導(dǎo)語(yǔ)：蒲葵子的體外抗癌活性一文來(lái)源于網(wǎng)友上傳，不代表本站觀點(diǎn)，若需要原創(chuàng)文章可咨詢客服老師，歡迎參考。

作者：陳艷,林新華,李少光,翁繩美,姚宏

【摘要】目的研究蒲葵子提取物的各萃取部位體外抗腫瘤作用。方法采用四甲基偶氮唑鹽(MTT法)比色法,觀察蒲葵子提取物的各萃取部位對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2和白血病細(xì)胞HL60增殖的抑制作用。結(jié)果蒲葵子提取物的各萃取部位在體外對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2和白血病細(xì)胞HL60有明顯的抑制作用,正丁醇部位的半數(shù)抑制率分別為7.94和10.72,效果最為顯著。結(jié)論蒲葵子提取物的各萃取部位能抑制肝癌細(xì)胞HepG2和白血病細(xì)胞HL60的增殖,有較強(qiáng)的體外抗腫瘤活性。

【關(guān)鍵詞】棕櫚科;抗腫瘤藥;提取法

ABSTRACT:ObjectiveToinvestigateanti-tumoreffectoftheextractsofLivistonachinesisinvitro.MethodsThecytotoxiceffectsofthefourkindextractsofLivistonachinesisontwotumorcelllinesculturedinvitroweretestedbyMTTassay.ThetumorcelllineswereHepG2andHL60.ResultsTheextractsofLivistonachinesisinducedsignificantgrowtharrestedintwomalignanttumorcelllineswhichculturedinvitro.IC50ofthesecellsexposedtotheextractsfromN-butanolfor48hoursapproach7.94%and10.72%.ConclusionTheN-butanolextractsofLivistonachinesishadobviousanti-tumoractivityinvitro.

KEYWORDS:Palmaceae;antineoplasticagents;extraction

蒲葵(LivistonachinesisR.Br.)屬于棕櫚科(TrachycarPusFortinei)常綠喬木,蒲葵子為該植物種子,其性味平、淡,具有敗毒抗癌、消瘀止血之功效。民間常用其治療白血病、鼻咽癌、絨毛膜癌、食管癌,效果顯著［1-2］。筆者對(duì)福建產(chǎn)蒲葵子進(jìn)行初步提取和分離,并研究各提取部位體外抗腫瘤活性,篩選有抗癌活性的提取部位。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1試劑

全自動(dòng)酶標(biāo)儀(Mod550,美國(guó)Bio-Rad公司);二氧化碳培養(yǎng)箱(美國(guó)Forma公司);RPMI1640培養(yǎng)基(美國(guó)Gibco公司);小牛血清(美國(guó)Hyclone公司);胎牛血清(澳大利亞Maverick公司);四甲基偶氮唑鹽(MTT，美國(guó)Amresco);胰蛋白酶(美國(guó)Difco公司);噻唑藍(lán)(華美生物工程公司北京分公司);其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.1.2藥物

采集福建福州地區(qū)產(chǎn)蒲葵子,經(jīng)福建醫(yī)科大學(xué)天然藥物學(xué)系張永宏教授鑒定為棕櫚科植物蒲葵的干燥種子。

1.2方法

1.2.1供試品的制備

蒲葵子粗粉1g用70%乙醇10mL回流提取3次(每次2h),合并提取液,濃縮,冷凍干燥,得到醇浸膏。醇浸膏用水30mL混懸,依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取,分別得到萃取液,濃縮,冷凍干燥,得到各個(gè)萃取部位浸膏。分取適量的石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取部位浸膏,以70%乙醇(最大終濃度5‰)助溶,加RPMI1640培養(yǎng)基,配成2000μg/mL樣品準(zhǔn)備液。各樣品準(zhǔn)備液以RPMI1640培養(yǎng)基依次稀釋成終濃度為1000,333,111,36,12μg/mL等5個(gè)濃度供試液,4℃保存,備用。

1.2.2細(xì)胞培養(yǎng)

人肝癌細(xì)胞株（HepG2）和人早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株（HL60）由福建醫(yī)科大學(xué)藥理研究所凍存提供。HepG2、HL60均培養(yǎng)于含10%小牛血清、青霉素100IU/mL及鏈霉素100μg/mL的RPMI1640培養(yǎng)基中,每3d換液1次,每5d傳代1次。細(xì)胞均置于37℃、體積分?jǐn)?shù)為0.05的CO2、飽和濕度的培養(yǎng)箱中,取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞用于試驗(yàn)。

1.2.3MTT法

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期HepG2、HL60細(xì)胞,以0.25%胰酶-PBS液充分消化后,以RPMI1640培養(yǎng)基稀釋成5×104mL-1單細(xì)胞懸液,接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板,每個(gè)濃度復(fù)種3孔,每孔180μL。置培養(yǎng)箱溫育12h后,藥物組每孔加不同濃度供試液20μL,平行設(shè)空白對(duì)照組(用等體積的RPMI1640培養(yǎng)基代替受試藥物),共培養(yǎng)48h。每孔加入1mg/mLMTT溶液50μL,繼續(xù)培養(yǎng)4h后,吸盡上清液,每孔加入二甲基亞砜(DMSO)150μL,充分溶解MTT還原產(chǎn)物。置酶標(biāo)儀上于492nm波長(zhǎng)處測(cè)定各藥物組和空白組的光密度(D),按公式計(jì)算得到藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率(IR,%)以及半數(shù)抑制濃度(IC50),并對(duì)藥效進(jìn)行初步的評(píng)價(jià)。

IR%=(1-加藥組平均D值/對(duì)照組平均D值)×100%

2結(jié)果

2.1萃取部位對(duì)HepG2細(xì)胞的細(xì)胞毒性

對(duì)HepG2細(xì)胞作用48h后,各萃取部位不同濃度的抑制率呈量效關(guān)系。細(xì)胞的毒性大小依次為正丁醇>乙酸乙酯>石油醚>氯仿。其中,正丁醇具有較高的細(xì)胞毒性,IC50僅為7.94μg/mL(IC50<20μg/mL);乙酸乙酯具有一定的細(xì)胞毒性(表1)。表1蒲葵子各萃取部位對(duì)HepG2的細(xì)胞毒性（略）

2.2萃取部位對(duì)HL60細(xì)胞的細(xì)胞毒性

對(duì)HL60細(xì)胞作用48h后,采用MTT法比色法,各萃取部位不同濃度的抑制率呈量效關(guān)系(表2)。細(xì)胞毒性大小依次為正丁醇>乙酸乙酯>石油醚>氯仿。其中,正丁醇和乙酸乙酯都具有較高的細(xì)胞毒性,IC50為10.72和17.78μg/mL。表2蒲葵子各萃取部位對(duì)HL60的細(xì)胞毒性（略）

3討論

蒲葵子在民間被廣泛用于治療各種癌癥,其中福建民間將蒲葵子與豬肉一同燉至肉熟爛,飲湯吃肉,用于鼻咽癌、食道癌的治療。國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道，蒲葵子的水提物對(duì)腫瘤血管發(fā)生具有較強(qiáng)的抑制作用,且該水提物對(duì)人乳腺癌細(xì)胞(Mcf-7)、鼠成纖維瘤細(xì)胞和人結(jié)腸癌細(xì)胞(Ht-29)體外抑制作用較強(qiáng),對(duì)成纖維細(xì)胞瘤小鼠模型具有較好的治療效果,未觀察到毒副作用;蒲葵子的乙醇提取物(0.1g/mL)對(duì)人白血病細(xì)胞HL60生長(zhǎng)有較強(qiáng)的抑制作用,IC50為1/50倍的提取液(即2μg/mL)［3-4］。

本研究采用MTT法對(duì)蒲葵子的石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取部位進(jìn)行體外抗腫瘤活性篩選研究,結(jié)果表明,蒲葵子粗提物的上述各萃取部位對(duì)HepG2和HL60細(xì)胞有不同程度的抑制作用,均在給藥后24h內(nèi)效果明顯。乙酸乙酯對(duì)HepG2和HL60胞的最大抑制率分別達(dá)到99.52%和99.59%,正丁醇最大抑制率分別達(dá)到96.77%和97.12%,正丁醇部位的IC50分別為7.94和10.72μg/mL,說(shuō)明乙酸乙酯部位和正丁醇部位具有明顯的體外抗腫瘤活性,且有明顯的劑量依賴性。

本研究為抗腫瘤藥物的粗篩,所用的樣品為蒲葵子乙醇提取物的各個(gè)萃取部位。結(jié)果顯示,石油醚部位和氯仿部位對(duì)HepG2和HL60的作用都不明顯?？赡苁怯捎谑兔巡课缓吐确虏课坏娜芙庑陨圆?致使有效濃度太低,而其他部位均能達(dá)到較好的溶解。這一問(wèn)題有待進(jìn)一步研究。

上述結(jié)果提示,在這兩個(gè)萃取部位(乙酸乙酯部位和正丁醇部位)中可能存在抗癌作用較強(qiáng)的活性成分,因此,有必要對(duì)蒲葵子進(jìn)行系統(tǒng)的物質(zhì)基礎(chǔ)研究。為尋找到構(gòu)效關(guān)系明確的活性單體成分,筆者擬對(duì)蒲葵子的各萃取部位進(jìn)行進(jìn)一步的植物化學(xué)細(xì)分工作,深入研究其化學(xué)成分及其抗腫瘤作用的特點(diǎn),為開(kāi)發(fā)出新的抗癌藥物奠定基礎(chǔ),也為臨床合理用藥提供理論依據(jù)。

【參考文獻(xiàn)】

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［2］趙國(guó)平,戴慎,陳仁壽.中藥大辭典［M］.下冊(cè).上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社,2001:2459-2460.

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