算，國(guó)內(nèi)市場(chǎng)為24億元人民幣，國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)的百分之一為44億元人民幣。所以，基因治療腫瘤是關(guān)系到廣大患者生命安全和生活質(zhì)量的高科技項(xiàng)目。

該項(xiàng)目是我單位獨(dú)立研究的基因治療項(xiàng)目，現(xiàn)已獨(dú)立完成了人白細(xì)胞介素－24基因的克隆。從中國(guó)人外周血中分離的單核細(xì)胞中克隆出人白細(xì)胞介素－24的基因，經(jīng)測(cè)序與國(guó)外公布的人IL-24的基因序列一致，說(shuō)明我們已得到人IL-24的基因。正進(jìn)行重組腺病毒載體的構(gòu)建。

本單位是生物醫(yī)藥研究、開(kāi)發(fā)、生產(chǎn)、經(jīng)營(yíng)的專(zhuān)業(yè)化企業(yè)，是山東省高新技術(shù)企業(yè)，十余年來(lái)承擔(dān)了多個(gè)項(xiàng)目的研究。獨(dú)立研究的IL-2（125ser）是山東省火炬計(jì)劃項(xiàng)目、IL-18是2002年山東省重大科技攻關(guān)項(xiàng)目、G-CSF是濟(jì)南市星火計(jì)劃項(xiàng)目、α-2b干擾素抗病毒口含片是2003年山東省SARS綜合防治技術(shù)研究藥物開(kāi)發(fā)中標(biāo)項(xiàng)目、重組人新型溶栓酶是2003年濟(jì)南市科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目，其中IL-2（125ser）獲省、市、區(qū)科技進(jìn)步獎(jiǎng)，并獲國(guó)家科技部等五部委聯(lián)合頒發(fā)的《國(guó)家重點(diǎn)新產(chǎn)品證書(shū)》。有較強(qiáng)的生物技術(shù)藥物研究開(kāi)發(fā)能力。

該項(xiàng)目的成功開(kāi)發(fā)及產(chǎn)業(yè)化，勢(shì)必將帶動(dòng)我國(guó)整個(gè)生物高新技術(shù)的發(fā)展，并構(gòu)成一個(gè)生物高技術(shù)平臺(tái)，一個(gè)巨大的產(chǎn)業(yè)，一個(gè)新的經(jīng)濟(jì)增長(zhǎng)點(diǎn)。同時(shí),不僅能夠在臨床上有著重要的治療意義，而且能夠?qū)V大腫瘤患者提供一條嶄新的治療途徑，也將會(huì)對(duì)生命科學(xué)的發(fā)展和山東省經(jīng)濟(jì)的發(fā)展起到一定的作用。

二、國(guó)內(nèi)外現(xiàn)狀和發(fā)展趨勢(shì)：

經(jīng)檢索，在國(guó)內(nèi)，只檢索到軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院和蘇州大學(xué)細(xì)胞和分子生物學(xué)教研室對(duì)IL－24基因的克隆及在大腸桿菌中的表達(dá)文獻(xiàn)，未發(fā)現(xiàn)利用腺病毒介導(dǎo)人IL-24基因來(lái)治療腫瘤的報(bào)道。也未發(fā)現(xiàn)利用Admax腺病毒表達(dá)系統(tǒng)來(lái)介導(dǎo)人白細(xì)胞介素－24基因治療腫瘤的專(zhuān)利。所以，我單位研制的重組人白細(xì)胞介素-24腺病毒注射液可形成自己的知識(shí)產(chǎn)權(quán)。

在國(guó)外，只有美國(guó)等少數(shù)發(fā)達(dá)國(guó)家對(duì)攜帶IL-24基因的重組腺病毒進(jìn)行研究，尚未有對(duì)其開(kāi)發(fā)成藥物的報(bào)道。

目前國(guó)內(nèi)未發(fā)現(xiàn)有對(duì)IL-24進(jìn)行藥物研究的單位和個(gè)人。

我單位從上世紀(jì)八十年代中期開(kāi)始對(duì)生物技術(shù)進(jìn)行研究，基本與國(guó)外同行業(yè)同步。已獨(dú)立研制成功了IL-2（125ser）、IL-18、G-CSF、α-2b干擾素抗病毒口含片、重組人新型溶栓酶等生物技術(shù)高科技成果產(chǎn)品。擁有一支素質(zhì)較高、經(jīng)驗(yàn)豐富的科研隊(duì)伍。已對(duì)該項(xiàng)目進(jìn)行了一年多的研究，已完成人白細(xì)胞介素－24基因的克隆。從中國(guó)人外周血中分離的單核細(xì)胞中克隆出人白細(xì)胞介素－24的基因，經(jīng)測(cè)序與國(guó)外公布的人IL-24的基因序列一致，證明我們已得到人IL-24的基因。正進(jìn)行重組腺病毒載體的構(gòu)建。基因治療的關(guān)鍵技術(shù)是表達(dá)系統(tǒng)，腺病毒表達(dá)系統(tǒng)被廣泛用于基因治療、基因功能性研究、反義治療、疫苗開(kāi)發(fā)等領(lǐng)域。我單位利用Admax腺病毒表達(dá)系統(tǒng)來(lái)介導(dǎo)人白細(xì)胞介素－24基因治療腫瘤，Admax腺病毒載體系統(tǒng)比現(xiàn)有的其它腺病毒載體系統(tǒng)更有優(yōu)勢(shì)，具有構(gòu)建簡(jiǎn)單、出毒快、單細(xì)胞病毒產(chǎn)量高等優(yōu)點(diǎn)。

三、現(xiàn)有研究基礎(chǔ)、特色和優(yōu)勢(shì)

1、現(xiàn)階段已達(dá)到的主要技術(shù)指標(biāo)和經(jīng)濟(jì)指標(biāo)

（1）現(xiàn)階段已完成人白細(xì)胞介素－24基因的克隆。

（2）從中國(guó)人外周血中分離的單核細(xì)胞中克隆出人白細(xì)胞介素－24的基因，經(jīng)測(cè)序與國(guó)外公布的人IL-24的基因序列一致，說(shuō)明我們已得到人IL-24的基因。

（3）正進(jìn)行重組腺病毒載體的構(gòu)建。

2、項(xiàng)目的創(chuàng)新點(diǎn)及在人才、資源和產(chǎn)業(yè)方面的特色優(yōu)勢(shì)

重組人白細(xì)胞介素-24腺病毒主要?jiǎng)?chuàng)新點(diǎn)：

（1）、白細(xì)胞介素－24是新發(fā)現(xiàn)的抗腫瘤細(xì)胞因子，國(guó)內(nèi)外均未上市。

（2）、利用Admax腺病毒作載體將IL-24基因介導(dǎo)到人體，對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行基因治療的方法。

腺病毒載體系統(tǒng)一般應(yīng)用人類(lèi)病毒作為載體，以人類(lèi)細(xì)胞作為宿主，因此為人類(lèi)蛋白進(jìn)行準(zhǔn)確的翻譯后加工和適當(dāng)?shù)恼郫B提供了一個(gè)理想的環(huán)境。大多數(shù)人類(lèi)蛋白都可達(dá)到高水平表達(dá)并且具有完全的功能。

腺病毒載體系統(tǒng)可廣泛用于人類(lèi)及非人類(lèi)蛋白的表達(dá)。腺病毒可感染一系列哺乳動(dòng)物細(xì)胞，因此在大多哺乳動(dòng)物細(xì)胞和組織中均可用來(lái)表達(dá)重組蛋白。特別需要指出的是：腺病毒具有嗜上皮細(xì)胞性，而人類(lèi)的大多數(shù)的腫瘤就是上皮細(xì)胞來(lái)源的。因此，腺病毒載體系統(tǒng)具有靶向性，使其可以靶向特定的組織或細(xì)胞內(nèi)復(fù)制增殖，表達(dá)目的基因，直接作用于病灶，抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，誘導(dǎo)其調(diào)亡。

（3）、Admax腺病毒表達(dá)載體具有構(gòu)建簡(jiǎn)單，出毒快，單細(xì)胞病毒產(chǎn)量高等特點(diǎn)。

Admax腺病毒系統(tǒng)是由腺病毒載體鼻祖Dr.FrankGraham在1999年創(chuàng)建的一套重組腺病毒構(gòu)建系統(tǒng)，該系統(tǒng)基本原理是通過(guò)Cre-loxP或FLP-frt重組酶，使共轉(zhuǎn)染到293細(xì)胞中的腺病毒載體穿梭質(zhì)粒和輔助質(zhì)粒（腺病毒基因組質(zhì)粒）在重組酶的作用下產(chǎn)生重組腺病毒。得到的重組病毒是E1/E3缺失的復(fù)制缺型腺病毒。與目前使用最普及的AdEasy系統(tǒng)相比，有一定的優(yōu)勢(shì)：AdMax系統(tǒng)只需要2~4周就能完成從質(zhì)粒構(gòu)建到重組出毒，成功率大于98%（其中95%的克隆含有目的基因），因在真核細(xì)胞內(nèi)重組出毒，保持了對(duì)腺病毒的生存壓力，有助于重組腺病毒的基因組的完整性；而AdEasy系統(tǒng)的出毒成功率只有18-34%（Stratagene公司新版的AdEasyXL系統(tǒng)成功率在94%左右），且在原核細(xì)胞（BJ5183）中完成病毒基因組重組，理論上，失去了生存壓力的腺病毒基因組更容易發(fā)生突變，病毒遺傳背景及活性可能會(huì)受到影響。

人才、資源和產(chǎn)業(yè)方面的特色優(yōu)勢(shì)：

本單位是山東省科技廳認(rèn)定的高新技術(shù)企業(yè)及重點(diǎn)聯(lián)系單位。在人才、資源和產(chǎn)業(yè)化方面具備如下優(yōu)勢(shì)：

1、有研究開(kāi)發(fā)基因藥物的專(zhuān)業(yè)機(jī)構(gòu)--生物技術(shù)研究所。配備有較完善的科研生產(chǎn)檢測(cè)儀器和設(shè)備（DNA合成儀、PCR擴(kuò)增儀、70L貝克曼的發(fā)酵罐、發(fā)瑪西亞的蛋白層析系統(tǒng)、Waters的高效液相、萬(wàn)級(jí)凈化級(jí)別的實(shí)驗(yàn)室等）。

2、擁有一支經(jīng)驗(yàn)豐富、老中青相結(jié)合的科研隊(duì)伍。已開(kāi)發(fā)出的國(guó)家級(jí)新藥“重組人白細(xì)胞介素-2（125ser）”和“重組人粒細(xì)胞集落刺激因子”，并已獲得國(guó)家藥品監(jiān)督管理局頒發(fā)的新藥證書(shū)和批準(zhǔn)文號(hào)，現(xiàn)已投放市場(chǎng)。

3、有一座4000m2的GMP標(biāo)準(zhǔn)的生物藥品生產(chǎn)車(chē)間（GMP證書(shū)編號(hào)：C1064），年生產(chǎn)藥品能力可達(dá)千萬(wàn)支。

4、有完善的科研協(xié)作網(wǎng)絡(luò)。我單位與“美國(guó)俄亥俄州立大學(xué)分子生物學(xué)中心”、“中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)”、“山東大學(xué)藥學(xué)院”等國(guó)內(nèi)外大專(zhuān)院校和科研院所有緊密合作關(guān)系。本項(xiàng)目是與中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)共同合作研究的科研項(xiàng)目。

5、我單位科研工作經(jīng)驗(yàn)豐富，承擔(dān)過(guò)省、市、區(qū)級(jí)科研項(xiàng)目多項(xiàng)。

上述條件，為“重組人白細(xì)胞介素-24腺病毒注射液”的研制奠定了基礎(chǔ)。

四、應(yīng)用或產(chǎn)業(yè)化前景、市場(chǎng)需求

人白細(xì)胞介素-24（IL-24）是目前發(fā)現(xiàn)的唯一能即抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)又表達(dá)刺激免疫系統(tǒng)的具有雙重功效的蛋白基因。研究表明，借助腺病毒表達(dá)載體，將人白細(xì)胞介素－24基因轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞，可特異性抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，誘導(dǎo)其調(diào)亡，但不會(huì)影響正常細(xì)胞。IL-24的這種作用在至少50余種人類(lèi)惡性腫瘤細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中得到證實(shí)，包括黑色素瘤、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤、骨肉瘤、乳腺癌、子宮頸癌、肺癌、結(jié)腸癌、鼻咽癌、前列腺癌、胰腺癌等。

全世界每年有500多萬(wàn)人死于各種癌癥，每年各種癌癥患者多達(dá)2200萬(wàn)人。我國(guó)每年約有600萬(wàn)腫瘤患者，假如有百分之一的患者使用“重組人白細(xì)胞介素-24腺病毒注射液”，治療一個(gè)療程，用藥20支，其用量為120萬(wàn)支，按每支2000元人民幣計(jì)算，國(guó)內(nèi)市場(chǎng)為24億元人民幣，國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)的百分之一為44億元人民幣。

該項(xiàng)目產(chǎn)業(yè)化后，可年產(chǎn)100萬(wàn)支，實(shí)現(xiàn)產(chǎn)值20億元人民幣，年銷(xiāo)售收入可達(dá)12億元人民幣，年利稅6億元人民幣，年創(chuàng)匯2000萬(wàn)美元。

所以，基因治療腫瘤是關(guān)系到廣大患者生命安全和生活質(zhì)量的高科技項(xiàng)目。同時(shí)，對(duì)包裝、印刷、玻璃制品等行業(yè)起到帶動(dòng)作用。

五、研究?jī)?nèi)容與預(yù)期目標(biāo)

研究?jī)?nèi)容：

1、人白細(xì)胞介素-24基因的克隆

2、重組人白細(xì)胞介素-24腺病毒的建立

3、重組人白細(xì)胞介素-24腺病毒注射液的質(zhì)量控制和檢測(cè)方法的建立

4、重組人白細(xì)胞介素-24腺病毒注射液的抗腫瘤實(shí)驗(yàn)

總體目標(biāo)

本項(xiàng)目預(yù)計(jì)投入800萬(wàn)元人民幣?？赏瓿苫A(chǔ)性研究，獲得重組人白細(xì)胞介素-24腺病毒注射液樣品，整理出科研文獻(xiàn)。

本單位現(xiàn)有資產(chǎn)1.6億元人民幣，員工116人。

經(jīng)濟(jì)目標(biāo)

項(xiàng)目完成時(shí)，預(yù)計(jì)年新增產(chǎn)品銷(xiāo)售額3000萬(wàn)元、年新增交稅總額200萬(wàn)元、年新增凈利潤(rùn)1000萬(wàn)元、年新增創(chuàng)（節(jié)）匯200萬(wàn)美元、年新增產(chǎn)值4000萬(wàn)元。

技術(shù)、質(zhì)量指標(biāo)：

參照國(guó)家«人基因治療研究和制劑質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則»、«中國(guó)生物制品規(guī)程»、«中國(guó)藥典»（2000年版）等要求建立重組人白細(xì)胞介素-24腺病毒注射液的質(zhì)量控制和檢測(cè)方法。著重對(duì)重組人白細(xì)胞介素-24腺病毒制品的病毒純度、病毒滴度的測(cè)定和復(fù)制型病毒（RCA）、腺相關(guān)病毒檢測(cè)的方法學(xué)進(jìn)行研究。

1、比活性：病毒比滴度=病毒感染滴度/病毒顆粒數(shù)測(cè)定，>3.3%。

2、復(fù)制型病毒（RCA）的檢測(cè)：A549細(xì)胞檢測(cè)法，每3.0×1010VP中應(yīng)

不高于1RCA（即≤1RCA/3.0×1010VP）。

3、腺相關(guān)病毒的檢測(cè)：采用PCR法，應(yīng)無(wú)腺相關(guān)病毒（AAV）的污染。

4、病毒純度檢測(cè)：采用高效液相色譜法或A260/A280法純度大于95%。

本項(xiàng)目屬科技攻關(guān)項(xiàng)目，主要是完成技術(shù)性研究，取得該技術(shù)領(lǐng)域的科研成果。產(chǎn)業(yè)化達(dá)產(chǎn)后，預(yù)計(jì)可實(shí)現(xiàn)產(chǎn)值10億元人民幣，年銷(xiāo)售收入6億元人民幣，年利稅3億元人民幣，年創(chuàng)匯1000萬(wàn)美元。用腺病毒攜帶IL-24基因治療腫瘤的方法可形成專(zhuān)利。

六、研究方案、技術(shù)路線(xiàn)、組織方式與課題分解

1、重組人白細(xì)胞介素-24腺病毒注射液的技術(shù)方案

1.1重組人白細(xì)胞介素-24腺病毒的建立

（1）人白介素-24基因的克隆

從人外周血單個(gè)核細(xì)胞中提取mRNA，設(shè)計(jì)并合成特異引物，應(yīng)用PCR的方法擴(kuò)增得到人白細(xì)胞介素-24的基因片段。

（2）人白介素－24基因序列的確證

將用PCR擴(kuò)增出的人白介素-24基因，進(jìn)行測(cè)序，并與GeneBank報(bào)道的結(jié)果比較，以確定擴(kuò)增的白介素－24基因序列的正確性。

（3）攜帶人白細(xì)胞介素－24基因腺病毒穿梭質(zhì)粒載體的構(gòu)建與鑒定

采用基因工程的方法，將人白細(xì)胞介素－24基因克隆至腺病毒穿梭質(zhì)粒載體中，通過(guò)限制性?xún)?nèi)切酶圖譜法鑒定人白細(xì)胞介素－24基因是否重組到腺病毒穿梭質(zhì)粒載體中。

（4）重組人白細(xì)胞介素－24腺病毒的構(gòu)建

通過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)，將攜帶人白細(xì)胞介素－24基因腺病毒穿梭質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染293細(xì)胞（人胚腎細(xì)胞），提取重組腺病毒DNA進(jìn)行PCR鑒定。

（5）擴(kuò)增前重組人白細(xì)胞介素－24腺病毒的空斑篩選

利用噬斑純化方法，將感染重組腺病毒的293細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，挑選出單個(gè)重組腺病毒，以保證擴(kuò)增的純度和穩(wěn)定性。

（6）重組人白細(xì)胞介素－24腺病毒的擴(kuò)增、純化

將經(jīng)噬斑純化獲得重組腺病毒大量感染293細(xì)胞，以大量生產(chǎn)重組腺病毒。待感染病毒的293細(xì)胞成熟后收獲細(xì)胞，經(jīng)反復(fù)凍融及離心等方法，除去細(xì)胞碎片，收集上清，獲得重組腺病毒。并通過(guò)超濾和離子交換的方法來(lái)純化和濃縮重組腺病毒，從而獲得大量、高滴度、高純度的重組人白細(xì)胞介素-24腺病毒樣品。

1.2、重組人白細(xì)胞介素-24腺病毒注射液的質(zhì)量控制和檢測(cè)方法的建立

參照國(guó)家«人基因治療研究和制劑質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則»、«中國(guó)生物制品規(guī)程»、«中國(guó)藥典»（2000年版）等要求建立重組人白細(xì)胞介素-24腺病毒注射液的質(zhì)量控制和檢測(cè)方法。著重對(duì)重組人白細(xì)胞介素-24腺病毒制品的病毒的純度、病毒滴度的測(cè)定和復(fù)制型病毒（RCA）、腺相關(guān)病毒檢測(cè)的方法學(xué)研究。

（1）比活性：病毒比滴度=病毒感染滴度/病毒顆粒數(shù)測(cè)定

（2）復(fù)制型病毒（RCA）的檢測(cè)：A549細(xì)胞檢測(cè)法，每3.0×1010VP中應(yīng)不高于1RCA（即≤1RCA/3.0×1010VP）

（3）腺相關(guān)病毒的檢測(cè)

采用PCR法，應(yīng)無(wú)腺相關(guān)病毒（AAV）的污染。

（4）病毒純度檢測(cè)

采用高效液相色譜法或A260/A280法純度大于95%。

1.3重組人白細(xì)胞介素-24腺病毒注射液的抗腫瘤實(shí)驗(yàn)

將重組人白細(xì)胞介素-24腺病毒注射到腫瘤細(xì)胞，觀(guān)察重組人白細(xì)胞介素-24腺病毒抗腫瘤效果。

2、本企業(yè)在生產(chǎn)場(chǎng)地、公用工程、輔助設(shè)施等方面已具備的條件和需新增加的基本建設(shè)內(nèi)容。

我單位有研究開(kāi)發(fā)基因藥物的專(zhuān)業(yè)性生物技術(shù)研究所，有著從事多年生物技術(shù)藥物研究和開(kāi)發(fā)經(jīng)驗(yàn)，曾研制出“注射用重組人白介素-2（125Ser）、注射用重組人白介素-18、α-2b干擾素口含片、新型溶栓酶”等高科技生物藥品，具有良好的科研基礎(chǔ)。配備有較完善的科研生產(chǎn)檢測(cè)儀器和設(shè)備：DNA合成儀、PCR擴(kuò)增儀、70L貝克曼的發(fā)酵罐、發(fā)瑪西亞的蛋白層析系統(tǒng)、Waters的高效液相、萬(wàn)級(jí)凈化級(jí)別的實(shí)驗(yàn)室等?，F(xiàn)有生物藥品GMP生產(chǎn)車(chē)間和兩條生物藥品生產(chǎn)線(xiàn)，具備良好的生產(chǎn)條件。

3、述生產(chǎn)過(guò)程中“三廢”排放、“三廢”處理的措施和生產(chǎn)過(guò)程中職業(yè)危害因素分析及采取的保護(hù)措施方案。

重組人白細(xì)胞介素-24腺病毒注射液研制和生產(chǎn)過(guò)程，無(wú)三廢排放。

4、特殊行業(yè)許可證報(bào)批情況

我單位企業(yè)法人營(yíng)業(yè)執(zhí)照（執(zhí)照號(hào)：3700001806768）、藥品生產(chǎn)企業(yè)許可證（證號(hào)：魯01Sz20010020）和藥品GMP證書(shū)（證書(shū)編號(hào)：C1064）等證照齊全。

5、說(shuō)明本項(xiàng)目推廣應(yīng)用計(jì)劃和保障措施

（1）本項(xiàng)目研制成功后，我單位自行生產(chǎn)。

（2）本單位有一座4000m2GMP標(biāo)準(zhǔn)的生物藥品生產(chǎn)車(chē)間，具有完備的生產(chǎn)儀器、設(shè)備，年生產(chǎn)能力可達(dá)上千萬(wàn)支生物制劑。

（3）本單位有專(zhuān)業(yè)銷(xiāo)售公司，銷(xiāo)售網(wǎng)絡(luò)遍布全國(guó)30多個(gè)省市自治區(qū)，本項(xiàng)目產(chǎn)業(yè)化后即可上市推廣。

（4）該項(xiàng)目有著巨大的社會(huì)意義和經(jīng)濟(jì)效益，公司對(duì)該項(xiàng)目極為重視，不但組織了科研能力較強(qiáng)的專(zhuān)職研究隊(duì)伍，加大資金的投入，而且組織了由5位國(guó)內(nèi)著名院士、6名知名專(zhuān)家組成的專(zhuān)家組，對(duì)“重組人白細(xì)胞介素－24注射液”基因治療項(xiàng)目進(jìn)行了論證指導(dǎo)，保證了本項(xiàng)目的可行性。

七、年度計(jì)劃內(nèi)容：

本項(xiàng)目計(jì)劃為三年

2006年1月-2006年6月載體的構(gòu)建經(jīng)費(fèi)投入預(yù)計(jì)300萬(wàn)元

2006年7月-2006年12月載體的鑒定經(jīng)費(fèi)投入預(yù)計(jì)100萬(wàn)元

2007年1月-2007年6月重組腺病毒的擴(kuò)增純化經(jīng)費(fèi)投入預(yù)計(jì)100萬(wàn)元

2007年7月-2007年12月重組腺病毒的質(zhì)量研究經(jīng)費(fèi)投入預(yù)計(jì)100萬(wàn)元

2008年1月-2008年12月重組腺病毒的抗腫瘤細(xì)胞實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)投入預(yù)計(jì)200萬(wàn)元

八、主要研究人員和單位簡(jiǎn)況及具備的條件

1、主要參加人員情況

鄒立家，研究生導(dǎo)師，藥理、藥學(xué)專(zhuān)業(yè)教授，在藥理、藥學(xué)學(xué)科方面有著很深的造詣和貢獻(xiàn)，有著作5部，科研成果8項(xiàng)。曾參加研制開(kāi)發(fā)IL-2（125Ser）、IL-18的工作；現(xiàn)參加白介素-24（IL-24）的研制開(kāi)發(fā)工作，并任課題組負(fù)責(zé)人。

韓代書(shū)，博士、教授，中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)博士生導(dǎo)師，細(xì)胞生物學(xué)專(zhuān)業(yè)教授，在細(xì)胞生物學(xué)學(xué)科方面有著很深的造詣和貢獻(xiàn)，有數(shù)十篇論在國(guó)際刊物上發(fā)表。是本單位科研課題組主要成員。

王加旺，博士，微生物專(zhuān)業(yè)，有6篇論文在國(guó)家級(jí)刊物上發(fā)表，曾參加IL-2（125Ser）、IL-18的工作、α-2b干擾素抗病毒口含片、新型溶栓酶等項(xiàng)目的研究開(kāi)發(fā)，是本單位研究所課體組主要成員。

苑波，博士后、教授，長(zhǎng)期在美國(guó)從事基因組學(xué)科技研究，是美國(guó)著名的基因組學(xué)科學(xué)家，2003年被美國(guó)政府評(píng)為“十大科技青年”，近年來(lái)一直與我單位合作。

課題組其他成員均在生物技術(shù)研究所長(zhǎng)期工作，是“注射用重組人白介素-2（125Ser）”課題組原班人馬，他們?cè)凇鞍捉樗?2（125Ser）”、“rhG-CSF”和“IL-18”等高科技產(chǎn)品的研制開(kāi)發(fā)過(guò)程中做了大量的工作，取得了優(yōu)異的成績(jī)，被濟(jì)南市科技局評(píng)為“科技先進(jìn)集體”、被濟(jì)南市藥監(jiān)局評(píng)為“科技進(jìn)步先進(jìn)集體”。

2、單位法人近幾年來(lái)研究開(kāi)發(fā)業(yè)績(jī)

我單位法人長(zhǎng)期從事科研工作，帶領(lǐng)企業(yè)承擔(dān)了國(guó)家級(jí)、省級(jí)、市級(jí)星火計(jì)劃、火炬計(jì)劃、科技攻關(guān)、技術(shù)改造、重點(diǎn)工業(yè)項(xiàng)目等十幾項(xiàng)科研開(kāi)發(fā)及產(chǎn)業(yè)化項(xiàng)目，被廣泛應(yīng)用于社會(huì)各重要領(lǐng)域，多項(xiàng)成果填補(bǔ)了國(guó)家空白，取得了令人矚目的成績(jī)，受到各級(jí)政府和社會(huì)各界的充分肯定和高度評(píng)價(jià)。

主要科技成果3項(xiàng)，科技著作2部。并領(lǐng)導(dǎo)本單位全體科研人員研制出了“注射用重組人白介素-2（125Ser）”、“重組人粒細(xì)胞集落刺激因子注射液（rhG-CSF）”、“注射用重組人白細(xì)胞介素-18（IL-18）”、“新型重組溶栓酶”、“α-2b干擾素口含片”等多項(xiàng)生物技術(shù)藥物。“注射用重組人白介素-2（125Ser）”和“重組人粒細(xì)胞集落刺激因子注射液（rhG-CSF）”兩項(xiàng)新藥分別被列為《國(guó)家星火計(jì)劃項(xiàng)目》和《山東省火炬計(jì)劃》，《山東省技術(shù)改造導(dǎo)向計(jì)劃》，《濟(jì)南市三十項(xiàng)重點(diǎn)技術(shù)改造項(xiàng)目》。其中“注射用重組人白介素-2（125Ser）”的各項(xiàng)主要技術(shù)指標(biāo)，均達(dá)到國(guó)際領(lǐng)先水平，填補(bǔ)了國(guó)內(nèi)空白。被國(guó)家五部委（中華人民共和國(guó)科學(xué)技術(shù)部、國(guó)家稅務(wù)總局、中華人民共和國(guó)商務(wù)部、中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局、國(guó)家環(huán)境保護(hù)總局）認(rèn)定為“國(guó)家重點(diǎn)新產(chǎn)品”，獲山東省科技進(jìn)步一等獎(jiǎng)。

在抗癌科研方面也做了長(zhǎng)期大量的工作，正式發(fā)表的文章已被國(guó)外學(xué)術(shù)雜志引用，被聘為“山東省抗癌協(xié)會(huì)”常務(wù)理事，2002年被“國(guó)際兒童癌癥治療聯(lián)合會(huì)”聘為高級(jí)顧問(wèn)。

企業(yè)投資上億元建起了生物工程藥品生產(chǎn)基地。建有GMP生物制藥生產(chǎn)車(chē)間、科研綜合樓、辦公樓等16000多平方米的基礎(chǔ)設(shè)施，并從發(fā)達(dá)國(guó)家引進(jìn)了先進(jìn)的科研、生產(chǎn)設(shè)備儀器，建立了產(chǎn)學(xué)研一體化的產(chǎn)業(yè)基礎(chǔ)。

3、單位技術(shù)裝備水平、實(shí)驗(yàn)儀器狀況。

（1）我單位現(xiàn)已具備4000m2的GMP生產(chǎn)車(chē)間（GMP證書(shū)編號(hào)：C1064）

（2）研究開(kāi)發(fā)基因藥物的生物技術(shù)研究所，多年從事生物技術(shù)藥物的研究和開(kāi)發(fā)，具有良好的科研基礎(chǔ)。

（3）研究所配備有較完善的科研生產(chǎn)檢測(cè)儀器和設(shè)備：DNA合成儀、PCR擴(kuò)增儀、70L貝克曼的發(fā)酵罐、發(fā)瑪西亞的蛋白層析系統(tǒng)、Waters的高效液相和萬(wàn)級(jí)凈化級(jí)別的實(shí)驗(yàn)室等。

九、經(jīng)費(fèi)預(yù)算

項(xiàng)目總投資800萬(wàn)元，申請(qǐng)科技三項(xiàng)經(jīng)費(fèi)100萬(wàn)元，自籌440萬(wàn)元，銀行貸款250萬(wàn)元，省科技經(jīng)費(fèi)撥款10萬(wàn)元。其中已完成投資100萬(wàn)元。

劃項(xiàng)目可行性研究報(bào)告

編制提綱

一、立項(xiàng)的背景和意義

主要說(shuō)明：

1、技術(shù)來(lái)源，包括國(guó)外技術(shù)、國(guó)內(nèi)技術(shù)、自有技術(shù)及合作開(kāi)發(fā)、引進(jìn)消化吸收。

2、研發(fā)形式，包括與本市、本省、國(guó)內(nèi)外院校及研發(fā)機(jī)構(gòu)合作。

3、曾列入國(guó)家哪類(lèi)科技計(jì)劃項(xiàng)目、獲獎(jiǎng)及專(zhuān)利情況。

4、對(duì)國(guó)家或我市經(jīng)濟(jì)和社會(huì)發(fā)展的意義作用。

二、國(guó)內(nèi)外現(xiàn)狀和發(fā)展趨勢(shì)〔包括知識(shí)產(chǎn)權(quán)現(xiàn)狀〕

主要說(shuō)明：

1、國(guó)內(nèi)外基本情況及發(fā)展趨勢(shì)。

2、申請(qǐng)承擔(dān)單位目前研發(fā)應(yīng)用情況。

三、現(xiàn)有研究基礎(chǔ)、特色和優(yōu)勢(shì)

主要說(shuō)明：

1、現(xiàn)階段已達(dá)到的主要技術(shù)指標(biāo)和經(jīng)濟(jì)指標(biāo)。

2、項(xiàng)目創(chuàng)新點(diǎn)及在人才、資源和產(chǎn)業(yè)方面的特色優(yōu)勢(shì)。

四、應(yīng)用或產(chǎn)業(yè)化前景、市場(chǎng)需求。

主要說(shuō)明：

1、結(jié)合發(fā)展趨勢(shì)和基礎(chǔ)優(yōu)勢(shì)說(shuō)明，主要應(yīng)用領(lǐng)域及對(duì)相關(guān)產(chǎn)業(yè)的帶動(dòng)作用及國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)需求。

2、具體說(shuō)明已有和有待開(kāi)發(fā)的市場(chǎng)情況。

五、研究?jī)?nèi)容與預(yù)期目標(biāo)(此欄目各項(xiàng)指標(biāo)是項(xiàng)目立項(xiàng)后，簽定合同的主要內(nèi)容，也是項(xiàng)目驗(yàn)收的主要依據(jù))

1、總體目標(biāo)，包括項(xiàng)目執(zhí)行期間預(yù)計(jì)投資總額、項(xiàng)目完成時(shí)實(shí)現(xiàn)年生產(chǎn)能力、單位資產(chǎn)規(guī)模和單位人員規(guī)模等。

2、經(jīng)濟(jì)目標(biāo)，包括項(xiàng)目實(shí)施期間實(shí)際達(dá)到的年度指標(biāo)、完成時(shí)預(yù)計(jì)可實(shí)現(xiàn)的年銷(xiāo)售收入、年交稅總額、年凈利潤(rùn)、年創(chuàng)匯額等。

3、技術(shù)、質(zhì)量指標(biāo)，包括項(xiàng)目完成時(shí)，項(xiàng)目達(dá)到的主要技術(shù)性能指標(biāo)、單位通過(guò)的質(zhì)量認(rèn)證體系、產(chǎn)品執(zhí)行的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、產(chǎn)品通過(guò)的國(guó)家相關(guān)行業(yè)許可認(rèn)證以及獲得專(zhuān)利等知識(shí)產(chǎn)權(quán)情況。

六、研究方案、技術(shù)路線(xiàn)、組織方式與課題分解

主要說(shuō)明：

1、技術(shù)方案，指技術(shù)路線(xiàn)、關(guān)鍵技術(shù)、工藝流程，主要技術(shù)參數(shù)等。

2、本企業(yè)在生產(chǎn)場(chǎng)地、公用工程、輔助設(shè)施等方面已具備的條件和需新增加的基本建設(shè)內(nèi)容。

3、簡(jiǎn)述生產(chǎn)過(guò)程中“三廢”排放、“三廢”處理的措施和生產(chǎn)過(guò)程中職業(yè)危害因素分析及采取的保護(hù)措施方案。

4、特殊行業(yè)許可證報(bào)批情況，包括國(guó)家專(zhuān)賣(mài)、專(zhuān)控產(chǎn)品、醫(yī)藥產(chǎn)品、交通、安全產(chǎn)品、壓力容器產(chǎn)品、電信產(chǎn)品等許可報(bào)批情況說(shuō)明。

5、說(shuō)明本項(xiàng)目推廣應(yīng)用計(jì)劃和保障措施。

6、組織方式與課題分解，如果是兩家以上單位聯(lián)合承擔(dān)，須說(shuō)明具體分工及聯(lián)合優(yōu)勢(shì)。

七、年度計(jì)劃內(nèi)容

分年度說(shuō)明項(xiàng)目執(zhí)行過(guò)程中的年度目標(biāo)；年度工作內(nèi)容及經(jīng)費(fèi)投入。

八、主要研究人員和單位簡(jiǎn)況及具備的條件

（注：可行性研究報(bào)告中單位名稱(chēng)和研究人員的姓名不得出現(xiàn)，單位名稱(chēng)均以“本單位”代替，否則視為無(wú)效）

主要說(shuō)明：

1、主要研究人員情況，需說(shuō)明所學(xué)專(zhuān)業(yè)、現(xiàn)從事專(zhuān)業(yè)、學(xué)歷、學(xué)位、技術(shù)職稱(chēng)、職務(wù)及取得的主要科技成果或論文、專(zhuān)利等。

2、簡(jiǎn)述單位法人及近幾年來(lái)研究開(kāi)發(fā)業(yè)績(jī)。

3、簡(jiǎn)述單位技術(shù)裝備水平、試驗(yàn)儀器狀況。

九、經(jīng)費(fèi)預(yù)算

主要說(shuō)明：項(xiàng)目新增資金來(lái)源，包括企業(yè)自有、銀行貸款、申請(qǐng)各級(jí)科技三項(xiàng)費(fèi)及其他資金。

注：封面“領(lǐng)域”一欄，按立項(xiàng)申報(bào)指南確定的領(lǐng)域或?qū)ｍ?xiàng)計(jì)劃名稱(chēng)填寫(xiě)。