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[論文關(guān)鍵詞]乙型肝炎；防治

[論文摘要]乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV）引起的肝臟炎性損害，本文從乙型肝炎病毒基因診斷的臨床應(yīng)用及乙型肝炎病毒基因診斷結(jié)果的臨床意義入手，分析了乙型肝炎的防治工作。

乙型肝炎是我國(guó)當(dāng)前流行最為廣泛、危害性最嚴(yán)重的傳染病之一，而對(duì)嚴(yán)峻的乙型肝炎防治形勢(shì)，我國(guó)進(jìn)行了大量研究，乙型肝炎防治研究力度不斷加大，研究活動(dòng)趨于深入[1]。

1乙型肝炎病毒基因診斷的臨床應(yīng)用

乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV）引起的肝臟炎性損害，因此，對(duì)HBV感染過(guò)程及其對(duì)肝臟的損害過(guò)程的認(rèn)識(shí)，是有效防治乙型肝炎的基礎(chǔ)?？偨Y(jié)HBV感染、HBV基因型與遺傳學(xué)研究、免疫機(jī)制、肝臟損傷的組織學(xué)與肝癌發(fā)生的研究、肝移植研究、臨床研究、乙型肝炎治療、病毒抗性以及綜合防治等方面的研究，可以發(fā)現(xiàn)，以往所有的研究都以HBVDNA水平作為乙型肝炎體內(nèi)HBV感染規(guī)律研究的基礎(chǔ)，以谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）水平作為肝臟功能水平的最基本依據(jù)[2]。

1.1乙型肝炎病毒基因診斷的技術(shù)選擇

乙型肝炎的基因診斷包括病毒載量、基因種類、基因分型、亞型和變異的檢測(cè)。HBV病毒載量的檢測(cè)是判斷疾病進(jìn)程、針對(duì)性地開(kāi)展臨床治療的基本依據(jù)；HBV基因型和變異的檢測(cè)則是判斷HBV變異，對(duì)病毒的耐藥性進(jìn)行跟蹤分析，有效開(kāi)展抗病毒治療的基本依據(jù)。病毒載量和突變檢測(cè)的結(jié)合是優(yōu)化HBV抗病毒治療控制的根本措施。HBV病毒載量的檢測(cè)技術(shù)包括PCR測(cè)定和DNA生物傳感器等，而核苷酸序列測(cè)定、限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析（RFLP）、DNA雜交和基因芯片則主要用于基因型和耐藥突變型的檢測(cè)[3]。

1.1.1定量PCR測(cè)定定量PCR多用于病毒載量的分析，其檢測(cè)結(jié)果的臨床意義為可用于治療前后監(jiān)測(cè)、藥物療效考核、治療效果觀察。為便于操作和分析，世界衛(wèi)生組織（WHO）建立了HBVDNA定量單位的國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)（IU），該單位已應(yīng)用于商業(yè)產(chǎn)品和臨床診治中。目前，實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)發(fā)展已經(jīng)較為成熟，能準(zhǔn)確反映血液中病毒核酸的含量，且具有省時(shí)、費(fèi)用相對(duì)較低的特點(diǎn)。

1.1.2DNA生物傳感器DNA生物傳感器是利用特定的生物活性材料與HBVDNA相互作用，將其轉(zhuǎn)換成物理或化學(xué)信號(hào)，從而快速地檢測(cè)微量的DNA信號(hào)，因而在病毒載量的檢測(cè)應(yīng)用中具有快速、簡(jiǎn)便的優(yōu)點(diǎn)。

1.1.3限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析技術(shù)可用于檢測(cè)HBV基因型，具有與核苷酸測(cè)序技術(shù)同樣的靈敏性和特異性；與核苷酸測(cè)序技術(shù)不同的是，限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析可用于混合型感染的檢測(cè)（突變病毒占5%～10%時(shí)可檢測(cè)）。由于具有實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)便、快速，無(wú)需特殊儀器等諸多特點(diǎn)，限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析在大規(guī)模臨床檢驗(yàn)中應(yīng)用廣泛[4]。

1.1.4DNA雜交DNA雜交技術(shù)可用于檢測(cè)HBV基因型和耐藥突變型。根據(jù)放射性同位素和熒光分子特異性探針的不同，可以發(fā)展多種DNA雜交技術(shù)。利用PCR和LightCycler試驗(yàn)的結(jié)合，可用于鑒定耐藥突變，但該方法會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性，且突變的病毒要占總數(shù)的5%～10%時(shí)才能檢測(cè)到。

1.2病毒基因診斷的臨床應(yīng)用

1.2.1隱性感染檢測(cè)中的應(yīng)用[5]由于HBV抗原在血液中的濃度較高，HBV顯性感染一般通過(guò)抗原檢測(cè)即能發(fā)現(xiàn)；但對(duì)于HBV隱性感染，由于HBVDNA與血清學(xué)標(biāo)志相互獨(dú)立，基因診斷就成為確定乙型肝炎感染狀態(tài)的主要依據(jù)。隱性乙型肝炎病毒感染的特點(diǎn)為乙型肝炎表面抗原(HBsAg)陰性者的組織中持續(xù)存在HBVDNA，其可能原因包括：①多年的HBV慢性攜帶使外周血中的乙型肝炎表面抗原降至可檢測(cè)水平，病毒抗原檢測(cè)時(shí)血清學(xué)表現(xiàn)為HBsAg陰性、抗HBc(乙型肝炎核心抗體)陽(yáng)性；②HBV的變異導(dǎo)致表面抗原構(gòu)象變化，從而使其無(wú)法與HBsAg試劑相結(jié)合；③免疫沉默導(dǎo)致血清學(xué)標(biāo)志消失；④乙型肝炎康復(fù)者體內(nèi)仍存在低水平的HBVDNA復(fù)制，時(shí)間可持續(xù)數(shù)年。

1.2.2輸血血液篩選中的應(yīng)用目前的輸血血液篩選采用抗原檢測(cè)技術(shù)，但基因檢測(cè)可以做更為準(zhǔn)確的判斷。國(guó)外在輸血血液篩選過(guò)程中，對(duì)傳統(tǒng)HBsAg試驗(yàn)篩選與HBV核酸擴(kuò)增試驗(yàn)(NATs)篩選對(duì)比研究發(fā)現(xiàn)，集體血樣的HBVNATs試驗(yàn)?zāi)軌驒z測(cè)出一些傳統(tǒng)的試驗(yàn)篩選無(wú)法發(fā)現(xiàn)的感染。但是，技術(shù)難度和經(jīng)濟(jì)因素的限制使得目前HBVNATs還無(wú)法替代HBsAg試驗(yàn)。

1.2.3HBV變異和耐藥性檢測(cè)中的應(yīng)用HBVDNA復(fù)制有一逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程，在這一過(guò)程中病毒較易發(fā)生變異。HBV病毒變異的發(fā)生率比一般的DNA病毒約大10000倍，其變異可引起病毒耐藥性的產(chǎn)生，對(duì)病情和治療產(chǎn)生影響。因此，利用基因診斷來(lái)檢測(cè)病毒變異及耐藥性發(fā)生與否，對(duì)于有針對(duì)性地開(kāi)展乙型肝炎診治具有重要的意義。

2乙型肝炎病毒基因診斷結(jié)果的臨床意義

2.1病毒載量的臨床意義

在感染和治療過(guò)程中，病毒載量會(huì)有所波動(dòng)。當(dāng)HBVDNA水平低于每毫升103拷貝時(shí)，病毒活性很低，提示此時(shí)處于非進(jìn)行性感染期，與患者的接觸（除輸血外）一般不會(huì)造成HBV感染。當(dāng)HBVDNA水平低于每毫升106拷貝（這也是常規(guī)的非核酸擴(kuò)增臨床試驗(yàn)方法檢測(cè)HBVDNA水平的下限）時(shí)，乙型肝炎病毒處于非活性期的可能性較大，此時(shí)其發(fā)生組織、生化或臨床病變的概率較小。當(dāng)病毒載量達(dá)每毫升107拷貝時(shí)，感染進(jìn)入急性肝炎或慢性感染活性期，此時(shí)病毒血癥發(fā)生率高，輸血或醫(yī)護(hù)工作造成感染乙型肝炎病毒的可能性大，垂直傳播、親密接觸和家庭生活也有可能造成HBV感染。當(dāng)病毒載量達(dá)到每毫升108～1011拷貝時(shí)，感染進(jìn)入免疫抑制/免疫耐受期，這一時(shí)期內(nèi)輸血、醫(yī)護(hù)工作、垂直傳播、親密接觸和家庭生活都會(huì)造成HBV感染。2.2HBV基因型的臨床意義

以往的研究表明，我國(guó)漢族地區(qū)HBV毒株以B、C兩種基因型最為常見(jiàn)，新疆地區(qū)以D型為主，西藏地區(qū)的HBV優(yōu)勢(shì)基因型為C/D混合型。HBV基因型的不同可導(dǎo)致不同的臨床類型及預(yù)后的差異。就HBeAg血清轉(zhuǎn)化而言，我國(guó)大陸、臺(tái)灣和香港的研究均表明，B型的轉(zhuǎn)化要比C型更早。就肝病進(jìn)程而言，急性乙型肝炎以B/C混合型為主，B型次之，慢性乙型肝炎、肝硬化、肝癌均以C型為主。就突變率而言，東亞地區(qū)的研究表明，B型和C型毒株的拉米夫定抗性變異的概率相同，而C型毒株核心啟動(dòng)子的變異率要大于B型，這可能是以C型毒株比B型毒株會(huì)導(dǎo)致更為嚴(yán)重的肝病的原因。就拉米夫定用藥而言，我國(guó)大陸、臺(tái)灣的研究表明，B型的拉米夫定治療效果優(yōu)于C型。就干擾素用藥而言，我國(guó)臺(tái)灣和日本的研究表明，B型的拉米夫定治療效果優(yōu)于C型[6]。

3預(yù)防性乙型肝炎疫苗研發(fā)分析

血原性疫苗可能造成一些疾病的血原性傳播，于是各國(guó)又相繼開(kāi)發(fā)基因工程乙型肝炎疫苗。基因工程疫苗作為非干擾素免疫調(diào)節(jié)劑的重要一部分，治療性疫苗在下一階段的乙型肝炎治療研究中極其重要。目前尚未有治療性疫苗獲FDA批準(zhǔn)用于乙型肝炎治療，說(shuō)明治療性疫苗的研究中依然存在很多難題[7]。從第一代血原性乙型肝炎疫苗到第三代合成肽乙型肝炎疫苗，常規(guī)免疫中所使用的乙型肝炎疫苗生產(chǎn)技術(shù)日益成熟。目前的預(yù)防性疫苗研發(fā)方向之一是通過(guò)配伍、劑型、佐劑和傳遞系統(tǒng)等方面的技術(shù)改進(jìn)，或者研制聯(lián)合疫苗，使其在有效性、經(jīng)濟(jì)性和便捷性上更具優(yōu)勢(shì)；另一方向則是開(kāi)發(fā)用于特定群體預(yù)防乙型肝炎的疫苗。這些技術(shù)的進(jìn)步將為各國(guó)的免疫計(jì)劃提供更多、更為便捷有效的工具。過(guò)去幾年的研究表明，治療性乙型肝炎蛋白疫苗的應(yīng)用仍然存在諸多難題，需要進(jìn)一步深入探索其作用機(jī)制，才能更有針對(duì)性地明確研發(fā)方向。由于治療性乙型肝炎DNA疫苗研究仍然處于早期階段，這一方向上的深入研究，有可能成為下一步乙型肝炎治療研究的重要突破口[8]。

4結(jié)束語(yǔ)

乙型肝炎防治，關(guān)乎國(guó)計(jì)民生，任重道遠(yuǎn)。對(duì)于我國(guó)這樣一個(gè)有著1.2億HBV攜帶者的國(guó)家而言，免疫計(jì)劃的實(shí)施緩解了乙型肝炎防治的壓力，但根本的解決辦法是科技發(fā)展所提供的更為有效的防治工具。

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