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篇1

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料及試劑

人骨骼肌細(xì)胞株（HSKMC）從中國(guó)科學(xué)院昆明細(xì)胞所購(gòu)買。流式細(xì)胞儀購(gòu)自BD公司，F(xiàn)luo-3 AM鈣離子熒光探針試劑盒購(gòu)自invitrogen公司，Olympus熒光顯微鏡，細(xì)胞周期與凋亡檢測(cè)試劑盒購(gòu)自武漢碧云天公司。

1.2 方法

1.2.1 HSKMC細(xì)胞培養(yǎng) HSKMC細(xì)胞復(fù)蘇后，將細(xì)胞收入離心管中，1000 r/min離心10 min，棄上清，用高糖DMEM培養(yǎng)液（含20%胎牛血清，10 0000 U/L青霉素、100 mg/L鏈霉素）混勻細(xì)胞，轉(zhuǎn)入25 mL玻璃培養(yǎng)瓶中，在37 ℃、5% CO2濃度及飽和濕度條件下培養(yǎng)，次日換液，以后根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)情況每48～72 h更換培養(yǎng)液一次，每周傳代1～2次。 [選自《中華急診醫(yī)學(xué)雜志》2014年第8期,專業(yè)提供寫(xiě)作論文服務(wù)，歡迎光臨.]

1.2.2 流式細(xì)胞儀鈣離子內(nèi)流檢測(cè)熱打擊對(duì)HSKMC細(xì)胞膜通透性的影響 將Fluo-3AM鈣離子熒光探針溶于1 mL DMSO中，制成1 μg/μL，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，按1×104個(gè)/皿密度鋪入60 mm×15 mm細(xì)胞培養(yǎng)皿，培養(yǎng)至單層融合后，給予消化，然后將懸浮液按下述方法給予刺激：①對(duì)照組（即將細(xì)胞置于標(biāo)準(zhǔn)37 ℃、5%CO2濃度培養(yǎng)箱中同其余各組等時(shí)間培養(yǎng)）；②43 ℃熱打擊組（將細(xì)胞置于43 ℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1 h）。打擊后同一時(shí)間每瓶懸浮液按2 μL/100 μL加入Fluo-3AM鈣離子熒光探針，置于標(biāo)準(zhǔn)37 ℃、5%CO2濃度培養(yǎng)箱共同避光孵育1 h，予以上機(jī)檢測(cè)。

1.2.3 考馬斯亮藍(lán)R-250染色法檢測(cè)熱打擊對(duì)HSKMC細(xì)胞骨架影響 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，消化后按5×103個(gè)/片密度鋪入6孔板培養(yǎng)玻片，培養(yǎng)至單層融合后，按下述方法給予刺激：①對(duì)照組（即將細(xì)胞置于標(biāo)準(zhǔn)37 ℃、5%CO2濃度培養(yǎng)箱中同其余各組等時(shí)間培養(yǎng)）；②43 ℃熱打擊組（將細(xì)胞置于43 ℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1 h）。應(yīng)用考馬斯亮藍(lán)R250染色：①配制M-緩沖液；②傾棄培養(yǎng)上清，加入1 mL PBS沖洗3次；③吸去PBS，用1.5%TritonX-100搖床震蕩處理8 min，3次；④吸去TritonX-100，用M-緩沖液搖床震蕩洗4次，每次3 min；⑤用3%戊二醛固定10 min，給予M-緩沖液洗3次，每次3 min；⑥用0.2%考馬斯亮藍(lán)R250震蕩染色40 min；⑦蒸餾水洗3次，每次孵箱烘干；⑧然后將細(xì)胞玻片置于載玻片上，加蓋玻片，于普通光學(xué)顯微鏡下觀察；⑨如染色效果好，可用二甲苯處理樣品，5 min，兩次，最后一次不要等樣品干；⑩加一滴中性樹(shù)膠，加蓋玻片封片，制成永久切片。普通光學(xué)顯微鏡高倍鏡下照片。

1.2.4 流式細(xì)胞儀檢測(cè)熱打擊對(duì)HSKMC細(xì)胞周期改變 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，按1×104個(gè)/皿密度鋪入60 mm×15 mm細(xì)胞培養(yǎng)皿，培養(yǎng)至單層融合，按下述方法給予刺激：①對(duì)照組（即將細(xì)胞置于標(biāo)準(zhǔn)37 ℃、5%CO2濃度培養(yǎng)箱中同其余各組等時(shí)間培養(yǎng)）；②43 ℃熱打擊組（將細(xì)胞置于43 ℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1 h）。將43 ℃熱打擊組繼續(xù)置于標(biāo)準(zhǔn)37 ℃、5%CO2濃度培養(yǎng)箱孵育，于0、6、18、24 h分別取出后消化，用胰酶消化細(xì)胞，至細(xì)胞可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來(lái)時(shí)，加入培養(yǎng)液，吹打下所有的貼壁細(xì)胞，并輕輕吹散細(xì)胞。具體操作按武漢碧云天公司細(xì)胞周期與凋亡檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。染色完成后在24 h內(nèi)完成流式檢測(cè)。用流式細(xì)胞儀在激發(fā)波長(zhǎng)488 nm波長(zhǎng)處檢測(cè)紅色熒光，同時(shí)檢測(cè)光散射情況。采用適當(dāng)分析軟件進(jìn)行細(xì)胞DNA含量分析和光散射分析。

2 結(jié)果

2.1 熱打擊對(duì)HSKMC細(xì)胞膜通透性的影響

流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果提示，給予培養(yǎng)人HSKMC細(xì)胞不同溫度梯度熱打擊1 h后，如圖1所示，43 ℃熱打擊組鈣離子流式檢測(cè)的中位數(shù)為91.63，37 ℃對(duì)照組中位數(shù)為22.98。

2.2 熱打擊對(duì)HSKMC細(xì)胞骨架影響

本實(shí)驗(yàn)中，同對(duì)照組相比，隨著熱打擊程度加強(qiáng)，顯微鏡高倍鏡下可見(jiàn)骨骼肌細(xì)胞骨架逐漸出現(xiàn)變粗、變短、出現(xiàn)明顯的應(yīng)力纖維，見(jiàn)圖2。

2.3 熱打擊對(duì)HSKMC細(xì)胞細(xì)胞周期改變

同正常對(duì)照組相比，骨骼肌細(xì)胞在熱打擊情況下，DNA含量與細(xì)胞周期中各期百分構(gòu)成比統(tǒng)計(jì)結(jié)果分別見(jiàn)圖3及表1。3 討論

胞漿Ca2+是細(xì)胞的第2信使。細(xì)胞內(nèi)鈣不僅作為一種重要的第2信使廣泛參與細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)、分泌、代謝和分化等多種細(xì)胞功能活動(dòng)的調(diào)節(jié)，而且胞內(nèi)鈣離子濃度的變化與調(diào)控對(duì)于參與維持存在于細(xì)胞質(zhì)膜或細(xì)胞器膜兩側(cè)的跨膜梯度差，以及介導(dǎo)細(xì)胞對(duì)外界刺激的應(yīng)答反應(yīng)具有重要的調(diào)節(jié)作用[13]。研究發(fā)現(xiàn)， 鈣在細(xì)胞損傷過(guò)程中起重要作用，各種因素導(dǎo)致的細(xì)胞或細(xì)胞器內(nèi)鈣過(guò)度集聚可引起細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能損害，線粒體和細(xì)胞內(nèi)鈣異常增加程度常作為細(xì)胞損傷指征之一[14]。

引起橫紋肌溶解的一個(gè)重要的理論就是線粒體Ca2+超載導(dǎo)致線粒體功能障礙[15]。細(xì)胞內(nèi)外的Ca2+水平變化是微小和迅速的，極難測(cè)定，目前定量這些變化在技術(shù)上仍存在一定困難[16]。通過(guò)測(cè)定熒光強(qiáng)度來(lái)反映細(xì)胞中的鈣離子濃度是目前普遍采用的細(xì)胞內(nèi)鈣離子檢測(cè)方法。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)應(yīng)用流式細(xì)胞儀及Fluo-3/AM檢測(cè)不同溫度熱打擊后細(xì)胞內(nèi)鈣離子變化。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，F(xiàn)luo-3/AM負(fù)載的HSKMC細(xì)胞在37 ℃基礎(chǔ)狀態(tài)下就有少量鈣離子內(nèi)流，但隨著熱打擊溫度及時(shí)間延長(zhǎng)，43 ℃熱打擊組鈣離子流式檢測(cè)的中位值為91.63，而37 ℃對(duì)照組中位值僅為22.98，提示細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度明顯增加，說(shuō)明在熱打擊的情況下造成細(xì)胞鈣離子內(nèi)流效應(yīng)，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)鈣超載，最終導(dǎo)致骨骼肌細(xì)胞損傷、壞死。

細(xì)胞骨架是細(xì)胞內(nèi)不同蛋 白質(zhì)纖維的聚合物和各種調(diào)控蛋白交錯(cuò)連接的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，它參與細(xì)胞分裂及運(yùn)動(dòng)、細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)運(yùn)輸?shù)榷喾N功能，在維持真核細(xì)胞的形態(tài)、承受外力、胞內(nèi)運(yùn)輸、變形運(yùn)動(dòng)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等方面發(fā)揮著重要的作用，而且還參與許多重要的生命活動(dòng)，包括染色體分離、細(xì)胞中各類小泡和細(xì)胞器的定向轉(zhuǎn)運(yùn)以及白細(xì)胞遷移、游動(dòng)、神經(jīng)細(xì)胞軸突伸展等[17-18]。一般而言，應(yīng)力纖維是支撐細(xì)胞形態(tài)的主要結(jié)構(gòu)，其表達(dá)的改變往往代表細(xì)胞的變形和增殖等變化[19]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)應(yīng)用考馬斯亮藍(lán)R250染色法檢測(cè)熱打擊對(duì)HSKMC細(xì)胞骨架影響，隨著熱打擊時(shí)間及程度加強(qiáng)，同對(duì)照組相比，顯微鏡高倍鏡下可見(jiàn)HSKMC細(xì)胞骨架逐漸出現(xiàn)變粗、變短，出現(xiàn)明顯的應(yīng)力纖維。提示熱打擊可改變HSKMC骨架結(jié)構(gòu)，增加HSKMC通透性，同時(shí)使骨架失去正常的網(wǎng)狀有序排列結(jié)構(gòu)，引起細(xì)胞收縮，使HSKMC間隙增大，最終會(huì)導(dǎo)致HSKMC結(jié)構(gòu)和功能出現(xiàn)改變。

多細(xì)胞有機(jī)體的發(fā)生與發(fā)育有賴于細(xì)胞增殖、分化和死亡的精密結(jié)合， 即細(xì)胞周期的正常運(yùn)行。本研究通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)熱打擊后骨骼肌細(xì)胞細(xì)胞周期分布，發(fā)現(xiàn)骨骼肌細(xì)胞在熱打擊情況下，各組G0/G1期DNA相對(duì)含量在44.13～62.98之間，與正常對(duì)照組對(duì)比，當(dāng)細(xì)胞離開(kāi)熱打擊環(huán)境后培養(yǎng)18 h前G0/G1期DNA相對(duì)含量明顯高于對(duì)照組，培養(yǎng)第18小時(shí)才恢復(fù)同對(duì)照組基本相同，說(shuō)明熱打擊情況下，細(xì)胞周期出現(xiàn)阻滯，細(xì)胞被阻滯在G0/G1期，細(xì)胞內(nèi)部活動(dòng)減緩，處于“休眠”狀態(tài)，不能進(jìn)一步發(fā)展到S期和G2/M期，從而不能完成整個(gè)細(xì)胞的分裂過(guò)程，大約18 h左右才恢復(fù)至正常狀態(tài)。

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篇2

[關(guān)鍵詞]衰老； 血管老化； 細(xì)胞骨架；人參三七川芎提取物

[Abstract]To observe the effect of extracts of ginseng， notoginseng， and Chuanxiong Rhizome on the cytoskeleton protein F-actin and G-actin of the replicative senescence vascular smooth muscle cells， with human aortic smooth muscle cells （HASMC） as the research object， and the replicative senescence 9th generation cells as the senescence models， the experiment was divided into youth group （5th generation cells）， model group （9th generation cells）， Chinese medicine low dose group （100 mg?L-1）， middle dose group （200 mg?L-1）， and high dose group （400 mg?L-1） and resveratrol group （10 μmol?L-1）. The intervention time was 48 h. β-Galactosidase specific staining method was used to calculate the ratio of blue dyeing cells. CCK-8 method was used to detect the cells proliferation. The flow cytometry was used to analyze the cell cycle. Immunofluorescent staining was used to observe morphological changes of F-actin and G-actin. The western blot assay was used to determine the expression of F-actin protein. Compared with the model group， the Chinese medicine groups and resveratrol group significantly reduced the number of blue dyeing cells， improved the ability of cells proliferation， reduced the number of cells in G0/G1 phase， increased the number of cells in S phase， and reduced the protein expression of F-actin and the formation of stress fibers， with obvious intervention effect and statistically significant difference. Therefore， the replicative senescence vascular smooth muscle cells can be used as the models for senescence research， with significant changes in morphology and protein expression of cytoskeleton protein F-actin and G-actin in the process of cells aging. The extracts of ginseng， notoginseng， and Chuanxiong Rhizome have obvious intervention effect on F-actin and G-actin， and it might be indirectly associated with delaying the aging of blood vessels.

[Key words]senescence； vascular aging； cytoskeleton； extracts of ginseng， notoginseng， and Chuanxiong Rhizoma

目前我國(guó)已進(jìn)入老齡化社會(huì)，且形勢(shì)十分嚴(yán)峻，預(yù)計(jì)到2050年，老齡化將達(dá)到峰值，65歲及以上人口將超過(guò)3億，占總?cè)丝诘?0%以上[1]。衰老是疾病發(fā)生重要的決定性因素[2]，能夠加速心血管疾病的其他危險(xiǎn)因子。血管老化是人體衰老發(fā)生的關(guān)鍵因素，不僅導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生，促進(jìn)機(jī)體衰老的進(jìn)程，而且可以誘發(fā)多種疾病[3]。血管平滑肌細(xì)胞（vascular smooth muscle cells，VSMCs）作為血管壁中膜的主要細(xì)胞成分，其表型轉(zhuǎn)化及伴隨出現(xiàn)的生物學(xué)行為改變是血管老化的重要病理學(xué)基礎(chǔ)[4]。目前有研究表明，細(xì)胞骨架的動(dòng)態(tài)改變是促使平滑肌細(xì)胞遷移、增殖及表型變化的重要細(xì)胞內(nèi)信號(hào)[5]。肌動(dòng)蛋白（actin）是細(xì)胞骨架微絲的主要成分，通常以單體（G-actin）或聚合體（F-actin）形式存在于細(xì)胞內(nèi)，是研究 VSMCs中細(xì)胞骨架改變的重要檢測(cè)指標(biāo)，且其表達(dá)變化受細(xì)胞內(nèi)相關(guān)信號(hào)因子的調(diào)控，如熱休克蛋白27（heat shock protein 27，HSP27）、整合素蛋白和凝溶膠蛋白等[6]，其中HSP27調(diào)控作用最為肯定。

本課題組一直致力于益氣活血中藥延緩血管老化的研究，對(duì)增齡導(dǎo)致的生理性血管老化和高血壓病導(dǎo)致的病理性血管老化進(jìn)行了較系統(tǒng)的研究，同時(shí)，明確了益氣活血中藥延緩血管老化的一些關(guān)鍵作用機(jī)制，比如抗氧化應(yīng)激、抗AngⅡ干預(yù)等，并明確了益氣活血中藥對(duì)血管老化的干預(yù)療效。本研究以人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞骨架的微絲蛋白F-actin和G-actin為對(duì)象，觀察益氣活血中藥人參三七川芎提取物對(duì)骨架蛋白F-actin和G-actin的干預(yù)作用，為進(jìn)一步研究細(xì)胞骨架與血管老化的關(guān)系提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1材料

人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞HASMC（美國(guó)Sciencell公司，Cat No：6110，Lot No：7463）。

SMCM基礎(chǔ)培養(yǎng)基（美國(guó)Sciencell公司）；胎牛血清（FBS，美國(guó)Sciencell公司）；生長(zhǎng)因子（SMCGS，美國(guó)Sciencell公司）；雙抗P/S Solution（美國(guó)Sciencell公司）；DPBS溶液（美國(guó)Sciencell公司）；細(xì)胞凍存液CFM（美國(guó)Sciencell公司）；胰酶/EDTA消化酶（美國(guó)Sciencell公司）；細(xì)胞衰老特異性β-半乳糖苷酶檢測(cè)試劑盒（杰美基因醫(yī)藥上海科技有限公司）；細(xì)胞DNA含量檢測(cè)試劑盒（細(xì)胞周期）（南京凱基生物科技發(fā)展有限公司）；CCK-8增殖試劑盒（上海東仁公司）；4%多聚甲醛（北京索萊寶公司）；Triton X-100穿透液（北京索萊寶公司）；羅丹明鬼筆環(huán)肽（美國(guó)Molecular Probes）；Alexa Flour 488（美國(guó)Molecular Probes）；二甲基亞砜（DMSO，北京索萊寶公司）；噻唑藍(lán)MTT（北京索萊寶公司）；小鼠F-actin單克隆抗體（英國(guó)Abcam公司）；辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記山羊抗小鼠IgG（上海碧云天生物技術(shù)公司）；BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒（上海碧云天生物技術(shù)公司）；超敏ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒（上海碧云天生物技術(shù)公司）；高效RIPA組織/細(xì)胞裂解液（北京索萊寶公司）。

人參、三七、川芎合劑凍干粉由北京因科瑞斯醫(yī)藥科技公司制備提供。藥物均為道地藥材，單味藥成分檢測(cè)符合藥典的規(guī)定和標(biāo)準(zhǔn)，按3∶2∶4破碎成最粗粉，經(jīng)乙醇回收提取，濾過(guò)，藥渣棄去，醇提液回收乙醇至無(wú)醇味濃縮液，繼續(xù)濃縮至稠膏，真空減壓，干燥至干膏，粉碎裝袋，每1 g凍干粉含生藥4.286 g。中藥凍干粉用PBS配制成貯存液，以0.22 μm濾器過(guò)濾并分裝，質(zhì)量濃度25 g?L-1，-20 ℃保存。白藜蘆醇（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)111535-200502）用DMSO溶解并配制成貯存液，質(zhì)量濃度50 g?L-1 ，4 ℃保存。

倒置相差顯微鏡及成像系統(tǒng)（德國(guó)Leica，型號(hào)4000B）；流式細(xì)胞儀（美國(guó)Beckmam，型號(hào)Cytomics FC500）；全自動(dòng)酶標(biāo)儀（美國(guó)Thermo，型號(hào)Multiskan MK3）；激光共聚焦顯微鏡（日本Olympus，型號(hào)FV1000）；發(fā)光凝膠成像系統(tǒng)（SYNGENE，型號(hào)GeneGnome XRQ）。

2方法

2.1細(xì)胞培養(yǎng)及傳代細(xì)胞培養(yǎng)一般隔天換液，待培養(yǎng)瓶細(xì)胞密度在90%以上時(shí)進(jìn)行傳代，棄去原培養(yǎng)基，用DPBS洗2次；加入1 mL DPBS與胰酶/EDTA混合液（比例為1∶4）；室溫放置1.5 min，待細(xì)胞變圓時(shí)，輕敲瓶底，后加入2 mL完全培養(yǎng)基停止消化，用吸管進(jìn)行吹打，收集細(xì)胞，1 000 r?min-1離心5 min，棄上清加入培養(yǎng)基2～3 mL吹懸，按照1∶2或1∶3傳代培養(yǎng)。

2.2分組及藥物濃度 實(shí)驗(yàn)分為6組，分別為青年組（5代細(xì)胞）、模型組（9代細(xì)胞）、中藥低劑量組（100 mg?L-1）、中藥中劑量組（200 mg?L-1）、中藥高劑量組（400 mg?L-1）及白藜蘆醇組（10 μmol?L-1），藥物干預(yù)時(shí)間為48 h。

2.3β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色鑒定衰老的程度 β-半乳糖苷酶染色法是鑒定細(xì)胞衰老的重要指標(biāo)[7]。將細(xì)胞以8×103個(gè)/孔接種于24孔板，次日細(xì)胞貼壁后，實(shí)驗(yàn)組給予藥物干預(yù)，作用時(shí)間為48 h。實(shí)驗(yàn)前將GENMED染色液與GENMED稀釋液以1∶20配制成工作液，混勻，置入37 ℃水浴箱預(yù)熱。吸去原細(xì)胞培養(yǎng)基，加入500 μL/孔的GENMED清理液，并輕微搖晃24孔板；吸去清理液，加入500 μL/孔的GENMED固定液，室溫孵育5 min；吸去固定液，加入500 μL/孔的GENMED酸性液，清洗細(xì)胞表面，并重復(fù)此操作一次；加入400 μL/孔預(yù)熱的工作液，37 ℃孵育過(guò)夜，次日在光學(xué)顯微鏡下觀察并計(jì)數(shù)，隨機(jī)選取3個(gè)視野，計(jì)算藍(lán)色細(xì)胞的數(shù)量占總視野細(xì)胞數(shù)量的比值。

2.4CCK-8檢測(cè)細(xì)胞增殖能力將細(xì)胞以6×103個(gè)/孔接種于96孔板，每組設(shè)5個(gè)復(fù)孔，次日細(xì)胞貼壁后，實(shí)驗(yàn)組給予藥物干預(yù)，作用時(shí)間為48 h。每孔加入10 μL CCK-8溶液，放入37 ℃培養(yǎng)箱中孵育2 h，上機(jī)檢測(cè)，記錄酶標(biāo)儀所測(cè)定450 nm波長(zhǎng)的吸光度（A）。

2.5流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期常規(guī)進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)組藥物干預(yù)48 h，消化后離心并用DPBS洗滌2次，去除上清，每組加入70%冰乙醇1 mL吹懸固定，4 ℃保存過(guò)夜。次日離心后去除固定液，DPBS洗滌1次，離心去上清，每組加入100 μL RNase A 37 ℃水浴30 min，再加入400 μL PI混勻染色，4 ℃冰箱避光放置30 min，后上機(jī)檢測(cè)。

2.6激光共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞F-actin和G-actin結(jié)構(gòu)的改變將細(xì)胞以6×103個(gè)/孔接種于黑色96孔板，貼壁后，實(shí)驗(yàn)組藥物干預(yù)48 h。吸去原培養(yǎng)基，用DPBS清洗細(xì)胞2次，加入4%多聚甲醛100 μL/孔，室溫下固定15 min，再用DPBS清洗細(xì)胞5 min×3遍；加入0.1% Triton X-100 100 μL/孔，室溫下穿透5 min，再用DPBS清洗5 min×3遍；最后加入羅丹明鬼筆環(huán)肽2.5 μL（0.5 U）/孔和Alexafluor488 DNase I 2 μL/孔共染色，避光室溫放置30 min，再用DPBS清洗5 min×3遍，上機(jī)觀察F-actin和G-actin的形態(tài)學(xué)改變。

2.7Western blot 檢測(cè)F-actin蛋白的表達(dá)細(xì)胞樣品中加入100 μL含蛋白酶抑制劑、PMSF的RIPA 裂解液，超聲波破碎儀破碎10 s，4 ℃16 000×g離心10 min，按BCA蛋白濃度檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)對(duì)樣品蛋白總濃度進(jìn)行測(cè)定，加入樣品1/4體積的5×Loading buffer，100 ℃加熱10 min。進(jìn)行電泳及轉(zhuǎn)膜后，5%脫脂奶粉室溫封閉1 h，完成后用TBST洗膜3次，一抗稀釋比例1∶250，4 ℃水平搖床孵育過(guò)夜。二抗用5%脫脂奶粉封閉液稀釋，稀釋比例1∶3 000，室溫孵育60 min，TBST洗滌3×10 min。將膜平鋪在干凈的保鮮膜上，滴加配置好的ECL反應(yīng)液反應(yīng)2 min，曝光及掃描。

2.8統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，其中計(jì)量數(shù)據(jù)以±s表示，多組樣本采用單因素方差分析，用Levene法檢驗(yàn)方差齊性，若方差齊，采用LSD法進(jìn)行兩兩比較；若方差不齊，則采用Tamhane法。以P

3結(jié)果

3.1對(duì)SA-β-gal衰老染色的影響通過(guò)對(duì)各組染色結(jié)果的觀察和計(jì)數(shù)，與青年組相比，模型組細(xì)胞藍(lán)染數(shù)比例增多，具有顯著性差異；與模型組相比，中藥低、中、高劑量組及白藜蘆醇組細(xì)胞藍(lán)染數(shù)比例均明顯降低，均有顯著性差異（圖1，表1）。

3.2對(duì)細(xì)胞增殖能力的影響各組CCK-8細(xì)胞增殖能力的檢測(cè)表明，與青年組相比，模型組A明顯減少，具有顯著性差異；與模型組相比，中藥中劑量組A明顯增加，具有顯著性差異，中藥低劑量組A增加，具有差異性，而中藥高劑量組及白藜蘆醇組A增加，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表1）。

3.3對(duì)細(xì)胞周期的影響通過(guò)對(duì)各組流式細(xì)胞周期的檢測(cè)表明，與青年組相比，模型組G0/G1期細(xì)胞明顯增多，S期細(xì)胞減少，均有顯著性差異；與模型組相比，中藥中、高劑量組及白藜蘆醇組G0/G1期細(xì)胞明顯減少，S期細(xì)胞增多，具有顯著性差異，中藥低劑量組則無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；G2/M期細(xì)胞數(shù)目變化均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表2）。

A.青年組；B.模型組；C.中藥低劑量組（100 mg?L-1）；D.中藥中劑量組（200 mg?L-1）；E. 中藥高劑量組（400 mg?L-1）；F.白藜蘆醇組（10 μmol?L-1）（圖2，3同）。

3.4對(duì)細(xì)胞F-actin和G-actin形態(tài)學(xué)的影響激光共聚焦顯微鏡顯示，青年組細(xì)胞排列緊密，F(xiàn)-actin（紅染）主要在細(xì)胞表面及外周分布，線條完整連續(xù)；G-actin（綠染）主要在細(xì)胞的中央?yún)^(qū)域分布，呈致密的橢圓形，染色清晰、飽滿、圓潤(rùn)。模型組細(xì)胞體積變大，形態(tài)不規(guī)則，F(xiàn)-actin邊緣毛糙不規(guī)整，出現(xiàn)鋸齒樣斷裂，部分呈縱向平行排列，形成大量應(yīng)力纖維；G-actin向細(xì)胞周邊區(qū)域伸展，部分出現(xiàn)邊緣變模糊呈絮狀，細(xì)胞中央?yún)^(qū)域染色變?nèi)酢ＤＰ徒M與青年組相比，F(xiàn)-actin/G-actin熒光強(qiáng)度比值增大，具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。各給藥組F-actin邊緣較模型組清晰光滑，且較少斷裂；G-actin則主要集中于細(xì)胞中間，染色略欠飽滿，尚清晰圓潤(rùn)。與模型組相比，中藥低、中劑量組及白藜蘆醇組F-actin/G-actin熒光強(qiáng)度比值降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，中藥高劑量組則無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖2，表3）。

3.5對(duì)F-actin和HSP27蛋白表達(dá)的影響與青年組相比，模型組的F-actin蛋白表達(dá)明顯增多，具有顯著差異性；與模型組相比，中藥中、高劑量組及白藜蘆醇組F-actin蛋白表達(dá)減少，具有顯著差異性；與青年組相比，模型組HSP27蛋白表達(dá)明顯減少，具有顯著差異性；與模型組相比，中藥低、中、高劑量組及白藜蘆醇組HSP27蛋白表達(dá)明顯增多，具有顯著差異性（圖3，表3）。

4討論

衰老是不可抗拒的自然規(guī)律，而血管衰老是人體衰老的關(guān)鍵始發(fā)因素[8]。 在血管老化的過(guò)程中，中膜平滑肌細(xì)胞高增殖、高移行、分泌性改變是內(nèi)膜增厚、血管重構(gòu)的關(guān)鍵因素。VSMC發(fā)生表型轉(zhuǎn)化的過(guò)程中伴隨著細(xì)胞骨架的重構(gòu)，同時(shí)骨架重構(gòu)又是VSMC由收縮型向合成型轉(zhuǎn)化過(guò)程中細(xì)胞收縮能力下降、發(fā)生遷移和黏附等改變的病理生理基礎(chǔ)[4]。肌動(dòng)蛋白是構(gòu)成細(xì)胞骨架微絲的基本成分，以單體G-actin或聚合體F-actin形式存在，肌動(dòng)蛋白具有收縮、保持細(xì)胞的形狀、運(yùn)動(dòng)、細(xì)胞間黏附等多種功能，同時(shí)參與細(xì)胞增殖過(guò)程[9]。有研究表明，調(diào)節(jié)機(jī)體衰老的多條通路均與F-actin的改變密切相關(guān)，如哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路、胰島素/胰島素樣生長(zhǎng)因子（IGF-1）通路和去乙酰化酶（SIRTS）通路等[10-12]。

氣血是構(gòu)成機(jī)體的基本物質(zhì)，二者關(guān)系密切，隨著衰老的進(jìn)行，氣虛血不行，血虛氣不化，氣虛血少，氣血運(yùn)行不暢，最終導(dǎo)致氣虛血瘀之證，從而加速了機(jī)體衰老的進(jìn)程。中藥人參、三七、川芎合方屬于益氣活血治法的范疇，在心腦血管疾病中被廣泛應(yīng)用，三藥合劑具有延緩血管衰老、保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞及調(diào)節(jié)血管活性物質(zhì)等作用[13-14]。白藜蘆醇具有激活SIRT1通路、抗氧化、調(diào)節(jié)自噬及保持端粒酶活性等作用，是目前比較公認(rèn)的延緩衰老的對(duì)照藥物。

本研究以復(fù)制性衰老的血管平滑肌細(xì)胞為對(duì)象，以β-半乳糖苷酶染色、CCK-8細(xì)胞增殖活性和細(xì)胞周期作為判斷細(xì)胞衰老程度的指標(biāo)，并觀察人參三七川芎提取物延緩細(xì)胞衰老的作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明衰老的細(xì)胞多停滯在細(xì)胞周期的G1期，S期細(xì)胞數(shù)量則減少，且體外增殖能力相對(duì)減弱，同時(shí)形態(tài)學(xué)表現(xiàn)出細(xì)胞扁平、脹大、顆粒增多的特征，并且在酸性環(huán)境下，細(xì)胞內(nèi)β-半乳糖苷酶活性增加，表現(xiàn)為細(xì)胞藍(lán)染數(shù)目增多。藥物干預(yù)后，停滯在G1期的細(xì)胞數(shù)量減少，同時(shí)S期細(xì)胞數(shù)量增加，且β-半乳糖苷酶染色細(xì)胞藍(lán)染數(shù)目減少，表明人參三七川芎提取物具有延緩血管平滑肌細(xì)胞衰老的作用。細(xì)胞骨架方面，青年組細(xì)胞微絲結(jié)構(gòu)以單體G-actin為主，主要在細(xì)胞的中央?yún)^(qū)域分布，呈致密的橢圓形，染色清晰、飽滿、圓潤(rùn)；聚合體F-actin主要在細(xì)胞表面及外周分布，線條完整連續(xù)。模型組G-actin向細(xì)胞周邊區(qū)域伸展，部分出現(xiàn)邊緣變模糊呈絮狀，細(xì)胞中央?yún)^(qū)域染色變?nèi)?；F-actin邊緣毛糙不規(guī)整，出現(xiàn)鋸齒樣斷裂，部分呈縱向平行排列，且蛋白表達(dá)量增加，形成大量應(yīng)力纖維。藥物干預(yù)后，F(xiàn)-actin邊緣較模型組清晰光滑，且較少斷裂，蛋白表達(dá)量減少；G-actin則主要集中于細(xì)胞中間，染色略欠飽滿，尚清晰圓潤(rùn)。而HSP27作為細(xì)胞骨架蛋白的主要調(diào)控因子，反向調(diào)節(jié)著F-actin的表達(dá)。

綜上所述，復(fù)制性衰老的血管平滑肌細(xì)胞可以作為衰老研究的模型；細(xì)胞骨架微絲蛋白G-actin和 F-actin形態(tài)及蛋白表達(dá)在細(xì)胞衰老過(guò)程中改變明顯，其可能直接參與平滑肌細(xì)胞由收縮型向合成型轉(zhuǎn)化等衰老的進(jìn)程；人參三七川芎提取物可以一定程度上延緩血管老化，且對(duì)于細(xì)胞G-actin和 F-actin有明顯干預(yù)作用，其可能間接通過(guò)此作用延緩了血管老化的進(jìn)程。

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篇3

資料與方法

本組107例，男84 例,女23 例。年齡＜17~60歲;左側(cè)48 例,右側(cè)59 例;橫形骨折39 例,粉碎性68例; 直接暴力72例，間接暴力25例；均為閉合性骨折。

復(fù)位方法：患肢取伸直位，或微屈呈15°～30°中立位，術(shù)者站于患側(cè)，一手拇指及示中指捏擠骨折遠(yuǎn)端向上推，并固定之；另一拇指及示中指捏擠近端上緣向外側(cè)角向下推擠，使骨折斷端接近。經(jīng)上述手法，骨折遠(yuǎn)近端對(duì)位良好，即可暫時(shí)固定，然后采用摸法檢查，若殘余的前后移位，手指觸摸不平時(shí)，以一手拇食指固定下陷的一端，另手拇指擠壓向前突出的另一端，使之對(duì)齊、平整。最后將骨折遠(yuǎn)端擠緊，用制備好的抱膝圈固定，如骨折對(duì)位較差可隔1～2日再推擠1次，用抱膝圈固定。

固定方法：①夾板的制備：取五層椴木膠合板1塊，長(zhǎng)度自患肢大腿中上1/3至踝上2cm，寬度基本與患肢相應(yīng)橫徑等寬，用脫脂棉及繃帶塑制吻合肢體生理弧度的夾板，用繃帶塑制大小適度的抱膝圈備用。②骨折復(fù)位滿意后，先放置超膝后側(cè)夾板，然后將抱膝圈套于髕骨周圍，固定帶分別扎在超膝后側(cè)夾板上。然后用三列繃帶將患肢與后側(cè)夾板纏繞固定，固定后要注意觀察患肢足背動(dòng)脈搏動(dòng)情況，以防固定過(guò)緊。抬高患肢，做患肢股四頭肌收縮鍛煉及患踝屈伸運(yùn)動(dòng)，以加速患肢血液循環(huán)，促進(jìn)消腫。3～5天調(diào)整固定1次，隨著腫脹的消退，逐漸縮小抱膝圈，使抱膝圈能起到良好的固定效果。

藥物治療：遵循骨折三期辨證論治的原則,早期活血祛瘀、消腫止痛,內(nèi)服三七活血膠囊消腫止痛;中期和營(yíng)生新、接骨續(xù)損,內(nèi)服接骨丹；后期培補(bǔ)肝腎、強(qiáng)壯筋骨,內(nèi)服壯筋續(xù)骨丹，解除外固定后,用我院下肢洗藥煎汁熏洗患肢。

結(jié) 果

本組106例均獲得6個(gè)月以上隨訪,49例完全無(wú)痛、股四頭肌肌力5級(jí)、膝關(guān)節(jié)主動(dòng)伸直正常，屈曲受限在20°以內(nèi)、無(wú)晚期創(chuàng)傷性關(guān)節(jié)炎癥狀出現(xiàn)；48例偶有疼痛但不影響日常生活及工作，股四頭肌肌力5級(jí)，屈曲受限在20°以內(nèi)，無(wú)晚期創(chuàng)傷性關(guān)節(jié)炎癥狀出現(xiàn)。10例膝關(guān)節(jié)疼痛，屈曲受限在30°以內(nèi)，輕度晚期創(chuàng)傷性關(guān)節(jié)炎癥狀出現(xiàn)。

篇4

（一）全年蔬菜價(jià)格高位運(yùn)行，走勢(shì)與2009年趨同

2010年，全區(qū)蔬菜價(jià)格（15個(gè)蔬菜監(jiān)測(cè)品種平均價(jià)格）普遍高于2009年，價(jià)格走勢(shì)與2009年基本趨同，上半年全區(qū)蔬菜平均價(jià)格達(dá)到2.77元/500克，高于全年平均價(jià)格。其中，一季度價(jià)格偏高，進(jìn)入二季度以來(lái)，價(jià)格開(kāi)始有所回落，7月份價(jià)格達(dá)到谷底，之后開(kāi)始回升，三季度保持小幅上揚(yáng)趨勢(shì)；進(jìn)入四季度以來(lái)，蔬菜價(jià)格上漲幅度較大，價(jià)格明顯走高，漲幅明顯高于去年同期。從全年價(jià)格走勢(shì)來(lái)看，與去年價(jià)格變動(dòng)趨勢(shì)基本趨同，但價(jià)格波動(dòng)較大。

（二）蔬菜價(jià)格同比增長(zhǎng)明顯，增幅波動(dòng)劇烈

2010年以來(lái)，蔬菜價(jià)格漲幅較大，截至11月上旬，較上年平均漲幅超過(guò)22%，而進(jìn)入四季度以來(lái)，漲幅一路走高，11月上旬達(dá)到41.22%，價(jià)格遠(yuǎn)高于上年同期。從全年漲幅走勢(shì)來(lái)看，一季度保持高位，二季度增幅有所減緩，三季度以來(lái)增速波動(dòng)較大。

（三）“大眾菜”價(jià)格走勢(shì)平緩，“細(xì)菜”價(jià)格波動(dòng)劇烈

從各月蔬菜價(jià)格情況來(lái)看，土豆、蘿卜、白菜等大眾菜價(jià)格走勢(shì)較為平緩，而黃瓜、西紅柿、豆角、青椒、茄子等“細(xì)菜”波動(dòng)劇烈。黃瓜最高價(jià)由年初3.91元/500克到最低7月1.14元/500克，11月上旬達(dá)2.5元/500克，并開(kāi)始逐步走高。青椒最高與最低價(jià)相差2.86元/500克，豆角最高與最低價(jià)相差3.77元/500克；而土豆、蘿卜、白菜等大眾菜價(jià)格最高相差不超過(guò)1.25元/500克，且全年價(jià)格基本在固定區(qū)間平緩波動(dòng)(詳見(jiàn)圖3-5)。

（四）各地蔬菜漲價(jià)明顯，價(jià)格過(guò)快增長(zhǎng)

從自治區(qū)價(jià)格監(jiān)測(cè)中心監(jiān)測(cè)地區(qū)顯示數(shù)據(jù)來(lái)看，11月上旬，除烏海市蔬菜價(jià)格低于上年同期外，其它監(jiān)測(cè)地區(qū)均高于去年同期，其中，牙克石市漲幅達(dá)到71.17%，包頭市、呼倫貝爾市、赤峰市、科爾沁區(qū)、集寧區(qū)、東勝區(qū)、臨河區(qū)漲幅超過(guò)50%，其它漲幅均超過(guò)24%，價(jià)格顯著增高。滿洲里市蔬菜平均價(jià)格高達(dá)3.10元/500克，蔬菜價(jià)格最低的赤峰市也達(dá)到1.82元/500克。

二、蔬菜價(jià)格走勢(shì)原因分析

（一）受季節(jié)性因素影響，蔬菜價(jià)格全年波動(dòng)較大

受2009年雨雪、冰凍災(zāi)害影響，全國(guó)蔬菜生產(chǎn)受損嚴(yán)重，產(chǎn)量大幅減少，加之北方地區(qū)連降大雪，運(yùn)輸受阻，部分地區(qū)蔬菜供應(yīng)緊張。同時(shí)，2009年12月下旬國(guó)內(nèi)成品油價(jià)格連續(xù)上調(diào)，使得購(gòu)進(jìn)蔬菜的運(yùn)輸成本增加。隨著春節(jié)臨近，蔬菜市場(chǎng)需求量增加，一季度，我區(qū)蔬菜價(jià)格漲幅明顯，呈高位運(yùn)行；進(jìn)入二季度，由于氣溫回升，我區(qū)地產(chǎn)蔬菜尤其應(yīng)季蔬菜大量上市，蔬菜市場(chǎng)供應(yīng)量大幅增加，蔬菜價(jià)格降幅明顯，但土豆、胡蘿卜、蘿卜由于不是大量上市的季節(jié)，市場(chǎng)供應(yīng)依然較為緊張，價(jià)格呈現(xiàn)上漲的走勢(shì)；三季度，隨著本地菜供應(yīng)量進(jìn)一步加大，蔬菜價(jià)格基本達(dá)到全年最低，呈小幅波動(dòng)；10月以來(lái)，蔬菜價(jià)格明顯上揚(yáng)，在15個(gè)蔬菜監(jiān)測(cè)品種中，除白菜、土豆、蘿卜3個(gè)當(dāng)?shù)禺a(chǎn)蔬菜品種漲幅趨緩?fù)?，其它蔬菜價(jià)格上漲較快。隨著天氣轉(zhuǎn)冷，輸入型蔬菜比例增大，進(jìn)入冬季，運(yùn)輸用柴油由0號(hào)變?yōu)椋?0號(hào)、－20號(hào)柴油，運(yùn)輸成本增加。當(dāng)前全國(guó)油氣短缺進(jìn)一步加劇蔬菜運(yùn)輸成本，蔬菜價(jià)格仍會(huì)繼續(xù)走高。

（二）冬季輸入菜居多，蔬菜價(jià)格受產(chǎn)地影響較大

由于本地果綠蔬菜通過(guò)溫室培育成本價(jià)遠(yuǎn)高于外地菜，而5、6月份收儲(chǔ)菜冬季銷售則需放到恒溫菜室，蔬菜損耗率高，貯存成本大。因此，我區(qū)冬季蔬菜供應(yīng)大多依賴外地調(diào)運(yùn)，僅有部分白菜、大圓菜等冬儲(chǔ)菜能本地供給，外運(yùn)蔬菜主要來(lái)自山東壽光、淄博、河北唐山，云南昆明、廣東、四川、海南等地區(qū)。近年來(lái)，寧夏、甘肅等地冬季葉綠菜供應(yīng)量逐步增大。以呼和浩特市為例，進(jìn)入冬季以來(lái)，外地菜供應(yīng)量占總供應(yīng)量高達(dá)80%-90%。本地蔬菜供給少，對(duì)整個(gè)市場(chǎng)的影響微乎其微，使得冬季蔬菜價(jià)格、供給量主要受制于蔬菜產(chǎn)地。2010年以來(lái)，我國(guó)氣候表現(xiàn)反常，持續(xù)不斷的干旱、雨雪冰凍、高溫暴雨等惡劣天氣，嚴(yán)重影響到各季蔬菜的生長(zhǎng)，在不少地區(qū)鮮菜產(chǎn)量大幅萎縮，使得菜價(jià)階段性、季節(jié)性價(jià)格走高。

（三）農(nóng)資價(jià)格上漲，是蔬菜價(jià)格持續(xù)走高的趨勢(shì)性原因

隨著工業(yè)化、城鎮(zhèn)化進(jìn)程加速，農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn)三大“基礎(chǔ)成本”――生產(chǎn)資料、勞動(dòng)力和土地價(jià)格剛性上漲漸成常態(tài)，農(nóng)產(chǎn)品進(jìn)入趨勢(shì)性的上漲通道。國(guó)家統(tǒng)計(jì)局?jǐn)?shù)據(jù)顯示，2010年7月以來(lái)，我國(guó)價(jià)格總水平逐月攀升，以農(nóng)副產(chǎn)品為主的生活必需品價(jià)格上漲較快，10月份CPI達(dá)到4.4%，創(chuàng)下25個(gè)月來(lái)新高，而在新漲價(jià)因素中，食品類價(jià)格上漲10.1％，為CPI漲幅“貢獻(xiàn)”了74％。隨著城市地價(jià)快速上漲，拉動(dòng)了城郊地價(jià)，并進(jìn)一步傳導(dǎo)至農(nóng)業(yè)地價(jià)。此外，一些農(nóng)業(yè)龍頭加工企業(yè)和種植大戶大規(guī)模租地經(jīng)營(yíng)，也在一定程度上提高了農(nóng)村地價(jià)，從而抬高農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn)成本，推升農(nóng)產(chǎn)品價(jià)格。同時(shí)，隨著大量青壯年勞動(dòng)力流入城鎮(zhèn)，“用工荒”現(xiàn)象也在一些地方的農(nóng)業(yè)領(lǐng)域出現(xiàn)，導(dǎo)致農(nóng)村勞動(dòng)力價(jià)格迅速上升，農(nóng)產(chǎn)品尤其是蔬菜等勞動(dòng)密集型產(chǎn)品價(jià)格必然會(huì)更加高昂。

（四）“城市化”進(jìn)程加快使得城郊菜地大量被占，直接導(dǎo)致蔬菜價(jià)格上漲

近年來(lái)，隨著城市化進(jìn)程不斷推進(jìn)，城市建設(shè)速度加快，城市近郊的土地大量被征為建設(shè)用地。2009年，全區(qū)城市建成區(qū)面積較“十一五”期初增長(zhǎng)了17.5%，土地征用面積達(dá)到“十一五”期初征用面積的2倍，許多地方的菜地都成了城區(qū)的馬路和商品房，而新的菜地建設(shè)并沒(méi)有及時(shí)跟上，造成菜地大幅度減少。同時(shí)，城市化向前推進(jìn)，使得城市人口不斷膨脹，2009年，全區(qū)市鎮(zhèn)人口達(dá)到1293.5萬(wàn)人，較“十一五”期初增加了129.9萬(wàn)人，市區(qū)人口密度較“十一五”期初增長(zhǎng)了59%，使城市蔬菜消費(fèi)量大量增加，蔬菜需求缺口加大。呼和浩特市近年來(lái)由于城市建設(shè)速度加快，近郊的菜地基本有50%被征用成為建設(shè)用地，使得蔬菜種植面積因此大幅度減少，本市的蔬菜種植基地只留下8萬(wàn)畝，保護(hù)地溫室大棚不足1萬(wàn)畝，地產(chǎn)蔬菜供應(yīng)能力銳減，大量蔬菜依靠外地供應(yīng)。按照呼和浩特市總?cè)丝诿咳嗣磕曜钌?50公斤的需菜量計(jì)算，需要蔬菜量100多萬(wàn)噸，而目前呼和浩特市全年的蔬菜產(chǎn)量是60萬(wàn)噸左右，缺口高達(dá)40多萬(wàn)噸。巴彥淖爾市臨河區(qū)隨著市區(qū)擴(kuò)展，本地產(chǎn)蔬菜僅能滿足市場(chǎng)需求量的30%， 70%的蔬菜需求要靠外運(yùn)。與此同時(shí)，隨著人口增加及人們生活水平提高，健康觀念改變，對(duì)蔬菜特別是“細(xì)菜”的需求量不斷增加，加之許多原來(lái)自給自足、有富余還出售蔬菜的農(nóng)民，現(xiàn)在已經(jīng)變成到菜市場(chǎng)買菜的消費(fèi)者，也使得蔬菜消費(fèi)量大量增加。本地蔬菜供應(yīng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)滿足不了市場(chǎng)需求，直接導(dǎo)致蔬菜價(jià)格上漲。

三、對(duì)穩(wěn)定我區(qū)蔬菜價(jià)格的幾點(diǎn)建議

（一）加大蔬菜生產(chǎn)的扶持力度，保證蔬菜供給

在大力推動(dòng)工業(yè)化和城市化的進(jìn)程中，重視和關(guān)注人們?nèi)粘Ｉ钏匦璧氖卟烁笔称返纳a(chǎn)和建設(shè)。各地要切實(shí)做好規(guī)劃，并在規(guī)劃基礎(chǔ)上分步實(shí)施好各蔬菜基地的建設(shè)，對(duì)適宜發(fā)展蔬菜生產(chǎn)的地區(qū)，建立和發(fā)展蔬菜生產(chǎn)基地，保證蔬菜種植面積，特別是要加大對(duì)城市周邊蔬菜生產(chǎn)的扶持力度，對(duì)城市擴(kuò)張征用的菜地收取蔬菜基地補(bǔ)償金，并真正用于發(fā)展新的蔬菜生產(chǎn)基地，扶持菜農(nóng)，通過(guò)專項(xiàng)的政策性補(bǔ)貼來(lái)促動(dòng)蔬菜的生產(chǎn)和擴(kuò)大供給，保持蔬菜產(chǎn)業(yè)的穩(wěn)定發(fā)展。

（二）加快蔬菜等鮮活農(nóng)產(chǎn)品 “綠色通道”建設(shè)，降低蔬菜運(yùn)輸成本

運(yùn)輸成本主要是油價(jià)和過(guò)路過(guò)橋費(fèi)兩方面，而運(yùn)輸成本又都增加到菜價(jià)里面，增加了市民支出，減少了市民購(gòu)買量。要進(jìn)一步完善蔬菜等鮮活農(nóng)產(chǎn)品運(yùn)輸“綠色通道”政策，對(duì)整車合法裝載運(yùn)輸鮮活農(nóng)產(chǎn)品的車輛免收車輛通行費(fèi)。對(duì)蔬菜運(yùn)銷企業(yè)，有關(guān)部門應(yīng)該給予幫助，發(fā)放綠色通行證，建立綠色通道，縮短蔬菜運(yùn)輸時(shí)間。同時(shí)，蔬菜運(yùn)銷企業(yè)要加強(qiáng)自律，搞好交通法規(guī)培訓(xùn)，杜絕“超重”、“超速”現(xiàn)象發(fā)生，保障蔬菜運(yùn)輸安全。

（三）加大市場(chǎng)設(shè)施建設(shè)力度，促進(jìn)蔬菜商品的流通順暢

選擇一批條件較好的大型蔬菜批發(fā)市場(chǎng)，通過(guò)企業(yè)自籌、多元化投資、政府扶持等方式，加強(qiáng)產(chǎn)地蔬菜預(yù)冷設(shè)施、批發(fā)市場(chǎng)冷藏設(shè)施、蔬菜低溫配送中心建設(shè)，推廣節(jié)能環(huán)保的冷鏈運(yùn)輸車輛，配套清選、分級(jí)、包裝等凈菜處理及相關(guān)設(shè)備，改善市場(chǎng)場(chǎng)地、道路、交易廳（棚）、水電、信息服務(wù)、質(zhì)量檢測(cè)、電子結(jié)算等基礎(chǔ)設(shè)施，實(shí)現(xiàn)采后快速預(yù)冷、商品化加工處理和上市旺季入庫(kù)冷藏保鮮。加快城區(qū)蔬菜市場(chǎng)和零售網(wǎng)點(diǎn)建設(shè)，在場(chǎng)地環(huán)境、設(shè)施設(shè)備、質(zhì)量安全檢測(cè)、垃圾處理、規(guī)范管理等方面進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化建設(shè)，建立便捷、安全、規(guī)范、高效的蔬菜零售平臺(tái)。

（四）加強(qiáng)市場(chǎng)監(jiān)管，維護(hù)正常市場(chǎng)價(jià)格秩序

篇5

關(guān)鍵詞：事故車 現(xiàn)場(chǎng)查勘 典型案例 酒駕調(diào)包

The substitution case analysis of the drunk driving in accident site survey Sichuan Vocational and Technical College of Communications

Feng Bo

Abstract： The site survey is an important means of evidence collection， it is the important basis of insurance claims and case litigation. The substitution case of the drunk driving is a kind of common cases in the process of site survey. In this paper， it analyses a real case to illustrates the general recognition method for such cases.

Keywords： accident car， site survey， typical case， substitution in drunk driving

引言

現(xiàn)場(chǎng)查勘是指運(yùn)用科學(xué)的方法和現(xiàn)代技術(shù)手段，對(duì)事故現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行實(shí)地勘察和檢驗(yàn)，通過(guò)分析存留的物證和詢問(wèn)認(rèn)證等渠道獲得事故產(chǎn)生的原因，并采用拍照、繪圖等方式將事故結(jié)果方便而準(zhǔn)確記錄下來(lái)的工作過(guò)程。它是保險(xiǎn)賠付、案件訴訟的重要依據(jù)。

酒駕調(diào)包是在現(xiàn)場(chǎng)查勘中常常會(huì)遇到一類案件。雖然《道路交通安全法》中對(duì)酒后駕車行為有明確的處罰規(guī)定，同時(shí)在保險(xiǎn)公司合同條款中，也規(guī)定酒后駕駛屬于免賠范圍，但部分駕駛員仍難改酒后駕駛的習(xí)慣。在車輛出險(xiǎn)后，由于駕駛員擔(dān)心受到處罰并且被保險(xiǎn)公司拒賠，于是找來(lái)他人頂包。在現(xiàn)場(chǎng)查勘過(guò)程中，如何對(duì)這類案件進(jìn)行準(zhǔn)確識(shí)別以避免保險(xiǎn)公司損失，是查勘員必備的能力。下面就通過(guò)對(duì)一個(gè)真實(shí)酒駕頂包案件的分析來(lái)說(shuō)明針對(duì)這類案件的識(shí)別方法。

一、出險(xiǎn)情況

2012年9月11日凌晨4時(shí)左右，羅某稱其駕駛一輛車牌號(hào)為粵A××的汽車由梅林關(guān)往清湖方向的××大道行駛，為避讓車輛右打方向盤不慎撞上路基，后報(bào)保險(xiǎn)公司。

二、現(xiàn)場(chǎng)情況

查勘員到達(dá)現(xiàn)場(chǎng)時(shí)，現(xiàn)場(chǎng)有兩輛黑色轎車停在不遠(yuǎn)處，五六個(gè)人圍在一起。這些人見(jiàn)查勘員到來(lái)，立即駕駛車輛離開(kāi)。標(biāo)的車停靠在距路基前方20m的公路邊，一路上留下標(biāo)的車輪軋過(guò)的痕跡，標(biāo)的車前杠斷裂，內(nèi)部件于表，方向機(jī)斷開(kāi)，機(jī)油撒了一地，車內(nèi)駕駛員方向盤處安全氣囊爆裂。報(bào)案人羅某稱自己是為了避讓旁邊準(zhǔn)備超車的車輛，才猛打方向盤，撞上路基的。查勘員到達(dá)時(shí)除了羅某在現(xiàn)場(chǎng)外，還有車主黃某在現(xiàn)場(chǎng)。黃某一身酒氣，并稱自己也是剛到現(xiàn)場(chǎng)。

三、疑點(diǎn)分析

1.案發(fā)時(shí)間是當(dāng)夜凌晨4點(diǎn)多，路上車輛已經(jīng)很稀少，并且案發(fā)道路單向有四根車道。根據(jù)經(jīng)驗(yàn)，在車少路寬的情況下一般車輛不會(huì)亂變道。

2.在詢問(wèn)過(guò)程中，報(bào)案人羅某稱車是從車主黃某處借來(lái)的，但何時(shí)何地借車，駕車從哪里到哪里等細(xì)節(jié)都說(shuō)不上來(lái)。而一身酒氣的車主黃某卻主動(dòng)上來(lái)向查勘員講解事發(fā)經(jīng)過(guò)。

3.整個(gè)詢問(wèn)過(guò)程中，羅某神情緊張，常用眼角余光看黃某。

綜上疑點(diǎn)分析，此案很有可能是車主黃某酒后駕車，出險(xiǎn)后找來(lái)羅某頂包。

四、處理方法

為了印證疑點(diǎn)，查勘員分別讓羅某與黃某分別到標(biāo)的車試坐一下。黃某一上車就手握方向盤，腳踩踏板，動(dòng)作自然。而羅某上車后呆滯地坐于座位上，連手都不知道該放哪里好。

接下來(lái)，查勘員讓當(dāng)事人黃某與羅某分別拿出手機(jī)，查看他們的通話記錄。通話記錄顯示：在4時(shí)以后，黃某與羅某分別與一個(gè)叫黃文的人頻繁通電話。車主黃某是4時(shí)08分與黃文通電話，而羅某是4時(shí)11分與黃文通電話。為何黃某先知道事故發(fā)生呢？并且羅某4時(shí)12分報(bào)的保險(xiǎn)公司，此后羅某又頻頻與黃文通話。

圖1 車主黃某坐在駕駛員座位上 圖2報(bào)案人羅某坐在駕駛員座位上

圖3羅某電話記錄 圖4 黃某電話記錄

鑒于以上情況，查勘員進(jìn)一步懷疑駕駛員是黃某而非羅某。

查勘員隨即告知當(dāng)事人，由于案子較大，必須報(bào)交警，然后現(xiàn)場(chǎng)做了筆錄。交警到達(dá)現(xiàn)場(chǎng)后，查勘員對(duì)交警說(shuō)明了事故情況，并告知客戶，由于事故較大，且有不明朗的地方，現(xiàn)場(chǎng)無(wú)法開(kāi)單，需要轉(zhuǎn)保險(xiǎn)公司調(diào)查。隨后標(biāo)的車被拖到了交警中隊(duì)。

五、處理結(jié)果

凌晨八點(diǎn)多，報(bào)案人羅某打電話給查勘員稱放棄索賠，希望銷案處理。由此可見(jiàn)，此案為典型的酒駕掉包案件。本案最終以報(bào)案人簽字同意銷案告終。

六、案例總結(jié)

總結(jié)以上案例，可以看出對(duì)于識(shí)別這類酒駕調(diào)包案件的幾個(gè)要點(diǎn)。

1.查勘員到達(dá)現(xiàn)場(chǎng)后要仔細(xì)觀察現(xiàn)場(chǎng)情況，包括道路情況、標(biāo)的車情況、報(bào)案人、車主及周圍環(huán)境情況等，看有無(wú)不合常規(guī)情理現(xiàn)象。此外，若有表1中所列現(xiàn)象，則應(yīng)引起注意。

2.進(jìn)行詢問(wèn)時(shí)注意對(duì)相關(guān)細(xì)節(jié)進(jìn)行提問(wèn)。具體詢問(wèn)要點(diǎn)可參照表1。若報(bào)案人對(duì)于多個(gè)要點(diǎn)都答不上來(lái)，則要引起注意。

3.詢問(wèn)時(shí)注意觀察被詢問(wèn)人的語(yǔ)速、表情、神態(tài)等。若被詢問(wèn)人說(shuō)話支支吾吾、神情緊張、東張西望等，可初步判斷其說(shuō)謊。

4.對(duì)疑點(diǎn)進(jìn)行印證時(shí)，可要求報(bào)案人及嫌疑人都坐到駕駛員座位上，以觀察標(biāo)的車座位與人體的吻合情況。

5.可要求查看報(bào)案人手機(jī)的通話記錄，注意通話時(shí)間及通話對(duì)象，從中找出與案件相關(guān)的蛛絲馬跡。

6.若現(xiàn)場(chǎng)有監(jiān)控?cái)z像頭，可與監(jiān)控方協(xié)商調(diào)取案發(fā)時(shí)間前后的監(jiān)控錄像，作為確定案發(fā)經(jīng)過(guò)最直接的證據(jù)。

參考文獻(xiàn)

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篇6

我的畢業(yè)設(shè)計(jì)作的是混凝土框架結(jié)構(gòu)，因此對(duì)于混凝土機(jī)構(gòu)的了解要更有針對(duì)性?；炷临|(zhì)量的好壞，既對(duì)結(jié)構(gòu)物的安全，也對(duì)結(jié)構(gòu)物的造價(jià)有很大影響，因此在施工中我們必須對(duì)混凝土的施工質(zhì)量有足夠的重視。混凝土質(zhì)量的主要指標(biāo)之一是抗壓強(qiáng)度，從混凝土強(qiáng)度表達(dá)式不難看出，混凝土抗壓強(qiáng)度與混凝土用水水泥的強(qiáng)度成正比，按公式計(jì)算，當(dāng)水灰比相等時(shí)，高標(biāo)號(hào)水泥比低標(biāo)號(hào)水泥配制出的混凝土抗壓強(qiáng)度高許多。所以混凝土施工時(shí)切勿用錯(cuò)了水泥標(biāo)號(hào)。另外，水灰比也與混凝土強(qiáng)度成正比，水灰比大，混凝土強(qiáng)度高3水灰比小，混凝土強(qiáng)度低，因此，當(dāng)水灰比不變時(shí)，企圖用增加水泥用量來(lái)提高溫凝土強(qiáng)度是錯(cuò)誤的，此時(shí)只能增大混凝土和易性，增大混凝土的收縮和變形。 綜上所述，影響混凝土抗壓強(qiáng)度的主要因素是水泥強(qiáng)度和水灰比，要控制好混凝土質(zhì)量，最重要的是控制好水泥和混凝土的水灰比兩個(gè)主要環(huán)節(jié)。此外，影響混凝土強(qiáng)度還有其它不可忽視的因素。粗骨料對(duì)混凝土強(qiáng)度也有一定影響，當(dāng)石質(zhì)強(qiáng)度相等時(shí)，碎石表面比卵石表面粗糙，它與水泥砂漿的粘結(jié)性比卵石強(qiáng)，當(dāng)水灰比相等或配合比相同時(shí)，兩種材料配制的混凝土，碎石的混凝土強(qiáng)度比卵石強(qiáng)。因此我們一般對(duì)混凝土的粗骨料控制在3.2cm左右，細(xì)骨料品種對(duì)混凝土強(qiáng)度影響程度比粗骨料小，所以混凝土公式內(nèi)沒(méi)有反映砂種柔效，但砂的質(zhì)量對(duì)混凝土質(zhì)量也有一定的影響。因此，砂石質(zhì)量必須符合混凝土各標(biāo)號(hào)用砂石質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的要求。由于施工現(xiàn)場(chǎng)砂石質(zhì)量變化相對(duì)較大，因此現(xiàn)場(chǎng)施工人員必須保證砂石的質(zhì)量要求，并根據(jù)現(xiàn)場(chǎng)砂含水率及時(shí)調(diào)整水灰比，以保證混凝土配合比，不能把實(shí)驗(yàn)配比與施工配比混為一談?；炷翉?qiáng)度只有在溫度、濕度條件下才能保證正常發(fā)展，應(yīng)按施工規(guī)范的規(guī)定予在養(yǎng)護(hù)、氣溫高低對(duì)混凝土強(qiáng)度發(fā)展有一定的影響。冬季要保溫防凍害，夏季要防暴曬脫水?，F(xiàn)冬季施工一般采取綜合蓄熱法及蒸養(yǎng)法。如果是設(shè)計(jì)造成的缺陷，一般有設(shè)計(jì)承載力或設(shè)計(jì)工作條件與實(shí)際不符造成裂縫、變形、侵蝕等破壞;如果是使用造成的缺陷，一般有超載、侵蝕、火災(zāi)、凍融、風(fēng)化破壞等。

近年來(lái)預(yù)應(yīng)力混凝土應(yīng)用范圍逐漸推廣到更多的結(jié)構(gòu)領(lǐng)域，如大跨超長(zhǎng)、超厚及超靜定框架結(jié)構(gòu)，其混凝土強(qiáng)度等級(jí)必須提高至c50。在采用泵送條件下，其收縮與水化熱大大增加，約束應(yīng)力裂縫很難避免，張拉前開(kāi)裂，張拉后又不閉合，裂縫控制的難度更加困難。預(yù)應(yīng)力結(jié)構(gòu)裂縫允許寬度是嚴(yán)格的，預(yù)應(yīng)力筋腐蝕屬“應(yīng)力腐蝕”并有可能脆性斷裂，預(yù)兆性較小，裂縫擴(kuò)展速度快。裂縫深度h與結(jié)構(gòu)厚度h的關(guān)系如下：h≤0.1h表面裂縫;0.1h

應(yīng)當(dāng)盡量避免貫穿性及縱深裂縫，如出現(xiàn)該種裂縫應(yīng)采取化學(xué)灌漿處理來(lái)保證強(qiáng)度，即貫縫抗拉強(qiáng)度必須超過(guò)混凝土抗拉強(qiáng)度。

在修補(bǔ)裂縫前應(yīng)全面考慮與之相關(guān)的各種影響因素，仔細(xì)研究產(chǎn)生裂縫的原因，裂縫是否已經(jīng)穩(wěn)定，若仍處于發(fā)展過(guò)程，要估計(jì)該裂縫發(fā)展的最終狀態(tài)。在日本混凝土協(xié)會(huì)“混凝土裂縫的調(diào)查和修補(bǔ)指南”中，對(duì)調(diào)查的原則、普查、詳查方法均作了詳細(xì)規(guī)定，主要有：

裂縫的現(xiàn)狀調(diào)查(裂縫類型和寬度);有無(wú)病害(漏水、鋼筋銹蝕);產(chǎn)生裂縫的經(jīng)過(guò)(發(fā)生時(shí)間和過(guò)程);設(shè)計(jì)書(shū)的檢查;施工記錄的檢查;根據(jù)混凝土鉆芯檢查構(gòu)件的強(qiáng)度、厚度;荷載調(diào)查;中性化試驗(yàn);鋼筋調(diào)查(鋼筋位置、細(xì)筋數(shù)量及有無(wú)銹蝕);地基調(diào)查;混凝土分析;荷載試驗(yàn);振動(dòng)試驗(yàn)。

裂縫的處理

1.表面處理法：包括表面涂抹和表面貼補(bǔ)法

表面涂抹適用范圍是漿材難以灌入的細(xì)而淺的裂縫，深度未達(dá)到鋼筋表面的發(fā)絲裂縫，不漏水的縫，不伸縮的裂縫以及不再活動(dòng)的裂縫。表面貼補(bǔ)(土工膜或其它防水片)法適用于大面積漏水(蜂窩麻面等或不易確定具體漏水位置、變形縫)的防滲堵漏

填充法用修補(bǔ)材料直接填充裂縫，一般用來(lái)修補(bǔ)較寬的裂縫()0.3mm)，作業(yè)簡(jiǎn)單，費(fèi)用低。寬度小于0.3mm，深度較淺的裂縫、或是裂縫中有充填物，用灌漿法很難達(dá)到效果的裂縫、以及小規(guī)模裂縫的簡(jiǎn)易處理可采取開(kāi)v型槽，然后作填充處理。2.

灌漿法

此法應(yīng)用范圍廣，從細(xì)微裂縫到大裂縫均可適用，處理效果好。

2.結(jié)構(gòu)補(bǔ)強(qiáng)法

篇7

【關(guān)鍵詞】加油站；火災(zāi)爆炸；分析與預(yù)防

加油站是危險(xiǎn)化學(xué)品經(jīng)營(yíng)企業(yè)，所經(jīng)營(yíng)的油品汽柴油都是易燃易爆液體。因此分析加油站火災(zāi)爆炸的原因?qū)ζ洳扇∮嗅槍?duì)性的預(yù)防措施，是加油站安全管理的關(guān)鍵。下面我們通過(guò)對(duì)加油站發(fā)生的火災(zāi)爆炸事故案例分類進(jìn)行分析，并提出相應(yīng)的預(yù)防措施和建議。

一、卸油引起的火災(zāi)爆炸事故

（1）沙特阿拉伯首都利雅得鬧市區(qū)巴塔的一家加油站著

火，時(shí)間是2000年8月11日傍晚，燒毀20輛汽車、燒傷3人，大火引起的原因是由于卸油員違規(guī)操作導(dǎo)致大火出現(xiàn)。此外，由于利雅得的夏季非常炎熱，到了傍晚時(shí)室外溫度還很高，這段時(shí)間嚴(yán)禁卸油。（2）河北省黃驊市加油站在油罐車向儲(chǔ)油罐內(nèi)輸油時(shí)突發(fā)爆炸，時(shí)間是2000年9月10日0時(shí)30分，事故造成1人重傷、2人死亡，重傷患者98%的Ⅲ度燒傷有嚴(yán)重的生命危險(xiǎn)。（3）湖北公安縣加油站發(fā)生爆燃事故，時(shí)間是2002年

01月07日，事故造成2人受傷，1人死亡。該加油站的地理位置是宏泰客運(yùn)公司院內(nèi)，西接一集貿(mào)市場(chǎng)，東臨車站，地下埋藏儲(chǔ)油罐4個(gè)，裝有18噸汽、柴油。事故的主要責(zé)任是由于司機(jī)彭正秋嚴(yán)重違規(guī)操作，沒(méi)有采用密封式輸油法進(jìn)行輸油，而是將輸油管直接插入儲(chǔ)油罐所致。員工吳本軍在關(guān)閉閥門的時(shí)候，由于穿的衣服出現(xiàn)靜電，導(dǎo)致燃爆發(fā)生。（4）2011年1月12日

16時(shí)45分許，河北省廊坊市和平路一中石化加油站發(fā)生起火爆炸事故。廊坊市官方稱，事故未造成人員傷亡，起火原因?yàn)橛凸捃囆队秃螅o電火花引發(fā)起火爆炸。以上4起事故除一起是由于汽油從量油孔外溢，流入下水道，油蒸汽與空氣形成爆炸性混合氣體，遇火源引起的爆燃，其余2起都是靜電引起的火災(zāi)爆炸事故。汽油的閃點(diǎn)是-50℃，與空氣的比重為0.67～0.71，爆炸極限約為1.3～6%，它有一個(gè)很重要的物理特性就是非常容易氣化，揮發(fā)性非常強(qiáng)，有時(shí)我們用肉眼也能看到汽油液面有一層蒸騰著的霧氣，1升汽油能揮發(fā)成100～400升蒸氣，擴(kuò)散到很大的空間。有時(shí)火源離開(kāi)汽油似乎很遠(yuǎn)，但與汽油蒸氣接觸仍會(huì)引起燃燒，如果汽油蒸汽的濃度達(dá)到爆炸極限，就會(huì)引起爆炸。卸油時(shí)充裝過(guò)快，無(wú)防靜電設(shè)施或防靜電設(shè)施未起作用和未穿戴防靜電勞動(dòng)保護(hù)護(hù)具等，會(huì)引起大量的靜電電荷積累（當(dāng)帶電體因電荷積累達(dá)到一定的靜電電位時(shí)一般大于

300v）引起放電，引燃引爆油蒸汽而發(fā)生的事故?；馂?zāi)爆炸的三個(gè)條件為：火源、可燃物、空氣。加油站最需要控制的火源（除明火以外）是靜電放電。靜電放電導(dǎo)致火災(zāi)爆炸需要具備以下四個(gè)條件：一是靜電的來(lái)源有的產(chǎn)生；二是使靜電能夠積聚，并且要有足夠大的電場(chǎng)強(qiáng)度和達(dá)到起火點(diǎn)放電的靜電電壓；三是靜電放電所得到的能量能夠達(dá)到爆炸性混合物的最小燃點(diǎn)；四是靜電放電火花的周圍環(huán)境有爆炸性混合物存在，其濃度達(dá)到爆炸極限。我們?cè)谛队筒僮鲿r(shí)一定要防止油氣外泄，并防止有明火，同時(shí)防止靜電的積聚，卸油作業(yè)時(shí)要做好以下幾點(diǎn)：一是操作人員必須穿戴好防靜電護(hù)具。油罐車卸油前要按裝好防靜電夾鉗。二是通過(guò)液位或人工計(jì)量檢測(cè)確認(rèn)所卸油品的空容量；防止跑、冒油事故發(fā)生。三是采用密封卸油，按工藝要求連接接卸油管；同時(shí)暫停加油作業(yè)。四是司機(jī)緩慢開(kāi)啟罐車卸油閥，卸油員集中精力監(jiān)視卸油全過(guò)程，隨時(shí)處理突發(fā)的問(wèn)題；卸車司機(jī)不得遠(yuǎn)離現(xiàn)場(chǎng)。五是卸油完畢，卸油員登上罐車檢查確認(rèn)油品卸凈，關(guān)好油罐閥門，使油罐處于密閉狀態(tài)。罐車司機(jī)應(yīng)關(guān)好罐車所有閥們及帽口，使罐車出于密封狀態(tài)。六是引導(dǎo)油灌車離站。七是罐內(nèi)油品靜止10分鐘后，方可通知加油員開(kāi)機(jī)加油。

二、加油區(qū)的火災(zāi)爆炸事故

（1）位于鄭州市商城路鬧市區(qū)的鄭州標(biāo)準(zhǔn)石化有限公司商城路加油站發(fā)生爆炸，事故時(shí)間2001年7月23日下午3時(shí)，事故導(dǎo)致1人重傷，10人輕傷和輕微傷，4人死亡，爆炸直接造成近20萬(wàn)元的財(cái)產(chǎn)損失，有關(guān)責(zé)任人被判3年有期徒刑。爆炸原因主要是一臺(tái)加油機(jī)漏油滲入地下室，由于地下室汽油蒸汽揮發(fā)遇電打火導(dǎo)致的。（2）一輛摩托車駕駛員到加油站給車加油的時(shí)候，把摩托車停在計(jì)量機(jī)旁，關(guān)閉發(fā)動(dòng)機(jī)之后用發(fā)動(dòng)機(jī)鑰匙打開(kāi)油箱蓋等著加油。加油員看到客人就迎了上來(lái)，將合成樹(shù)脂材料的油箱蓋放在旁邊的水泥防護(hù)臺(tái)上，沒(méi)有帶防護(hù)手套，直接用手握住加油柄，把加油槍口接近摩托油箱口開(kāi)始加油。等油加到1.5升時(shí)，突然從摩托車加油口處冒出火苗。（3）成都市高新區(qū)某加油站內(nèi)一臺(tái)加油機(jī)突然發(fā)生爆炸，事故發(fā)生時(shí)間是2001年12月24日上午10：54。對(duì)這幾起事故，我們分別作分析：第一起是加油機(jī)漏油，加上電氣打火，引起的爆炸事故；第二起是摩托車加油沒(méi)有按照規(guī)程操作，靜電放電引起的火災(zāi)事故。員工沒(méi)有穿防靜電純棉制服、鞋，加油機(jī)接地線損斷，而且在給這臺(tái)車加油前已加出了221升，加油之前，沒(méi)有按照規(guī)定的要求把加油槍?xiě)?yīng)先搭在油箱口，把靜電導(dǎo)走后從新啟動(dòng)加油泵，由于靜電聚集，在油箱口處引起放電，引燃油箱口汽油蒸氣；第三起是加油機(jī)泄露并加油機(jī)有爆炸空間，線路漏電引起的爆炸事故。通過(guò)分析我們知道要避免以上事故的發(fā)生，就要做到以下幾點(diǎn)：一是加油站的設(shè)備、設(shè)施要定期檢查、檢修、檢測(cè)并形成制度。發(fā)現(xiàn)問(wèn)題、隱患要及解決、整改。二是加油站工作人員上班要穿著防靜電工作服具。三是要嚴(yán)格執(zhí)行加油規(guī)程，加油站十不準(zhǔn)等有關(guān)規(guī)定。

三、檢修、清罐時(shí)引起的火災(zāi)爆炸事故

（1）在阜新市振興加油總站，阜新遠(yuǎn)弘能源科技有限公司租用振興加油總站一個(gè)油罐和這個(gè)油罐所連接的一把加油槍。2011年9月24日上午9時(shí)左右，遠(yuǎn)弘能源部門經(jīng)理胡龍飛雇來(lái)劉學(xué)云等3名清灌工人，現(xiàn)場(chǎng)簽訂清罐協(xié)議后，開(kāi)始清罐作業(yè)，下午四時(shí)左右第一個(gè)油罐清洗結(jié)束，胡龍飛和劉學(xué)云結(jié)清費(fèi)用后，李博（站長(zhǎng)）提出再清洗一個(gè)油罐（汽油罐），向油罐里送風(fēng)后，李博、李博的妻子、胡龍飛及王昌偉（遠(yuǎn)弘能源）陸續(xù)離開(kāi)了油罐區(qū)，送風(fēng)5、6分鐘左右，油罐區(qū)域瞬時(shí)燃燒起來(lái)，清罐的三名工人渾身是火跑出油罐區(qū)域。120救護(hù)車緊急將三名傷者送往礦總院燒傷整容科急救。事故發(fā)生后，海州消防大隊(duì)第一時(shí)間趕到現(xiàn)場(chǎng)，（當(dāng)時(shí)現(xiàn)場(chǎng)明火已經(jīng)被加油站的員工撲滅），事故現(xiàn)場(chǎng)保存完好。2011年2月26日，清罐工人劉學(xué)云經(jīng)搶救無(wú)效死亡。此次事故造成1人死亡，兩人重傷。（2）在江蘇省宜興市官村鎮(zhèn)春江加油站員工在清洗埋地式柴油罐時(shí)發(fā)生爆燃事故，事故時(shí)間是2001年4月26日14時(shí)20分，事故導(dǎo)致1人死亡。（3）在江蘇省興化市唐劉加油站發(fā)生油罐爆炸事故，事故時(shí)間2002年3月11日下午1時(shí)15分左右，當(dāng)場(chǎng)2人被炸死，另有2人受傷。事故發(fā)生的主要原因是由于加油站油罐改造施工，罐內(nèi)殘余氣油遇到明火引起爆炸。第一起事故是清柴油罐殘留的油蒸汽與當(dāng)時(shí)風(fēng)機(jī)排出的汽油蒸汽混合在一起，油罐區(qū)內(nèi)油蒸汽與空氣混合濃度達(dá)到了爆炸極限范圍內(nèi)（1.3%～

篇8

[Abstract] Wet encased steel strengthening technology is a major means of strengthening existing housing construction, and has been widely used in the engineering actual reinforcement. Combined with an existing building reinforcement engineering in Huizhou city, the wet encased steel strengthening calculation process and matters needing attention are elaborated, and provides some experience and methods for engineering designers on reinforcement design

[關(guān)鍵詞] 濕法外包鋼加固 結(jié)構(gòu)膠 灌漿

[Keywords]wet encased steel strengthening technology; structural glue; grouting

中圖分類號(hào)：TU753.8文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：

1．前言

由于城市建筑空間的日益緊張，考慮到環(huán)保，節(jié)能的要求，對(duì)既有建筑的加固補(bǔ)強(qiáng)研究已經(jīng)引起了我國(guó)土木工程界的廣泛重視。原蘇聯(lián)在工程加固方面起步較早，對(duì)工業(yè)廠房加固設(shè)計(jì)構(gòu)造積累了較為豐富的經(jīng)驗(yàn)，并出版了專門的結(jié)構(gòu)加固構(gòu)造圖集；英國(guó)，原聯(lián)邦德國(guó)在混凝土結(jié)構(gòu)缺陷修補(bǔ)，防水與防腐處理方面也積累了一定的經(jīng)驗(yàn)。我國(guó)截至目前繼續(xù)已經(jīng)頒布了《混凝土結(jié)構(gòu)加固技術(shù)規(guī)范》，《建筑抗震加固技術(shù)規(guī)范》，《混凝土結(jié)構(gòu)加固設(shè)計(jì)規(guī)范》等行業(yè)指導(dǎo)規(guī)范和《磚混結(jié)構(gòu)加固與修復(fù)》圖集。

外包鋼加固法是混凝土加固技術(shù)中的一種，適用于使用上不允許增大混凝土截面尺寸，而又需要大幅度提高承載力的混凝土構(gòu)件的加固，由于具有施工周期短，對(duì)生產(chǎn)生活影響小，設(shè)計(jì)簡(jiǎn)單的特點(diǎn)，在實(shí)際加固工程中得到廣泛應(yīng)用，具體可以細(xì)分為干式和濕式兩類，其中又以濕法加固應(yīng)用較多,一般用于加固鋼筋混凝土梁，柱，桁架，腹桿等構(gòu)件。

2．濕法外包鋼技術(shù)原理和注意事項(xiàng)

2.1 濕法外包鋼加固技術(shù)原理

結(jié)構(gòu)濕法外包鋼加固是建筑工程加固技術(shù)的一類，也即以乳膠水泥粘結(jié)或者以改性環(huán)氧樹(shù)脂化學(xué)灌漿作為粘結(jié)劑，將鋼板粘貼在鋼筋混凝土結(jié)構(gòu)的表面，能達(dá)到加固和增強(qiáng)原結(jié)構(gòu)強(qiáng)度和剛度的目的。

2.2濕法外包鋼加固主要適用條件

一般濕法外包鋼技術(shù)可以用于軸心受壓構(gòu)件正截面加固，偏心受壓構(gòu)件正截面加固，受彎構(gòu)件正截面加固以及受彎構(gòu)件斜截面加固計(jì)算，主要適用于需大幅度提高截面承載力和抗震能力的混凝土梁、柱的加固。

2.3濕法外包鋼加固的注意事項(xiàng) 濕法外包鋼加固過(guò)程應(yīng)注意如下事項(xiàng)：外包鋼灌縫膠縫厚度的控制，宜在3~5mm；對(duì)于表面，包括混凝土表面和型鋼表面，應(yīng)涂抹高強(qiáng)度等級(jí)水泥砂漿防護(hù)層；型鋼應(yīng)優(yōu)先考慮角鋼，具體規(guī)則依據(jù)計(jì)算而定；作為綴板的扁鋼和角鋼焊接要求應(yīng)嚴(yán)格遵循焊接規(guī)范要求；外包鋼連接和錨固應(yīng)可靠，簡(jiǎn)單；同時(shí)對(duì)于采用化學(xué)灌漿的外包型鋼表面溫度應(yīng)該控制在小于60度，對(duì)于具有腐蝕性介質(zhì)的環(huán)境應(yīng)該對(duì)型鋼構(gòu)件采用相關(guān)防護(hù)措施。

3．某既有加固項(xiàng)目應(yīng)用分析

3.1 項(xiàng)目概況

本項(xiàng)目為惠東縣稔山鎮(zhèn)辦公樓惠州市某辦公大樓，結(jié)構(gòu)為六層框架結(jié)構(gòu)，辦公樓部分框架柱出現(xiàn)鋼筋銹蝕影響正常使用，根據(jù)甲方要求，需要把原結(jié)構(gòu)中受損柱進(jìn)行受力分析加固補(bǔ)強(qiáng)計(jì)算。

3.2 具體計(jì)算分析

考慮到具體結(jié)構(gòu)地處沿海旁，海水咸份對(duì)周圍環(huán)境產(chǎn)生影響，重新設(shè)定環(huán)境類別為二類，因此考慮外包粘鋼加固。

根據(jù)對(duì)既有建筑的鑒定報(bào)告提供的數(shù)據(jù)，利用電算分析工具進(jìn)行模型分析，對(duì)照原設(shè)計(jì)圖紙配筋，找出強(qiáng)度承載力不滿足要求的構(gòu)件，進(jìn)行外包粘鋼加固

具體柱構(gòu)件加固結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)施工，平面圖及柱圖如下圖示：

計(jì)算依據(jù)：

《混凝土結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)規(guī)范》GB50010-2002、《混凝土結(jié)構(gòu)加固設(shè)計(jì)規(guī)范》GB50367-2006、

《建筑物結(jié)構(gòu)安全性檢測(cè)鑒定報(bào)告》，報(bào)告編號(hào)：D2008JD0458；

《鉆芯法檢測(cè)混凝土強(qiáng)度檢測(cè)報(bào)告》，報(bào)告編號(hào)：F2008（02）0188

二、已知參數(shù)：-

1、軸心受壓構(gòu)件（矩形）正截面加固計(jì)算公式：

N≤0.9φ(fc0Ac0+ f'y0 A's0-+αa f'a A'a)

2、根據(jù)有關(guān)規(guī)范及依據(jù)可知：

根據(jù)鑒定報(bào)告，取一邊柱代表計(jì)算，bXh=400X500,加固后BXH=500X600，L0/b=3600/500=7.2,按插入法φ=0.98，

計(jì)算過(guò)程，按《砼規(guī)范》，

Nmax=0.9φ(fcAc+ fy As)=3969K N

按《砼結(jié)構(gòu)加固設(shè)計(jì)規(guī)范》

N≤0.9φ(fc0Ac0+ f'y0 A's0+αa f'a A'a)

A'a≥【N/（0.9φ）－fc0Ac0－ f'y0 A's0】/αa f'a=1.72cm2

實(shí)取4 L 80×5等邊角鋼，Aa=4*7.912=31.65cm2

4L80X5等邊角鋼滿足。

1）第一層估算柱力為1500KN，（依報(bào)告）

按四級(jí)抗震等，軸壓比=N/ fcAc

加固后每邊加大100 mm，砼強(qiáng)度C20，

加大截面后軸壓比=N/ fcA'c=0.52,符合規(guī)范要求。

2）第二層估算柱力為1200KN，（依報(bào)告）

按四級(jí)抗震等，軸壓比=N/ fcAc

加固后每邊加大100 mm，砼強(qiáng)度C20，

加大截面后軸壓比=N/ fcA'c=0.42,符合規(guī)范要求。

3.3 注意事項(xiàng)：

1）對(duì)粘合面進(jìn)行打磨時(shí)，必須漏出混凝土新面并保證表面平整，四周磨出小圓角，用鋼絲刷刷毛，并用壓縮空氣吹凈。

2）鋼板粘結(jié)面必須進(jìn)行除銹和粗糙處理，打磨粗糙度越大越好，打磨紋路和鋼板受力方向垂直。

3）用丙酮或酒精清洗混凝土，鋼板表面，要求混凝土，鋼板表面無(wú)灰塵，無(wú)油污

4）將清洗后的鋼板套入錨固螺栓，利用螺栓塊調(diào)節(jié)鋼板和混凝土之間的空隙，根據(jù)混凝土表面的平整情況，空隙厚度一般控制在2~3mm

5）將配置好的液態(tài)結(jié)構(gòu)膠裝入灌漿罐中，啟動(dòng)空壓機(jī)和灌漿裝置向鋼板和混凝土表面之間的空腔內(nèi)灌漿，灌膠壓力為0.2mpa，壓力應(yīng)從低逐漸升高，達(dá)到0.2mpa時(shí)應(yīng)保持穩(wěn)定

6）混凝土表面應(yīng)用角磨機(jī)打磨處理，清除表面松散物和油污，直至完全露出新面，鋼板粘結(jié)面必須進(jìn)行除銹和粗糙處理，直至完全出現(xiàn)金屬光澤，并要求粗糙度越大越好，打磨紋路和鋼板受力方向垂直。加固施工必須要有加固施工資質(zhì)的單位

4．總結(jié)

外包粘鋼加固技術(shù)從理論和工程實(shí)踐上已經(jīng)得到了比較完善的研究，但進(jìn)行的具體的加固補(bǔ)強(qiáng)處理時(shí)必須要對(duì)既有建筑的材料進(jìn)行鑒定，依據(jù)現(xiàn)有相關(guān)規(guī)范和電算結(jié)果對(duì)比原圖紙找出有待補(bǔ)強(qiáng)構(gòu)件，施工操作必須嚴(yán)格遵循施工順序，嚴(yán)格依據(jù)施工圖紙施工，加固完成后必須做好相關(guān)檢驗(yàn)。本工程交付使用后證明加固效果良好，業(yè)主評(píng)價(jià)較高，滿足了設(shè)計(jì)之前的各種要求，取得了較好的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益，是一個(gè)成功的外包粘鋼加固設(shè)計(jì)項(xiàng)目。

參考文獻(xiàn)

【1】《混凝土結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)規(guī)范》GB50010-2002 《混凝土結(jié)構(gòu)加固設(shè)計(jì)規(guī)范》GB50367-2006

【2】《外包鋼加固鋼筋混凝土構(gòu)件的計(jì)算及有限元分析》

篇9

[關(guān)鍵詞] 甲狀腺功能亢進(jìn)；甲狀腺激素；骨代謝相關(guān)細(xì)胞因子；骨代謝

[中圖分類號(hào)] R581.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2012）08（c）-0052-03

Study on the changes of bone metabolism related cytokines and bone metabolic indexes of patients with hyperthyroidism

WU Ping

Department of Endocrinology, Qianjiang Central Hospital of Chongqing City, Chongqing 409000, China

[Abstract] Objective To study varying pattern of bone metabolism related cytokines and bone metabolic indexes of patients with hyperthyroidism. Methods 64 cases of patients with hyperthyroidism in our hospital from May 2010 to January 2011 were selected as the observation group, at the same time 64 healthy personnel were selected as the control group. The thyroid hormone, bone metabolism related cytokines and bone metabolic indexes between the two groups were detected and compared. Results Thyroid related hormones: FT4, FT3 and PTH of the observation group were all higher than those of the control group; TSH was lower than that of the control group (P < 0.05). Bone metabolism related cytokines: IL-6 of the observation group was higher than that of the control group; CT, TNF and IGF-Ⅱ were all significantly lower than those of the control group (P < 0.05). Bone metabolic indexes: Ca2+, AKP, BGP, I CTP and P I NP of the observation group were all higher than those of the control group; BMD was lower than that of the control group (P < 0.05). Conclusion Changes of bone metabolism related cytokines and bone metabolic indexes of patients with hyperthyroidism are obvious, and it should be paid enough attention during treatment.

[Key words] Hyperthyroidism; Thyroid hormone; Bone metabolism related cytokines; Bone metabolic

甲狀腺功能亢進(jìn)（甲亢）在臨床上主要?dú)w屬于自身免疫性疾病，患者表現(xiàn)為機(jī)體代謝紊亂，同時(shí)血清中存在的抗甲狀腺激素可刺激甲狀腺細(xì)胞分泌過(guò)量的甲狀腺激素[1]。另外，甲亢患者機(jī)體除表現(xiàn)出甲狀腺的癥狀體征及甲狀腺激素的變化外，較多其他因子也可隨之波動(dòng)，對(duì)其進(jìn)行研究可以進(jìn)一步為甲亢的診斷治療提供依據(jù)[1-2]。以往較多研究認(rèn)為，甲狀腺激素與骨成熟、發(fā)育有關(guān)[3-5]。本文筆者就甲亢患者骨代謝相關(guān)細(xì)胞因子及骨代謝指標(biāo)的變化規(guī)律進(jìn)行研究，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下：

1 資料與方法

篇10

子亡夫故悲情難抑

兒媳攜孫出走雪上加霜

2012年6月15日，武漢石門峰陵園。陳曼華一手牽著6歲的孫子小寶，另一手捧著丈夫張洪的骨灰壇，站在兒子張心的墓前：“兒啊，你的小寶來(lái)看你了！媽來(lái)看你了！你爸怕你一個(gè)人太孤單，也來(lái)陪伴你了……”

丈夫亡故的“頭七”還未滿，陳曼華這天回漢口的家，忽然發(fā)現(xiàn)孫子小寶和兒媳伍霞都不見(jiàn)了。遍尋無(wú)果后，她得出結(jié)論：伍霞帶著孫子跑了！她一下癱在地上：“老頭子啊，我這是造了什么孽啊……”

1969年，在武漢船舶廠工作的陳曼華不顧父母的強(qiáng)烈反對(duì)，嫁給遠(yuǎn)在大西北某軍企工作的張洪。雖然兩地分居，但陳曼華愿意。1972年，兒子張心出生。然而幸福的生活沒(méi)維持多久，陳曼華的公婆相繼暴病身亡，留下張洪4個(gè)未成年的妹妹。

丈夫遠(yuǎn)在大西北，28歲的陳曼華毅然扛起了照顧丈夫4個(gè)妹妹的重任。日子過(guò)得異常艱難，她就帶著妹妹們?nèi)ネ谝安耍佘娓?，以補(bǔ)貼家用……1978年，幾經(jīng)周折，陳曼華離開(kāi)武漢調(diào)到赤壁一家軍工企業(yè)，張洪也從大西北調(diào)到赤壁山區(qū)工作。這樣，一家人團(tuán)圓了。豈料，1981年7月，張洪被診斷為“鼻咽部漿細(xì)胞惡性腫瘤”，經(jīng)過(guò)兩次手術(shù)，他暫且保命。此后，家里平靜了幾年。

2002年，陳曼華的獨(dú)生子張心和通山女孩伍霞成家，幾年后生下兒子小寶。可2012年，張心突然被查出也患了絕癥――胃癌，且是晚期。一家五口，一夜之間出現(xiàn)兩個(gè)絕癥病人。悲痛之下，本已闖過(guò)癌魔奪命關(guān)口的張洪舊病復(fù)發(fā)，父子倆同時(shí)住進(jìn)了湖北省人民醫(yī)院。為了給兒子省下救命錢，張洪不愿再進(jìn)行手術(shù)，只想把錢都花在救治兒子身上。然而，他還是沒(méi)有挽回兒子的命。2012年寒涼的早春，陳曼華的獨(dú)生子張心沒(méi)能熬過(guò)美麗的春天，先一步離開(kāi)早年患癌癥的父親而去。

黑發(fā)人送白發(fā)人的悲劇，讓張洪身上的癌魔如同點(diǎn)燃導(dǎo)火索的定時(shí)炸彈。2012年6月，張洪也撒手人寰。臨終前，他最為牽掛的是兒媳和孫子，他拉著陳曼華的手叮囑：“一定要把他倆安頓好，把孫子的戶口遷回武漢……”

丈夫去世后，陳曼華希望實(shí)現(xiàn)丈夫的遺愿，夢(mèng)想把孫子的戶口遷回武漢老家，唯一的辦法就是媳婦改嫁到有武漢戶口的男人，然后，孫子才能隨母親投親靠友進(jìn)武漢。可她沒(méi)想到，在這個(gè)悲苦的當(dāng)口，本該與自己相依為命的伍霞，卻給這個(gè)風(fēng)雨飄搖的家傷口上撒下一把鹽，帶著兒子人間蒸發(fā)了！

陳曼華狂躁不安，與兒媳的往事刺痛著她的心。痛定思痛，他心情漸漸平靜下來(lái)，還是得顧全家庭大局，實(shí)現(xiàn)丈夫在世時(shí)一直糾結(jié)在心里的夢(mèng)：把孫子的戶口轉(zhuǎn)到武漢。首要面臨的是，做通兒媳伍霞的工作。

伍霞，1975年生于咸寧通山一個(gè)農(nóng)家。她技校畢業(yè)，經(jīng)媒人牽線，嫁給了張心。因公公常年治病，家庭并不寬裕，她和婆婆時(shí)常發(fā)生家庭糾紛。

2003年，張洪病情再度復(fù)發(fā)，情急之下，陳曼華不顧兒媳的強(qiáng)烈反對(duì)，將蒲圻一套小產(chǎn)權(quán)房賣了十多萬(wàn)元用于丈夫的急救。而這套房，是她承諾準(zhǔn)備過(guò)戶給兒媳的。房子沒(méi)了，伍霞一氣之下遠(yuǎn)走深圳打工。兒媳走后，陳曼華又當(dāng)奶奶又做媽地養(yǎng)育小寶。2007年，陳曼華退休后，用兩口子以及兒子多年積蓄在武漢買了一室一廳的二手房，全身心撫育這個(gè)孩子，并將孫子送進(jìn)一家雙語(yǔ)幼兒園上學(xué)。盡管如此，婆媳之間的房產(chǎn)硝煙并未散去。在伍霞看來(lái)，老公走了，公公也不在世了，家庭收入只有婆婆1000多元的退休金，這個(gè)家讓伍霞徹底失望……

陳曼華的親友們猜測(cè)，伍霞可能帶著孩子回了咸寧山區(qū)娘家。如果貿(mào)然去那里找小寶，婆媳之間難免發(fā)生沖突。即使找到小寶，伍霞也絕不肯讓婆婆把孩子帶回武漢，弄不好，兩個(gè)家庭為爭(zhēng)奪孩子還會(huì)發(fā)生過(guò)激行為。親友們于是勸說(shuō)陳曼華一邊冷處理，一邊從查找伍霞的下落。

婆媳艱難的較量

寬恕的力量告慰亡者

漫無(wú)目標(biāo)的等待，折磨著風(fēng)燭殘年的陳曼華，她幾天不吃不喝。然而，在經(jīng)受這么多年風(fēng)風(fēng)雨雨的洗劫之后，她就像拳擊運(yùn)動(dòng)員一樣，練就了抵御生死打擊的“抗打力”。她要等，等著自己的寶貝孫子某一天從天而降。

這天，一個(gè)來(lái)電讓她驚跳起來(lái)，竟是小寶的來(lái)電。原來(lái)，小寶果真被伍霞帶回通山老家大山深處，但這個(gè)聰穎的孩子還記得奶奶家的電話。于是，趁外婆家沒(méi)人，就拿起電話打通了奶奶家的電話：“奶奶，我在外婆家里……”可話還沒(méi)完，電話那頭被大人掐斷了。得知孫子的下落，陳曼華淚流滿面?！拔业膶O子還安然無(wú)恙，他好好的呢！”

此時(shí)，陳曼華哪里知道，丈夫死后，伍霞對(duì)這個(gè)家，尤其對(duì)婆婆已經(jīng)失望，開(kāi)始考慮自己的未來(lái)：自己還年輕，不可能守著一個(gè)孤老婆子一輩子，這個(gè)家又該何去何從？重重糾結(jié)下，她做出一個(gè)決定：偷偷將兒子雪藏老家，不讓婆婆見(jiàn)面，也不讓婆婆知道孫子的下落。她要以此窺探陳曼華下一步的打算，也冷靜下來(lái)思考自己人生的出路……

然而，伍霞畢竟出生于一個(gè)淳樸的山民之家，父母從小就教育她與人為善。這個(gè)家的厄運(yùn)讓她心痛的同時(shí)，她也對(duì)婆婆很是同情：老年喪子喪夫的痛，該讓她如何承受？

一個(gè)月過(guò)去，她焦躁起來(lái)，擔(dān)心婆婆想孫子鬧出人命。2012年7月的一天，她悄悄潛回武漢，偷偷打聽(tīng)到婆婆安然無(wú)恙后，就租房住在武漢打工。

兒媳的到來(lái)，很快被陳曼華的親友打聽(tīng)到，陳曼華歡喜不已，于是幾番周折打聽(tīng)到兒媳的住處，開(kāi)始“談判”。

婆媳見(jiàn)面，分外尷尬。好半天，陳曼華才顫抖著說(shuō)：“為了小寶有個(gè)好的前途，你得在武漢重新組成家庭……”這話還沒(méi)出口，伍霞就來(lái)氣，以為婆婆不準(zhǔn)她改嫁呢：“嫁不嫁人跟你婆婆沒(méi)關(guān)系，還以為是舊社會(huì)，死了老公女人得守寡終生?！眱合钡脑挘岅惵A一陣心痛：“我這也是為你們娘倆好。”陳曼華把話挑明了。“既然你想到媳婦重新成家能夠有利于孫子，你當(dāng)初怎么不為我考慮？做你張家媳婦這多年，為你張家生兒育女，我憑什么一走了之？”說(shuō)到這里，伍霞提起當(dāng)初住房也被公爹在世時(shí)為了治病賣了的事：“雖然產(chǎn)權(quán)不是我伍霞的，但是我是你張家媳婦呀，現(xiàn)在連房子都沒(méi)有住的。”

陳曼華和媳婦伍霞一天一夜的談判以無(wú)果告終。第二天，一夜未眠的陳曼華痛定思痛之后，打算先把孫子弄回武漢上學(xué)，暫時(shí)跟著自己吃住，其他的事情再商量。事實(shí)上，伍霞出走之后，心里雖然痛恨婆婆，但想到她看不見(jiàn)唯一血脈的那種失落，她還是準(zhǔn)備去告訴婆婆將把孩子接回來(lái)。

兩個(gè)人再次見(jiàn)面。在尷尬的一瞬間，還是陳曼華把自己的想法告訴了伍霞，正在托付熟人為媳婦物色對(duì)象。媳婦也告訴婆婆這就去老家接孩子。

2012年9月，小寶回武漢上小學(xué)。每天上下學(xué)，陳曼華接送?？粗@對(duì)祖孫血脈相連，伍霞一路偷偷跟在后面。在伍霞看來(lái)，婆婆顯然在和自己爭(zhēng)奪孩子。

幾天后，伍霞將兒子接到自己身邊，再次向陳曼華提出當(dāng)初房產(chǎn)之爭(zhēng)的事情。陳曼華這才發(fā)現(xiàn)，兒媳其實(shí)還在糾結(jié)那套房子，然而，房子早賣了，她也沒(méi)有錢補(bǔ)償他們娘倆。左思右想后，陳曼華做出一個(gè)決定：為媳婦在武漢重新成個(gè)家，看能不能找一個(gè)有武漢戶口的“上門女婿”，結(jié)婚后就跟自己住在這一室一廳的房子里。日后，再把孫子的戶口投親靠友轉(zhuǎn)來(lái)武漢就行了。

這是一個(gè)大膽的決定。古往今來(lái)，只有母親為女兒找婆家的，哪有婆婆為兒媳找婆家的？而且還準(zhǔn)備搭上一套房子，雖然戶主房產(chǎn)權(quán)還是自己，但是，“請(qǐng)神容易送神難”，一旦媳婦嫁人住在自己房子里不走，又容不下這個(gè)外人婆婆那就倒霉了。這個(gè)決定，陳曼華著實(shí)痛苦了好久，但想到孫子有歸宿，自己受點(diǎn)委屈又有什么關(guān)系呢？而自己已風(fēng)燭殘年，給他們娘倆找個(gè)歸屬，這才是自己要做的！

年已70歲的陳曼華于是放下老臉，幾經(jīng)周折再次找到伍霞“談判”。婆婆的到來(lái)，讓伍霞警惕。丈夫沒(méi)了，這個(gè)家對(duì)她全然沒(méi)有意義，她一度對(duì)陳曼華不冷不熱。

陳曼華說(shuō)：“是我們張家對(duì)不起你，讓你和孩子受苦了。心心就這樣走了，留下你們孤兒寡母，我心里也不好受。若有來(lái)生，讓他再?gòu)浹a(bǔ)你吧。我也老了，活不了幾年，你和孩子也是我最后的牽掛。你也很年輕，還要成家，所以，我想，幫你找個(gè)人家，我那房子總是你兒子的，這樣我也放心走了……”

伍霞一直以為，婆婆的到來(lái)就是和自己搶孫子的。在老一輩觀念里，血脈香火根深蒂固。然而，她沒(méi)想到，陳曼華竟是來(lái)為自己找婆家而愿意提供住房。對(duì)婆婆的決定，她有點(diǎn)受寵若驚，然而，她又很快警覺(jué)。陳曼華似乎看出了她的顧慮，說(shuō)：“你放心，你再婚后，小寶依然是你兒子，吃飯上學(xué)的錢還是我負(fù)擔(dān)。我也不會(huì)拖累你……你要是不信，我們可以立下字據(jù)為證?！?/p>

燃燒的悲情走向重生

帶著婆婆一起出嫁

又經(jīng)過(guò)一個(gè)月的四處奔走，陳曼華的苦心終于得到回報(bào)。在中山公園里，伍霞約見(jiàn)陳曼華見(jiàn)面，跟在伍霞身邊有一個(gè)陌生男子。伍霞說(shuō)他叫王浩，在郵局工作，看見(jiàn)陳曼華到處為媳婦找個(gè)好婆家的信息后，與伍霞投緣，今天特地和伍霞來(lái)見(jiàn)一見(jiàn)婆婆。

陳曼華一看這王浩，感覺(jué)他比較老實(shí)，印象不錯(cuò)，首先想到，不會(huì)到了自己家里把我這老太婆折磨死吧，于是問(wèn)王浩在哪里知道伍霞的信息的。原來(lái)，陳曼華幾乎一有時(shí)間，她都去中山公園的自由戀愛(ài)的露天相親場(chǎng)所，一邊掛字條，一邊坐在那里和爹爹婆婆天，這里大多數(shù)都是上輩人為下輩人代替找對(duì)象的地方，也有男女們自己來(lái)找對(duì)象，卻假裝幫別人查看信息的。因此，王浩告訴陳曼華，說(shuō)陳師傅您放心好了，我早就注意到你，看見(jiàn)您為媳婦找男家，的確很好奇，于是多次側(cè)面打聽(tīng)，所以，確認(rèn)您是個(gè)好心的婆婆，這媳婦伍霞也許不錯(cuò)。這樣，就和伍霞掛上鉤了。

陳曼華一聽(tīng)，驚喜不已，原來(lái)這王浩很有心機(jī)啊，不過(guò)看人外貌不錯(cuò)，也有一份基本工作，起碼不愁生活吧。她當(dāng)場(chǎng)就說(shuō)，蠻好的，你們能走到一起，我這個(gè)以前的婆婆感到高興。陳曼華這時(shí)有點(diǎn)吞吞吐吐地說(shuō)：“伍霞告訴過(guò)你我們的具體家庭背景沒(méi)有?。俊?/p>

這時(shí)，伍霞開(kāi)口了，說(shuō)：“王浩知道了，只是有一個(gè)要求不知道你怎么樣?！标惵A立即問(wèn)：“你說(shuō)，是么事？”伍霞說(shuō)：“房子是太小了，我們結(jié)婚住在一起很不方便，三代人一室一廳?！标惵A點(diǎn)頭，說(shuō)：“擠哈子么辦呢?！蔽橄贾苯诱f(shuō)了：“你能不能出去租一間房子單獨(dú)住，我們給房租？”

伍霞這話一出口，陳曼華沒(méi)想到，這不是還沒(méi)有進(jìn)門就趕走我這個(gè)老婆子嗎！頓時(shí)，傷心的淚水差點(diǎn)落地，卻狠狠地吞了回去，她好半天才回過(guò)神來(lái)，說(shuō)：“好吧，希望你把小寶帶好就是了，以后我住哪里再說(shuō)吧?！边@時(shí)，王浩一把拉著陳曼華的雙手，激動(dòng)地說(shuō)：“謝謝您！伍霞開(kāi)玩笑逗您呢。”