導(dǎo)語：如何才能寫好一篇實驗動物學(xué)總結(jié)，這就需要搜集整理更多的資料和文獻，歡迎閱讀由公務(wù)員之家整理的十篇范文，供你借鑒。

篇1

1、利用學(xué)校午會時間，對全校師生進行控?zé)熤R的廣播宣傳教育，營造無煙校園環(huán)境。

2、各班圍繞世界無煙日開展了一次黑板報展評活動，板報主題鮮明，內(nèi)容生動活潑，通過黑板報的展示，同學(xué)們了解了許多關(guān)于禁煙的知識，從而更加增強了禁煙的意識。

3、5月31日前夕，組織各班開展”主題活動，使同學(xué)們了解吸煙對人類的嚴重危害性，從而從內(nèi)心里遠離煙草，保護自己的健康。

篇2

關(guān)鍵詞：角色互換法；教學(xué)；醫(yī)學(xué)實驗動物學(xué)

中圖分類號：G642.4？搖 文獻標志碼：A 文章編號：1674-9324（2013）47-0245-02

實驗動物學(xué)是一門綜合性應(yīng)用學(xué)科，其應(yīng)用幾乎涉及到生命科學(xué)的各個實驗領(lǐng)域。短短幾十年的發(fā)展，目前已經(jīng)形成了自己獨特的科學(xué)體系，對生命科學(xué)研究起著越來越重要的作用[1]。在醫(yī)學(xué)院校的研究生的培養(yǎng)體系中，實驗動物疾病模型是本門課的重點，對于研究生將來開展科研實驗必不可少，因此，如何更好地提高教學(xué)效果，很多人都提出了各種教學(xué)方法，如開發(fā)實驗動物學(xué)自助學(xué)習(xí)軟件[2]、開展網(wǎng)絡(luò)教學(xué)[3]以及建立三維醫(yī)學(xué)實驗動物學(xué)教學(xué)體系[4]等方法。而以上方法各有優(yōu)缺點，可以增強學(xué)生自學(xué)能力，然而對于提高學(xué)生團隊協(xié)作精神和提高學(xué)生口頭表達能力方面有所欠缺。特別是作為醫(yī)學(xué)院校，研究生對《醫(yī)學(xué)實驗動物學(xué)》課程內(nèi)容最感興趣的就是實驗動物模型的建立，這也是他們將來最有可能接觸和應(yīng)用的。而研究生的專業(yè)眾多，在講解動物模型的時候教師不可能將每個專業(yè)的動物模型都進行講解，因此，如何能讓學(xué)生更好地掌握自己本專業(yè)的常用的動物模型，也讓更多同學(xué)了解不同專業(yè)不同動物模型的制作方法和技巧，這是一個值得深思的問題。崔淑芳[5]提出了在《實驗動物學(xué)》中實行錯位教學(xué)法，可以更好地提高學(xué)生的主動性和語言表達能力，提高其自主性，筆者結(jié)合實踐，嘗試將此角色互換法應(yīng)用于“實驗動物疾病模型”章節(jié)的教學(xué)中。此方法就是讓學(xué)生走上講臺講解實驗動物學(xué)知識，教師和同學(xué)們在下面共同學(xué)習(xí)的教學(xué)形式。通過讓學(xué)生自己查閱文獻資料，準備本專業(yè)的動物模型的具體制作方案，上臺和大家分享，以達到更好地讓學(xué)生掌握教學(xué)內(nèi)容，促進學(xué)生未來科研水平的提高，提高教學(xué)效果的目的。

一、角色互換學(xué)法的實施

1.準備階段。由于研究生教學(xué)是大課，不同專業(yè)的學(xué)生在一起，往往有100多人一個教室上課，因此首先將學(xué)生進行分組，將同一個專業(yè)的研究生分為一組，如果人數(shù)較多則可以8～10人一組，選出組長，讓組長進行管理分配。教師可以提供一些網(wǎng)站和書籍讓學(xué)生查閱，也可以講解一些文獻檢索的方法，讓學(xué)生自由發(fā)揮主觀能動性，根據(jù)自己的專業(yè)查找相關(guān)文獻資料，自己設(shè)計動物模型，然后制作幻燈片，每個組派代表上臺講解本專業(yè)的動物模型制作方法。

2.學(xué)生上臺講解動物模型。如果是設(shè)計問題法，則首先由組長派出代表上臺針對問題進行講解，每個小組10分鐘，包括講解6分鐘，學(xué)生提問和回答4分鐘。講解完后是學(xué)生提問時間，課堂上的同學(xué)可以針對動物模型的制作細節(jié)進行具體提問或者補充，讓大家能更好地理解其制作過程細節(jié)。通過講解可以發(fā)現(xiàn)有的學(xué)生是親自做個某些動物模型，因此講解非常細致生動，能更好地把實驗過程中可能遇到的問題和解決辦法都講出來，讓此動物模型變得更加貼近生活和生動具體。當然，有的問題也不知道答案，這種情況可以讓他下去查找答案，下次課回答。有時也會針對對方的觀點進行反駁，雙方唇槍舌劍，從而使課堂氣氛進一步活躍起來。在講解過程中，發(fā)現(xiàn)有的同學(xué)喜歡發(fā)言，不會控制時間，對技術(shù)簡介和討論進行長篇大論地闡述，這時教師要注意靈活駕馭課堂，提醒學(xué)生發(fā)言的時間，否則就會影響教學(xué)安排和進度。

3.教師進行補充和總結(jié)。教師在學(xué)生討論或者講解完畢后，可以補充介紹最新的動物模型制作的最新進展，如帕金森動物模型以及一些最新的計算機模擬模型，讓學(xué)生對動物模型的未來和現(xiàn)狀進一步了解。如2012年首個真正傷寒小鼠模型由哥倫比亞大學(xué)醫(yī)學(xué)院建立，2013年3月11日，歐盟委員全面禁止在動物身上進行化妝品成分測試，并禁止銷售含動物測試成分的新化妝品等。同時將“3R”原則引入動物模型，讓學(xué)生注重保護動物福利。2013年，Junhee Seok及其同事研究了創(chuàng)傷、燒傷和來自例如大腸桿菌等細菌的毒素是如何影響病人的遺傳應(yīng)答的，發(fā)現(xiàn)小鼠模型的模式與人類響應(yīng)模式匹配得不好，小鼠模型不能很好地模擬人類炎癥疾病等。并講解一些現(xiàn)實生活中某些研究生忽視動物福利造成動物痛苦的例子，并指出這種行為對實驗結(jié)果的影響，從而讓學(xué)生能更好地保護動物福利，使實驗更加規(guī)范，實驗結(jié)果也更可靠。教師需要對難點進一步地講解分析，同時可以播放一些FLASH動畫或者相關(guān)視頻，才能使抽象的問題形象化，從而讓學(xué)生輕松地理解其內(nèi)容。最后，結(jié)合本次課堂內(nèi)容，由教師進行總結(jié)歸納。同時也要指出學(xué)生演講的不足之處，提出改進要求。

二、效果評價分析

通過讓學(xué)生對角色互換學(xué)法的滿意度進行問卷調(diào)查，認為可以提高積極性和興趣的學(xué)生占94.5%，認為豐富了教學(xué)內(nèi)容的占96.3%，說明絕大部分學(xué)生歡迎這種新的教學(xué)模式。通過學(xué)生親自參與教學(xué)這種新形式，改變了過去教師提問、學(xué)生答的模式，讓學(xué)生成為了“教師”，親自參與到教學(xué)過程中，并上臺進行講解，能最大限度地發(fā)揮學(xué)生的創(chuàng)造性和積極性，解除厭學(xué)心理，同時鍛煉學(xué)生的口才。學(xué)生們通過彼此分工合作，查閱大量書籍、網(wǎng)絡(luò)和文獻資料，開闊了眼界，并掌握了教學(xué)內(nèi)容。而某些熱點問題通過學(xué)生的討論，豐富了問題的答案，也使教師得到啟發(fā)，使師生在共同學(xué)習(xí)中提高了自己。

三、討論

角色互換法是完全讓學(xué)生自己去準備教學(xué)內(nèi)容，可以極大地鍛煉學(xué)生的自學(xué)能力和團隊合作精神。而且通過上臺演講，鍛煉了學(xué)生的口才，讓學(xué)生真正地成為了學(xué)習(xí)的主人。而小組成員間的分工合作，使他們充分認識到團隊的力量和智慧，也有效地鍛煉了學(xué)生間的協(xié)作能力和團隊精神。同時也要求教師有出色的課堂駕馭能力，熟悉多學(xué)科知識，具有較強的組織領(lǐng)導(dǎo)能力。教師也能從各個專業(yè)的動物模型中得到啟示和靈感，不斷改進教學(xué)方法，對今后提高教學(xué)和科研水平大有好處。其次，由于存在學(xué)生人數(shù)多的問題，因此很難使每個同學(xué)都能上臺演講。為了克服以上情況，需要教師不斷提高自己的業(yè)務(wù)水平，結(jié)合多種教學(xué)方法，盡可能地讓更多的學(xué)生有機會上臺講解，提高學(xué)生的邏輯思維和口頭表達能力。最后，為了提高學(xué)生的理解和記憶，可以準備部分一些復(fù)習(xí)題發(fā)給學(xué)生，使其通過做題來更好地掌握內(nèi)容，也有利于學(xué)生期末復(fù)習(xí)。

參考文獻：

[1]湯球，江鵬亮，孫偉，等.醫(yī)學(xué)實驗動物學(xué)實驗課教學(xué)改革探討[J].西北醫(yī)學(xué)教育，2008，16（3）：523-525.

[2]胡櫻，楊斐，俞伊軍，等.實驗動物學(xué)自助學(xué)習(xí)軟件的研發(fā)[J].實驗動物與比較醫(yī)學(xué)，2012，32（3）：228-233.

[3]劉宇，商海濤，唐歡，等.實驗動物學(xué)網(wǎng)絡(luò)教學(xué)改革初探[J].黑龍江教育：高教研究與評估，2011，（10）：41-43.

篇3

【關(guān)鍵詞】實驗動物；安全管理

1實驗動物的來源與共患病的防護

實驗動物的來源是至關(guān)重要的。一些單位沒有合格的實驗動物生產(chǎn)許可，使用的實驗動物只能外購。由于實驗動物的條件要求嚴格，具備生產(chǎn)合格證的單位少，成本高，且使用條件有限，使實驗動物在購買上也有一定困難，致使市場會出現(xiàn)一些無證的動物被銷售。這樣的動物不僅不能夠保證質(zhì)量，其提內(nèi)攜帶的傳染源也無法估量，可能帶有一些共患病，隨時危害實驗動物工作者的人身安全。如兔、犬等可能會帶有人假結(jié)核、狂犬病，大小鼠的流行性出血熱，即使正規(guī)渠道的動物，我們也不能確定其是否完全健康。所以對外引入的動物，應(yīng)進行隔離檢疫。一般的隔離時間：大小鼠和兔一周，犬21天，在未知是否患有共患病之前，要按傳染性動物進行操作和個人防護。

2實驗動物環(huán)境的標準化與動物的健康管理

實驗動物環(huán)境的標準也是影響實驗結(jié)果的重要因素。清潔級或SPF級別的實驗動物只能在相應(yīng)的實驗動物環(huán)境內(nèi)生活，我們外購合格的實驗動物，由于自身條件的限制，將其防如普通的環(huán)境中進行臨時的飼養(yǎng)觀察與檢疫，這樣就降低了實驗動物自身的級別，自身免疫弱的動物可能會不能適應(yīng)很快死亡，免疫強的動物即使生存下來體內(nèi)也會帶有一些其他的細菌、病毒或寄生蟲，這樣對工作者構(gòu)成的一定的威脅，更影響了實驗的準確性。在檢疫期如發(fā)現(xiàn)病情，不能控制則堅決處死、徹底滅菌，消滅傳染源。感染性動物使用過的籠具等設(shè)備要嚴格消毒，消毒水浸泡30 min，紫外燈照射約30min，放入儲藏室備用。保證良好的合格的生活環(huán)境，營養(yǎng)條件，保證實驗動物的健康。

3 進入實驗動物設(shè)施內(nèi)要高度重視消毒防護處理

在預(yù)防和控制傳染病的工作中，主要切斷血液中潛在的、具有傳播性的病毒因子、被病原體污染的血液、體液、分泌物、組織器官以及其他感染性材料。要高度重視，提高警惕，自覺嚴格執(zhí)行消毒、滅菌和隔離等各項規(guī)程制度，盡力阻斷細菌病毒在人群中傳播。為此，當工作人員進人控制區(qū)時，一定要戴口罩、帽子、穿一次性隔離衣。對動物的排泄物、血液、引流物及污水要及時進行清理并徹底消毒處理，嚴禁將非經(jīng)消毒處理的廢水直接倒人下水道。對污染垃圾、動物尸體要裝黃色塑料袋，送專門處理機構(gòu)焚燒。每個實驗間每天應(yīng)開紫外線燈消毒2次，每次約30 min，對地面要用消毒劑擦拭，用過的地板擦要浸泡在消毒液內(nèi)。實驗人員實驗完畢后，定要按照制度要求自污染走廊出去，并將口罩、帽子、一次性消毒衣、鞋套脫掉放進指定的污桶內(nèi)，然后換穿自己的衣服離開潔凈區(qū)，重新洗手后離開。

4 動物實驗時要警惕刺傷引起血源性疾病的感染

被污染的銳器損傷是導(dǎo)致血源性疾病傳播、病毒擴散的主要途徑。首先要預(yù)防銳器傷的發(fā)生，操作中需做到銳器不能直接用手傳遞，術(shù)中不允許將刀、縫針、剪刀直接遞交到術(shù)者手里，需放在盤中傳遞，嚴防刺破皮膚。當手持針頭和利器時，不要使銳器面對著人，以免刺傷他人。在實驗狗的手術(shù)過程中，使用銳器的操作人員受傷時有發(fā)生，我院在上半學(xué)期手術(shù)學(xué)實驗中，被器械傷到的學(xué)生不在少數(shù)。手術(shù)過程中傳遞刀、針、剪等鋒利器械和清洗器械時，均可能被銳器損傷，使病毒直接進入人體血液而被細菌感染。

5 實驗動物工作人員要提高自我保護意識

為了避免不必要的損害，使動物細菌、病毒不被擴散，從事實驗動物的工作人員及研究者，必須進行自我保護教育，掌握常規(guī)的傳播疾病知識，使每位動物實驗工作者充分認識到它的危害性，了解其傳播途徑和危險因素，在思想上引起高度重視。建立安全的管理制度提高防御意識，推廣有效防止動物性傳播疾病的隔離方式，盡量減少操作人員致病的危險，積極推行既具科學(xué)依據(jù)，又有切實可行的標準預(yù)防手段。

參考文獻

[1]李華、王祿增、史小萍、張景云、肖玉平、王太一.實驗動物學(xué)。2006

[2]方喜業(yè).醫(yī)學(xué)實驗動物學(xué),1995

篇4

關(guān)鍵詞 動物資源；動物學(xué)實驗室；開放；黑龍江大慶

中圖分類號 Q915.81 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2012）03-0046-02

Discussion on Opening of Zoology Laboratory Based on the Condition of Animal Resources in Daqing City

YUAN Gai-xia YIN Ya-jie WANG Yang NIE Chun-yu XU Tai-hai

（School of Live Science，Daqing Normal University，Daqing Heilongjiang 163712）

Abstract Animal experimental material is the basis for opening of zoology laboratory. Based on the animal resources in Daqing City，the status and role of laboratory opening in zoology teaching were introduced，the precondition of laboratory opening，including the real situation of animal resources investigation in Daqing City and strengthen teachers team construction，in order to provide a way for permanently implement of laboratory opening.

Key words animal resources；zoology laboratory；opening；Daqing Heilongjiang

大學(xué)生的專業(yè)素質(zhì)教育目標是增強學(xué)生的實踐能力，培養(yǎng)其創(chuàng)新意識，強調(diào)知識、能力、素質(zhì)的協(xié)調(diào)發(fā)展，而實驗室開放項目是實現(xiàn)這一目標的重要途徑[1]。動物學(xué)是生物專業(yè)的基礎(chǔ)平臺課，同時又是一門實踐性很強的課程，在當今社會對人才的應(yīng)用能力要求越來越高的形勢下，實驗室開放項目的實施無疑為動物學(xué)在應(yīng)用型人才培養(yǎng)的目標上增添了力量。動物學(xué)實驗室開放項目對提高教學(xué)效果及培養(yǎng)學(xué)生的專業(yè)能力已獲得共識，關(guān)鍵的問題是動物實驗材料的供給。實驗材料是實驗室開放的物質(zhì)基礎(chǔ)，是實驗室開放項目能否進行、能否達到預(yù)期效果的決定因素之一。針對此問題，課題組以大慶本地動物資源為依托，在動物學(xué)實驗室開放方面進行積極探索，經(jīng)過多年的教學(xué)實踐，積累了一定的教學(xué)經(jīng)驗，現(xiàn)總結(jié)如下，以供參考。

1 大慶市概況

大慶市位于松嫩平原腹地，海拔150 m 左右，為溫帶半干旱半濕潤草甸草原黑鈣土地帶。氣候?qū)儆跂|北高寒地帶，冬季漫長、嚴寒干燥。草甸草原、內(nèi)陸濕地和水域是該區(qū)的主要生態(tài)系統(tǒng)類型?，F(xiàn)已建立了不同級別、不同類型的自然保護區(qū)12處，面積達2 622.88 km2 [2]。該地區(qū)不僅石油資源豐富，而且土地資源、草場資源、水資源、濕地資源、旅游資源、動植物資源也較豐富[3]。

大慶市在資源開發(fā)的同時，注重生態(tài)環(huán)境的再建設(shè)，在植樹造林、園林綠化方面投入較大的精力，取得顯著的效果。人均地區(qū)生產(chǎn)總值8.06萬元，居全省第1位。立體交通體系初步形成，機場已建成通航，市內(nèi)鐵路、公路四通八達，為動物的運輸交流提供了便利。

2 大慶市動物資源狀況

大慶地區(qū)的動物資源包括天上飛的、地上跑的、泥土中藏的、水中游的、動植物體寄生的及市場銷售的。參考劉凌云等[4]主編的《普通動物學(xué)》教材，其涵蓋無脊椎動物中的原生動物門、腔腸動物門、扁形動物門、假體腔動物、環(huán)節(jié)動物門、軟體動物門、節(jié)肢動物門、棘皮動物門門的動物，只有幾個小動物沒有發(fā)現(xiàn)，如多孔動物門、半索動物門、觸手冠動物，由于這些動物絕大多數(shù)生活于海水中，又缺乏大眾化的食用與觀賞價值，在市場上沒有銷售[4-5]；涵蓋脊椎動物所有的綱如圓口綱、魚綱、兩棲綱、爬行綱、鳥綱及哺乳綱。綜合相關(guān)的研究粗略估計至少有800種，完全可以滿足動物學(xué)的實踐教學(xué)。但是，不足之處是：大慶地區(qū)由于冬季漫長，春、秋兩季低溫天氣持續(xù)的時間相對較長，絕大多數(shù)野生動物的活躍期限制在4月下旬至10月上旬，嚴重制約了動物實驗室開放項目長期、穩(wěn)定的實施。

3 實驗室開放在教學(xué)中的地位

實驗室開放項目是指在實驗課堂之外的實驗內(nèi)容，實驗室開放是動物學(xué)實踐教學(xué)的重要內(nèi)容。動物學(xué)的實踐教學(xué)內(nèi)容一般包括實驗、野外實習(xí)、實驗室開放及畢業(yè)論文等4個方面。由于學(xué)習(xí)方式的不同，4個方面在實踐教學(xué)中的作用各有側(cè)重[6]。實驗是動物學(xué)課程的必修內(nèi)容，主要目的是培養(yǎng)學(xué)生實驗操作的基本技能，在此基礎(chǔ)上，延展實驗思路和方法、啟迪創(chuàng)新思維等。實習(xí)教學(xué)是在動物學(xué)課堂教學(xué)完成后又一獨立的授課內(nèi)容，是實驗與理論課內(nèi)容的補充與升華，是激發(fā)學(xué)生原始創(chuàng)新意識的源泉。實驗室開放是實現(xiàn)個性化教學(xué)，滿足學(xué)生求知、探索和創(chuàng)新的欲望，側(cè)重于創(chuàng)新精神與能力的培養(yǎng)[7]，其特點是在實驗時間、實驗內(nèi)容及教學(xué)方式上對學(xué)生開放。畢業(yè)論文是學(xué)生綜合知識在動物學(xué)實踐研究中的應(yīng)用，一是對學(xué)生的專業(yè)知識及能力進行一次全面的考核；二是對學(xué)生進行科學(xué)研究基本功的訓(xùn)練。因此，實驗室開放是實驗、實習(xí)內(nèi)容的延展與提升，同時又是畢業(yè)論文的演練。

作為生物專業(yè)的專業(yè)基礎(chǔ)課，動物學(xué)在人才培養(yǎng)中具有舉足輕重的作用，動物學(xué)的基本知識理論、動物資源信息及研究方法不僅是動物生理學(xué)、動物生態(tài)學(xué)等相關(guān)學(xué)科的重要基礎(chǔ)，而且是學(xué)生學(xué)習(xí)后續(xù)課程如生物化學(xué)、微生物、細胞生物學(xué)、分子生物學(xué)、發(fā)育生物學(xué)、免疫學(xué)等學(xué)科的寶貴財富，因為后續(xù)課程或多或少、直接或間接以動物材料為基礎(chǔ)。實驗室開放隨著后續(xù)課程的開設(shè)，以學(xué)生為紐帶或者通過教師間的交流延續(xù)深入下去，為后續(xù)課程的實驗室開放項目奠定基礎(chǔ)。

4 實驗室開放的先決條件

4.1 摸清地方動物資源狀況，擴充實驗開放項目

實驗材料是進行實驗室開放的首要問題，從開放項目的可操作性及實施效果上考慮，依托本地動物資源是解決實驗材料的最佳途徑。本土的動物一般分為兩大類，一類是土生土長的野生動物；另一類是市場銷售的動物，市售的既有當?shù)禺a(chǎn)的也有外地運輸來的。指導(dǎo)教師應(yīng)根據(jù)專業(yè)特長及當?shù)貏游锾攸c，以常見實驗動物的種類調(diào)查為中心，結(jié)合研究團隊的科研實力，以項目為載體有效設(shè)立研究內(nèi)容。研究項目可以是教研方面的，也可以是科研方面。在研究的同時，穿插實驗室開放，以研究帶動實驗室開放，以實驗室開放促進研究。也可以全面啟動實踐教學(xué)的各個環(huán)節(jié)，使各教學(xué)內(nèi)容互相促進，相得益彰。隨著研究的推進，研究可以向縱深層次發(fā)展或非專業(yè)特長的領(lǐng)域逐漸滲透。研究內(nèi)容豐富了，實驗室開放項目就會源源不斷地產(chǎn)生，實驗室開放的個性化教育特色才能有展現(xiàn)的空間。由于種種原因，對大慶本土的動物資源研究較少，或者以前較好的采集點，由于環(huán)境的變化蕩然無存。在此情況下，決定以當?shù)責(zé)o脊椎動物的研究為龍頭項目，擬定了“大慶地區(qū)無脊椎動物適時實驗材料”的研究，此項目又成功由校教改工程項目滾動為省高教學(xué)會項目。在此項目的帶動下，課程組在建系的8年間，以當?shù)氐膭游镔Y源為主研究對象成功申報了1項國家青年基金項目、1項國家自然基金合作項目、1項省自然基金項目，2項省廳項目、3項校自然基金項目。這些研究極大地拓寬實驗室開放的研究思路，為實驗室開放提供了素材保障。

4.2 加強指導(dǎo)教師的隊伍建設(shè)

在動物資源條件已經(jīng)具備的情況下，指導(dǎo)教師的知識面及科研水平是決定學(xué)生實驗室開放效果的主限因素之一。動物資源是客觀的、呆板存在的，需要專業(yè)教師通過自己的知識水平與科研能力把它們激活，變?yōu)榻虒W(xué)、科研及生產(chǎn)、生活的資源，使實驗室開放有更寬廣的思路與操作平臺，從而更好地發(fā)揮其在應(yīng)用型人才培養(yǎng)中的作用。同時，在實驗操作中往往會涉及多個專業(yè)多個層次，會提出各種各樣的問題，要求指導(dǎo)教師協(xié)助解決，這就要求指導(dǎo)教師有更多的知識儲備和更高的實驗技能，更加自覺地努力學(xué)習(xí)新知識，不斷提高自身業(yè)務(wù)水平[8]。作為以應(yīng)用型人才培養(yǎng)為目標的一名高校專業(yè)教師，只有注重知識的廣與博，才能在應(yīng)用型人才的培養(yǎng)中扮演好教師的角色，使人才培養(yǎng)目標真正落到實處。教師應(yīng)在以動物學(xué)為核心的知識領(lǐng)域拓展知識面、開闊視野，在深層次的研究水平上更進一步，在教學(xué)與科研中，打破動物季節(jié)性分布的限制，科學(xué)研究、實驗內(nèi)容的安排、實驗室開放及畢業(yè)論文不僅可以在動物生長旺季進行，而且同樣可以在大慶漫長的冬季利用動物標本、室內(nèi)動物或者在室內(nèi)培養(yǎng)研究等進行。

5 結(jié)語

作為一名動物學(xué)指導(dǎo)教師，必須具備寬泛的動物資源知識及多樣的實驗技能，才能在學(xué)生的實驗室開放教學(xué)中發(fā)揮充分有效的作用，才能避免環(huán)境條件的限制，連續(xù)為學(xué)生提供實驗室開放的基礎(chǔ)條件及思路。實驗室開放是一個系統(tǒng)工程，它的實施，不僅依靠指導(dǎo)教師與學(xué)生雙方面的共同努力，而且對實驗室提供的條件、實驗室對項目的管理、實驗室開放的考核及相關(guān)的激勵機制都有比較嚴格的要求。教育工作者在教學(xué)過程中，應(yīng)較好地解決各方面的問題，以推動實驗室開放項目在應(yīng)用型人才培養(yǎng)中發(fā)揮更大的作用。

6 參考文獻

[1] 顧福根.植物組織培養(yǎng)實驗室開放式管理的實踐體會與改進措施[J].實驗室科學(xué)，2009（2）：142-145.

[2] 陳正言，馬鳳榮，宋秀娟.大慶市自然保護區(qū)現(xiàn)狀與建設(shè)[J].國土與自然資源研究，2006（1）：34-35.

[3] 丁貴生，肖紅，魏云慧.試論大慶市生態(tài)市建設(shè)的利弊因素及保障措施[J].科技信息，2008（7）：313.

[4] 劉凌云，鄭光美.普通動物學(xué)[M].北京：高等教育出版社，2008.

[5] 袁改霞，徐長君，張國發(fā)，等.大慶市區(qū)常見實驗無脊椎動物的種類調(diào)查[J].大慶師范學(xué)院學(xué)報，2008，28（2）：134-137.

[6] 袁改霞，聶春雨，殷亞杰，等.“蛾類外生殖器解剖”在動物學(xué)實踐教學(xué)中的應(yīng)用探索[J].四川動物，2011（1）：148-149.

篇5

【關(guān)鍵詞】 2型糖尿??；動物模型；研究概況

隨著經(jīng)濟社會的發(fā)展，人們的飲食結(jié)構(gòu)、生活方式等發(fā)生了很大改變，糖尿病發(fā)病率顯著上升，尤其T2DM占了較高比例，大概占了糖尿病發(fā)病率的90%。T2DM是因人體胰島素分泌相對不足或靶細胞對胰島素敏感性降低繼而引發(fā)糖、蛋白質(zhì)、脂肪和水電解質(zhì)等代謝紊亂所導(dǎo)致的疾病?；颊叩湫捅憩F(xiàn)為三多一少，即多飲、多食、多尿表現(xiàn)，同時還伴有身體消瘦、疲乏、煩躁、口渴等臨床癥狀。

選擇一些合適的動物模型進行動物試驗成了我們研究糖尿病的良好途徑，我們可以從中比較一些糖尿病藥物的作用效果以及其藥動學(xué)的特點，在臨床用藥上對評價某套治療方案的可行性及預(yù)后等具有十分重要的參考意義。

目前研究的臨床T2DM動物模型主要集中在大鼠上，這可能是由于大鼠作為T2DM動物模型相對較穩(wěn)定且與人T2DM表現(xiàn)相似的優(yōu)點。因此我們在下面綜述近幾年來國內(nèi)外有關(guān)臨床T2DM大鼠模型研究的情況。

總體上來說，目前臨床T2DM研究的大鼠模型主要分為兩類，一類是自發(fā)性T2DM大鼠模型，另一類則是實驗性T2DM大鼠模型，考慮到成本及方便程度，目前以后者居多。

1 實驗性T2DM大鼠模型

1.1 單純高脂高糖引發(fā)的T2DM 在試驗中，通過較長時間給予大鼠過量的高糖高脂飲食，發(fā)現(xiàn)能夠誘導(dǎo)出較滿意的T2DM大鼠模型，從而能為進一步研究奠定良好的基礎(chǔ)。目前認為其機理可能是高糖高脂飼料會導(dǎo)致胰島B細胞超負荷，進而使胰島細胞發(fā)生損傷、萎縮甚至死亡，胰島的功能因此下降，繼而建立起伴胰島素抵抗的T2DM模型。魯瑾[1]等采用61%的高脂飲食，飼養(yǎng)大鼠7周后，大鼠就出現(xiàn)了高胰島素血癥，且形成了明顯的胰島素抵抗，是一個十分可靠的胰島素抵抗模型。張麗鋒[2]等給予W istar大鼠脂肪熱比為59%的飼料, 喂養(yǎng)4周，均出現(xiàn)胰島素抵抗，多項研究試驗表明高脂飲食可以誘發(fā)產(chǎn)生可靠的糖尿病大鼠模型。

1.2 應(yīng)用STZ藥物誘導(dǎo)產(chǎn)生的大鼠模型 由于高糖高脂飼料相對用時較長，且飼料成本相應(yīng)較高，因此合理使用鏈脲菌素(STZ)是目前許多研究者所推崇的造模方法。研究認為，STZ具有選擇性破壞胰島B細胞的作用，使大鼠產(chǎn)生胰島素抵抗的糖尿病。

目前，利用這種方法誘導(dǎo)模型主要分為直接使用STZ注射建模以及配合高脂飲食建模兩種，而后者又可以按照注射STZ前進食和注射STZ后進食分為兩類。

王志剛[3]等將大鼠禁食16~ 18h 后尾靜脈注射STZ( 25mgPkg) , 兩周后, 做葡萄糖耐量實驗, 發(fā)現(xiàn)動物已經(jīng)出現(xiàn)糖耐量異常, 表明T2DM模型建立初步成功。

結(jié)合飲食和注射STZ的優(yōu)點，可以縮短造模時間，提高模型的成功率現(xiàn)在是許多研究者所推崇的。洪麗莉等[4] 選SD大鼠, 先喂以高脂高糖飼料4周,飲3%的果糖水,導(dǎo)致胰島素抵抗,繼以小劑量STZ( 30 mg /kg)腹腔注射1次, 2周后誘導(dǎo)建立了穩(wěn)定的T2DM模型。

當然也有研究者通過先注射STZ，然后再用高脂飲食培養(yǎng)建模，同樣也獲得了成功。劉欣秋等[5]在實驗中采用這種方法，8周后成功建成T2DM大鼠模型。

目前這兩種建模方法的優(yōu)點和缺點尚在研究中，到底是先注射STZ好還是后注射好，仍亟待深入考察比較，以便為臨床T2DM動物模型建立一定標準和指南，更快更好地促進生物醫(yī)學(xué)的發(fā)展。

1.3 STZ誘導(dǎo)糖尿病大鼠模型的成功率影響因素研究現(xiàn)況 藥物誘導(dǎo)糖尿病動物模型的成功率受諸多因素影響, 如給藥劑量、給藥方法、STZ的不同溶劑、大鼠品種因素等。目前STZ的劑量大小還沒有統(tǒng)一認識, 造模成功率報道也不盡相同。

李桂云等[6] 將4周齡SPF級雄性SD大鼠高糖高脂飼料喂養(yǎng)4周, 分別按50mg/ kg 、40mg/kg、30mg/kg體重劑量腹腔注射STZ建立T2DM大鼠模型, 結(jié)果: 40mg/kg劑量組大鼠的成模率最高( 73.3% ), 成模大鼠具有胰島素抵抗、高血糖、高胰島素血癥和血脂紊亂的T2DM臨床特征。認為短期高糖高脂飲食聯(lián)合STZ腹腔注射建立T2DM SD大鼠模型的STZ最佳注射劑量為40mg/kg。

而宋立江等[7] 研究了不同溶劑溶解STZ對造模成功率的影響。結(jié)果pH4. 5檸檬酸PBS造模成功率高達86. 7%, 認為pH 4. 5檸檬酸PBS可以作為理想的溶劑。郭學(xué)軍等[8]W istar大鼠成模率和死亡率均高于SD大鼠。

1.4 轉(zhuǎn)基因大鼠模型 轉(zhuǎn)基因技術(shù)的應(yīng)用極大地促進了動物醫(yī)學(xué)研究的發(fā)展，將人類的基因片段或者是多肽、蛋白質(zhì)等轉(zhuǎn)到大鼠上，可以制備出T1DM或T2DM動物模型，且相比以上的較穩(wěn)定，容易繁殖培育，同時因與人類具有同源性，更能反映基因作用的真實性，是目前較為先進的技術(shù)。

但這種方法的弊端有兩個：第一，因人類的基因片段、蛋白質(zhì)對大鼠來說，都是外源蛋白，由于作用環(huán)境改變，可能會造成相應(yīng)的蛋白因差異而未能達到相應(yīng)臨床表型；第二，在誘導(dǎo)過程中，還需要有比較合適可靠的載體，以使基因片段能順利移植到動物體內(nèi)，進而克隆繁殖，這無論在時間、經(jīng)濟上還是技術(shù)上成本都是比較高的。

2 自發(fā)性T2DM大鼠模型

自發(fā)性2型糖尿病大鼠目前主要有中國地鼠、G /K 大鼠、OLETF大鼠、ZDF大鼠等, 這類大鼠多數(shù)肥胖, 有明顯的高胰島素血癥, 類似人T2DM的發(fā)病特征, 國外研發(fā)口服抗糖尿病及并發(fā)癥的新藥多選用這類動物。[9]

2.1 中國地鼠自發(fā)性模型 原為我國黃河以北一些省份的優(yōu)勢鼠種。由美國Meier和Yer2ganian將黑線倉鼠通過近親繁殖獲得近交系,該類地鼠具有自發(fā)性、遺傳性糖尿病特點，發(fā)病率可達90%，雌性多于雄性。以中輕度高血糖為特征, 血清胰島素表現(xiàn)多樣, 胰島細胞的病變程度不一, 類似于人T2DM。

2.2 G/K大鼠 G/K 大鼠來源于日本,是一種常用的自發(fā)性非肥胖型T2DM實驗動物模型, 具有高血糖、高胰島素血癥、胰島素抵抗出現(xiàn)早的特點。認為其發(fā)病機制可能是由于骨骼的糖元合成酶不能有效地將多余的葡萄糖轉(zhuǎn)化為糖元貯存起來, 從而使動物出現(xiàn)高血糖。其具有與人類T2DM 微血管并發(fā)癥相似的改變。

Partha B認為G/K是研究糖尿病最好的動物模型, 但是其發(fā)病過程中B細胞數(shù)目降低后有一個增殖的過程, 這與人類發(fā)病情況有很大不同, 這也是人們限制G/K大鼠應(yīng)用的關(guān)鍵[10]。

2.3 ZDF大鼠 肥胖Zucker大鼠其特征為肥胖、胰島素抵抗、高胰島素血癥、高血脂、高血糖、高血壓,受常染色體隱性遺傳基因影響,其隱性基因名稱為fa。有研究者發(fā)現(xiàn)其肥胖與血腦屏障上的瘦素載體減少有關(guān), 瘦素與中樞神經(jīng)系統(tǒng)受體結(jié)合能夠啟動調(diào)節(jié)攝食和機體能量平衡,此平衡被打破可導(dǎo)致肥胖發(fā)生。肥胖Zucker大鼠是研究糖尿病血管病變的理想模型[11]。

3 總結(jié)

綜上所述，我們發(fā)現(xiàn)不同類型T2DM模型各有其優(yōu)點和缺點，在選擇臨床T2DM動物模型的的過程中，應(yīng)密切結(jié)合課題要求、實驗室條件和經(jīng)費狀況等具體現(xiàn)狀進行確定。

目前認為人工誘導(dǎo)產(chǎn)生的大鼠糖尿病模型具有價格便宜、穩(wěn)定性強、并且容易誘導(dǎo)的特點，較受推崇。但是也可以看到，現(xiàn)階段糖尿病動物模型的研究仍然處于一個發(fā)展階段，許多技術(shù)還不成熟。有些指標還沒有建立，各家有各家的說法，成功率的報道也是不盡相同，例如使用多少劑量的STZ合適等。具體我們列數(shù)如下：

3.1 使用多少劑量的STZ能夠誘導(dǎo)出穩(wěn)定的臨床T2DM大鼠模型。

3.2 需要在何時搭配高脂飲食，使用STZ前或后，以便培養(yǎng)出更穩(wěn)定的大鼠模型。

3.3 有沒有更好的制劑能夠替代STZ，從而縮短誘導(dǎo)時間。

許多研究者正在探索與人類糖尿病發(fā)病相似，且具有穩(wěn)定可遺傳等優(yōu)點的大鼠模型。很多問題仍然需要解決和研究，相信隨著現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，以及人們對糖尿病的深入研究，其大鼠模型種類會呈現(xiàn)增長，它將成為人們研究T2DM的有力工具，為治療糖尿病，造福人類發(fā)揮重要的作用。

參考文獻

[1]魯瑾,鄒大進,張家慶.高脂飲食誘發(fā)大鼠胰島素抵抗后腫瘤壞死因子2A的改變[J] .中國糖尿病雜志,1999,7(5):284~ 286.

[2]張麗鋒,畢會民,王蜀鄂等.葛根素對胰島素抵抗大鼠脂肪組織中糖原合成酶激酶3B表達的影響[J].中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué),2005,10 (12): 1340~ 1343

[3]王志剛,岳輝.丹參對實驗性2 型糖尿病大鼠腎損害的保護作用[J].牡丹江醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2005,26(1):20221.

[4]洪麗莉,許冠蓀,申國明,等.SD大鼠2 型糖尿病模型的建立[J]. 實驗動物科學(xué)與管理,2005,22(4):1~ 3

[5]劉欣秋,雷鳴.實驗性非胰島素依賴性糖尿病模型探討[J]. 黑龍江醫(yī)藥科學(xué), 2001,24(3): 18

[6]李桂云,吳正治等.深圳中西醫(yī)結(jié)合雜志,2007,17(2):74

[7]宋立江,劉長青,郭金銘,等.不同溶劑在鏈脲佐菌素血糖模型的作用比較[J]. 現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué), 2008, 35(17): 3454

[8]郭學(xué)軍,鄒移海.鏈脲佐菌素誘導(dǎo)SD和Wistar大鼠糖尿病模型的影響因素[J].中國實驗動物學(xué)報,2008,16(4)

[9]周迎生,高妍等.高脂喂養(yǎng)聯(lián)合鏈脲佐菌素注射的糖尿病大鼠模型特征[J]. 中國實驗動物學(xué)報,2005,13(3): 154

篇6

【關(guān)鍵詞】 干燥綜合征；白芍總苷；飲水量；唾液量；T細胞亞群；小鼠

干燥綜合征（sj?gren's syndrome，SS）是一種以外分泌腺高度淋巴細胞浸潤為特征的自身免疫性疾病，最常見的癥狀是口眼干燥。SS在中醫(yī)文獻中無相似的病名記載，目前多數(shù)學(xué)者將其歸屬中醫(yī)學(xué)“燥證”范疇，氣陰兩虛、津血虧虛等是本病的致病因素，虛、疲、毒相互交結(jié)是本病的病理關(guān)鍵。目前，尚無根治性藥物及方法，多采取替代及對癥治療以減輕口眼干燥等癥狀。白芍總苷（TGP）是白芍的主要有效成分，具有抗炎、鎮(zhèn)痛、多途徑雙向免疫調(diào)節(jié)等作用[1]。有研究表明，TGP能改善SS患者口眼干燥癥狀[2]，但其作用機制尚不清楚。本課題組對TGP進行了一系列實驗研究，現(xiàn)總結(jié)報告如下。

1 實驗材料

1.1 實驗動物 選擇鼠齡為8周的BALb/C近交系小鼠60只，SPF級，雌雄不限，體質(zhì)量20 g左右，購于重慶醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心，合格證號SCXK（渝）2006104。嚴格遵循“3R”原則，實驗動物飼養(yǎng)室自然光線，溫度控制在18～19 ℃，濕度控制在40%～70%，動物自由攝食、飲水。實驗結(jié)束以引頸法處死。

1.2 主要藥物及試劑 TGP，寧波立華制藥有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號060301；醋酸潑尼松，天津藥業(yè)生產(chǎn)，生產(chǎn)批號20060512；百白破疫苗，北京天壇生物制品股份有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號2006060402；弗氏完全佐劑，Sigma USA生產(chǎn)，生產(chǎn)批號019k8719-81-2； PBS緩沖液，博士德生物工程有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號AR0030；CD4、CD8試劑，晶美生物制藥有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號FG260611。

2 方 法

2.1 分 組 將60只小鼠隨機分成空白對照組、模型對照組、TGP高劑量組、TGP中劑量組、TGP低劑量組、醋酸潑尼松組，共6組，每組10只。

2.2 動物模型的建立[3] 對模型對照組，TGP高、中、低劑量組，醋酸潑尼松組小鼠分別進行造模：各取10只同種小鼠，于無菌條件下取頜下腺，勻漿后加PBS稀釋到1 000 μg?mL-1，加入弗氏完全佐劑，調(diào)整濃度為500 μg?mL-1，以每只1 mL的總量于小鼠的尾根部多點注射免疫，同時于背部注射百白破疫苗0.5 mL。在造模后第5周處死模型對照組小鼠2只，通過病理形態(tài)學(xué)觀察，模型小鼠頜下腺發(fā)現(xiàn)特征性淋巴細胞浸潤、腺體萎縮等SS典型病理改變，表明造模成功。

2.3 藥物劑量換算 TGP成人每日用量為1 200 mg，

參照人和動物間按體表面積折算的等效劑量比值

表[4]，換算成小鼠用量180 mg?kg-1；醋酸潑尼松成人每日用量20 mg，換算成小鼠用量3.0 mg?kg-1，

一般以成人體質(zhì)量為60 kg為基礎(chǔ)計算。

2.4 給藥方法 空白對照組正常飼養(yǎng)，不予任何藥物；模型對照組予生理鹽水灌胃；TGP高劑量組予TGP136 mg?d-1灌胃；TGP中劑量組予TGP 68 mg?d-1灌胃；TGP低劑量組予TGP 34 mg?d-1

灌胃；醋酸潑尼松組予醋酸潑尼松0.08 mg?d-1灌胃。

2.5 觀察指標

2.5.1 小鼠飲水量的測定 每3天加水150 mL，3 d后稱量水量，投入的水量分別減去剩余水量即為每3天每籠小鼠飲水量。

2.5.2 唾液量測定 灌胃2周后將無菌的脫脂棉球制成干重為5 mg的棉球，放入小鼠的后頰部，

5 min后取出，電子天平上稱重。唾液分泌量（mg）=棉球濕重-棉球干重。

2.5.3 小鼠唾液腺T細胞亞群含量 小鼠眼眶取抗凝血2 mL，取20 μL CD4/CD8 FITC/PE標記抗體加入流式管底部，取100 μL EDTA抗凝的小鼠外周血加入5 mL流式管底部并輕輕振搖，使其與抗體充分混勻，室溫避光孵育20～30 min，加入2 mL紅細胞裂解液，混勻后避光放置10 min，溶解紅細胞至液體透亮。將樣品管以1 000 r?min-1離心5 min，充分倒去上清液，加入2 mL PBS洗液重懸細胞，1 000 r?min-1離心5 min，棄去上清液；

加入適量標記二抗，室溫避光孵育20 min；加入2 mL

PBS洗液重懸細胞以1 000 r?min-1離心5 min，

棄上清液；加入0.5 mL PBS洗液重懸細胞，流式細胞儀檢測。

2.6 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 15.0軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料以表示，采用t檢驗，方差不齊用秩和檢驗，等級資料間比較采用秩和檢驗，計數(shù)資料用χ2檢驗，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié) 果

3.1 各組小鼠飲水量比較 各組小鼠飲水量在造模初期無差別，抗原注射后12 d小鼠飲水量顯著增加，模型對照組小鼠飲水量逐漸上升直到實驗結(jié)束，而TGP各劑量組和醋酸潑尼松組小鼠飲水量在一定程度上降低，并維持在一定水平。見表1。

3.2 各組小鼠唾液流量變化比較 造模2周后，與空白對照組比較，模型對照組小鼠唾液流量明顯減少（P < 0.01）。各給藥組與模型對照組比較，均能不同程度增加小鼠唾液流量（P < 0.01或P < 0.05）；以TGP中、高劑量組，醋酸潑尼松組作用較明顯，TGP低劑量組作用較弱。見表2。

3.3 小鼠外周血中T淋巴細胞亞群檢測 與空白對照組比較，模型對照組小鼠外周血CD4+T細胞、CD4+/CD8+明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.01）；

而CD8+T細胞平均含量雖降低，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）。各給藥組均能降低CD4+T細胞含量（P < 0.01或P < 0.05），以TGP中、高劑量組及醋酸潑尼松組的作用較明顯，三組之間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）；TGP低劑量組與TGP高劑量組、醋酸潑尼松組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P< 0.01）。各給藥組對CD8+T細胞含量影響不大，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）。各給藥組均有降低CD4+/CD8+比值的趨勢。醋酸潑尼松組、TGP中劑量組、TGP高劑量組能明顯降低CD4+/CD8+比值，與模型對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.01），但與TGP低劑量組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）。見表3 、圖1。

4 討 論

SS是一種以侵犯外分泌腺體為主的慢性自身免疫性疾病，臨床表現(xiàn)以口眼干燥為特征，其病理表現(xiàn)主要為外分泌腺淋巴細胞及漿細胞局灶性浸潤，淋巴細胞中又以CD4+T細胞為多，CD4+/CD8+T比例明顯高于正常人，并與疾病嚴重程度有關(guān)，且B淋巴細胞的活性與T淋巴細胞缺陷有關(guān)[5]。人外周血T淋巴細胞根據(jù)細胞膜表面表達的受體分為三大不同亞群，臨床通常檢查CD3+、CD4+和 CD8+T 淋巴細胞亞群。CD4+T細胞又稱輔 /誘導(dǎo)性T細胞（ T helper/ inducer，Th /Ti輔助細胞），主要功能是促進免疫細胞增殖、分化，協(xié)調(diào)細胞相互作用， 激發(fā)免疫應(yīng)答。CD 8+T細胞又稱抑制性/細胞毒性T細胞 （Tsuppressor /cy totox ic，Ts/Tc）抑制免疫應(yīng)答。T淋巴細胞亞群可反映機體細胞免疫的基本狀況，CD4+/CD8+被稱為免疫調(diào)節(jié)指數(shù)，可在一定程度上反映機體的細胞免疫狀態(tài)。

本實驗研究顯示，模型小鼠CD4+和CD4+/CD8+較正常小鼠明顯升高，提示T淋巴細胞調(diào)節(jié)紊亂在SS的發(fā)生與發(fā)展中有重要作用，與眾多研究結(jié)果具有一致性。對SS模型小鼠，予TGP灌胃后，均能不同程度地提高其唾液流量、減少其飲水量，尤以中劑量、高劑量效果明顯，與醋酸潑尼松組相當。同時實驗結(jié)果顯示，各給藥組均能降低SS模型小鼠外周血中CD4+T細胞及CD4+/CD8+T水平，以TGP中、高劑量組及醋酸潑尼松組作用明顯，且TGP中、高劑量組對CD4+T細胞及CD4+/CD8+T比值的影響效果與醋酸潑尼松組相當。因此，我們推測TGP治療SS的機制可能是通過抑制CD4+細胞活化，減少Th1/Th2細胞因子的產(chǎn)生，從而維持Th1/Th2平衡。

現(xiàn)代中醫(yī)認為SS屬中醫(yī)學(xué)“燥證”范疇，其發(fā)病以氣陰二虛為多，脾氣虛和肝腎陰虛引起的津液生成和敷布異常是SS發(fā)病的關(guān)鍵。在SS的治療方面，目前西醫(yī)無有效的治療辦法，在急性期多采用激素治療，長期服用副作用較大。中醫(yī)主要采用滋陰潤燥、健脾補血，結(jié)合清熱解毒、活血化瘀、宣肺布津等方法，療效頗佳。由于中醫(yī)多是采用湯劑加減的方法治療，效果雖好，但用藥不便。白芍性涼，味苦酸，微寒，具有補血柔肝、滋陰潤燥之功效，TGP是其主要有效成分，近年來對其藥理作用的研究以及在風(fēng)濕免疫病中的應(yīng)用研究方面都取得了較大的進展[6]，研究者普遍認為TGP具有抗炎、鎮(zhèn)痛、多途徑雙向免疫調(diào)節(jié)等作用。本研究顯示，TGP對SS模型小鼠具有與激素相當?shù)寞熜?，同時能改善其免疫學(xué)異常，可能替代激素在SS中的使用，從而避免其副作用，值得進一步深入研究。

5 參考文獻

[1] 李俊，粱君山，周愛武，等.白芍總甙對B淋巴細胞增殖和白介素1生成的調(diào)節(jié)作用[J].中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志，1994，8（1）：53-54.

[2] 魯靜，沈暉，劉永斌，等.白芍總苷治療干燥綜合征的臨床觀察[J].中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2006，16（1）：

78-80.

[3] 肖林，楊軍，暨興華，等.干燥綜合征動物模型的建立[J].重慶醫(yī)學(xué)，2003，32（3）：306-308.

[4] 吳端生，張建.現(xiàn)代實驗動物學(xué)技術(shù)[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2007：283.

篇7

【關(guān)鍵詞】急性胰腺炎

doi:10.3969/j.issn.1006-1959.2010.05.333 文章編號:1006-1959(2010)-05-1328-02

動物急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)現(xiàn)已成為普通外科常見的急腹癥,具有發(fā)病急,病情重,死亡率高的特點,至今仍是普通外科的一大難題。其中急性重癥胰腺炎(severe acute panceratitis,SAP)由于常并發(fā)多器官功能衰竭和嚴重感染,死亡率進一步增高可高達30%[1]而對其機制尚無明確的結(jié)論,缺乏特效的方法阻止胰腺組織壞死的發(fā)生和發(fā)展,臨床治療也很棘手。所以,建立一種符合臨床急性胰腺炎動物模型以便探討發(fā)病機理,治療顯得尤為重要。大鼠作為動物模型有能比較準確地重現(xiàn)疾病、方便飼養(yǎng)和撲捉、容易存活、價格經(jīng)濟的特點現(xiàn)已被廣泛應(yīng)用。本文對大鼠急性胰腺炎模型的各種制作方法以及進展作一綜述,以便實驗研究中合理選擇和采用。

1.AP動物模型常見的方法

1.1 胰膽管注射法:1980年Aho等首次采用切開大鼠十二指腸前壁,再經(jīng)十二指腸插入塑料管,向胰膽管內(nèi)逆行注射牛璜膽酸鈉。從而制得了急性胰腺炎模型。但易導(dǎo)致腸出血和狹窄,使實驗失敗。該方法幾年來不斷地改進和完善,至1992年Schmidt采用的逆行胰膽管內(nèi)注射甘氨脫氧膽酸(gly-codeoxychotic acid,GDOC)的方法。目前比較規(guī)范的制模方法:沿正中線切開腹壁,找到十二指腸,然后用細導(dǎo)管經(jīng)由十二指腸降部的腸壁處,通過壺腹部逆行穿刺進入胰膽管,向胰膽管內(nèi)推進5mm,見膽汁和胰液流出后,隨即用細絲線在壺腹部開口處結(jié)扎防止注射液回流;同時于膽總管上段用小動脈夾鉗夾閉,防止注射液上行流入肝內(nèi)。通過調(diào)節(jié)GDOC劑量以及推注時間誘導(dǎo)出大鼠不同程度的AP。本模型在病因、致病機制及病理等方面與臨床上的AP相似,可以模仿胰管梗阻和膽汁返流所致的AP。該方法有較好的重復(fù)性和可比性,缺點是操作費時以及藥物的注射速度難以掌握,許永春等改用微量泵逆行胰膽管內(nèi)注射藥物,較好地控制了藥物的注射速度,提高了模型的成功率[2]。

1.2 結(jié)扎法:結(jié)扎法是比較一種比較常見的方法。1980年Chetty預(yù)先在大鼠十二指腸內(nèi)放置塑料管,用絲線將十二指腸結(jié)扎于塑料管兩端,形成十二指腸閉襻,胃內(nèi)容物通過塑料管下流。實驗發(fā)現(xiàn)胰腺24h后出現(xiàn)水腫、出血、胰周脂肪壞死。該模型與人體膽汁返流AP相類似。其機制是十二指腸腔內(nèi)壓力增高,使膽汁返流入胰管,膽汁破壞了胰管上皮的黏膜屏障,返流入胰管的膽汁卵磷脂被胰液分解為可破壞細胞膜和導(dǎo)管的溶血卵磷脂,胰內(nèi)蛋白酶被激活,導(dǎo)致胰腺組織的自我消化,造成胰腺水腫、出血和壞死。此法操作簡便,損傷小,模型穩(wěn)定可靠,可作為研究AP的發(fā)病機制理想動物模型。

1.3 胰腺被膜下注射法:1994年薛建國等[3]設(shè)計了在胰腺被膜下均勻注射5%?；悄懰徕c制備大鼠AP動物模型的方法。2002年王單松等[4]改良了該實驗,制模方法:經(jīng)腹正中線入腹,提起脾和胰尾,用1號針頭平面朝上沿胰被膜下均勻注射3%?；悄懰徕c(sodium taurocholate),依次向胰管開口方向推進,緩慢注入?；悄懰徕c1.0ml,使整個胰腺均勻隆起,30min即可檢測血清淀粉酶明顯升高,胰腺出現(xiàn)明顯水腫和腹水。機制是胰腺被膜下注射?；悄懰徕c后,早期?；悄懰徕c直接化學(xué)刺激引起被膜下胰腺組織損傷,后期膽鹽激活胰酶產(chǎn)生自身消化,使胰酶進一步損害。此方法簡單,易于操作,省時省力,可快速大批地建立AP動物模型,可用于研究AP病因?qū)W、發(fā)病機制及評價藥物治療效果。同時,它克服了雨蛙素和結(jié)扎膽胰法誘導(dǎo)產(chǎn)生的胰腺炎變程度較輕,逆行膽胰管注射法病程發(fā)展快,死亡率高的不利因素,是大鼠急性胰腺炎比較理想的模型。

1.4 雨蛙素注射法:雨蛙素是膽囊收縮素(cholecystokinin,CCK)的肽類似物,能刺激胰腺的個分泌,使胰蛋白水解酶大量分泌,引起胰腺腺泡自溶。Njederau采用了多次皮下注射,發(fā)現(xiàn)間質(zhì)炎癥和胰腺細胞壞死在6h時就很明顯,12h后達到高峰,因而推測雨蛙素誘導(dǎo)的AP的嚴重程度是劑量依存的。優(yōu)點是:不需手術(shù)創(chuàng)傷小,操作簡單,產(chǎn)生AP迅速,給藥方式多。缺點是:病情較輕,不亦做SAP模型。

1.5 腹腔內(nèi)注射大劑量L-精氨酸法:MuzummaL等采用靜脈注射過量L-精氨酸,注射24h后引起胰腺細胞出血和壞死比較顯著,電鏡下見明顯的酶原脫顆粒,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張。L-精氨酸由一氧化氮合酶催化生成NO,是機體內(nèi)NO的唯一來源,該模型誘導(dǎo)AP的機制推測是過量的精氨酸使使腺細胞內(nèi)的氨基酸失衡,減少了蛋白酶的合成,導(dǎo)致酶原被過度激活。該法優(yōu)點:簡單廉價,損傷小,重復(fù)性好。但該模型死亡率高,胰腺病理改變不一。

1.6 無膽堿乙硫氨酸(CDE)喂飼法[5]:無膽堿乙硫氨酸(chiline-deficient ethionine,CDE)可誘發(fā)AP。飼料配方包括蔗糖55.8%,豬油20%,大豆蛋白10%,3%乙硫氨酸,添加各種維生素和無機鹽。模型動物可出現(xiàn)腹水、缺氧、低血容量、酸中毒等癥狀。機制推測是因乙硫氨酸干擾了細胞內(nèi)的甲硫氨酸的代謝,從而干擾了細胞膜磷脂的合成,通過飲食中缺乏膽堿使這中作用得到加強,導(dǎo)致胰腺細胞外放作用受阻,雌激素在其中也起著重要的作用,所以一般均選擇雌鼠制作這種模型。該模型的臨床變化、生化過程及胰腺大體組織學(xué)特征與人體AP相似。該模型適用于AP病因及病理生理的研究。

2.觀測指標

急性胰腺炎是胰酶自身消化胰腺引起的化學(xué)炎癥。本病病因多系膽道疾病引起。此外,醺酒、高脂血癥與高鈣血癥、感染等亦可誘發(fā)。急性胰腺炎動物模型制作后是否符合人類疾病模擬性表現(xiàn),其觀察以下幾個指標:

2.1 胰腺組織大體觀察。胰腺是否有胰腺炎的改變,是否有脂肪壞死、出血壞死、腹水、胸水等變化。

2.2 組織光鏡觀察。胰腺炎的炎癥改變,是否隨時間延長病變加重,出現(xiàn)間質(zhì)水腫、灶性壞死、炎性細胞浸潤、腺泡壞死等表現(xiàn)。

2.3 血清淀粉酶和脂肪酶的測定。是否血清淀粉酶和脂肪酶均明顯升高。

3.AP模型的選擇

由于對急性胰腺炎發(fā)病機制尚無明確的結(jié)論,所以迄今為止尚未有一種AP模型與人類AP發(fā)病過程完全一致,并可以全面解釋AP的發(fā)病機制。每一種模型均只能在一定程度上反映AP某一病理生理學(xué)方面的改變情況。而理想的急性胰腺炎模型是:發(fā)病機制與人相似;重復(fù)性好;非侵入性;簡便價廉;疾病進程、并發(fā)癥、死亡率與人類急性胰腺炎相似且有相同的治療反應(yīng)[12]。通過復(fù)習(xí)文獻,大多數(shù)文獻采用了?；悄懰徕c逆行胰膽管注射法和胰腺被膜下注射法,這是因為?；悄懰徕c作為細胞毒性物質(zhì),其誘導(dǎo)胰腺損傷是有濃度依賴性的,便于控制胰腺損傷程度及累及器官數(shù)目不等的多器官損害的模型。

4.結(jié)論

綜上所述,各種模型都有其特點,有些綜合AP病因的研究,有些模型適用于發(fā)病機制的研究,有的適用于研究細胞因子和凋亡,研究者可根據(jù)需要來選擇不同的模型。通過動物模型研究,可使我們更加了解胰腺炎的發(fā)病機制,為臨床提供更好的治療方法。因此隨著對急性胰腺炎發(fā)病機制的不斷深入研究,實驗動物學(xué)等學(xué)科的不斷發(fā)展,可以預(yù)見,會有重復(fù)性好,穩(wěn)定性高,可以彌補不同模型方法的缺點,使其病理形態(tài)、生化改變及時間進程方面都與人類的急性胰腺炎相似的大鼠模型出現(xiàn)。

參考文獻

[1] Wemer J,Schneider L,Uhl W,et al.Acute.pancreatitis;gicaltherapy[J].Schweiz Rundsch Med.Pmx,2005,94(20):825-830.

[2] 徐永春,李兆申,屠振興,等.改良逆行胰膽管注射法制備輕重不同兩種大鼠急性胰腺炎模型[J].第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報,2004,25(11):1251-1252.

[3] 薛建國,王宇,許元第.建立大鼠急性出血壞死性胰腺炎模型方法的改進[J].中華實驗外科雜志,1994,11(5):313.

篇8

ABSTRACT Aim To improve the collecting rate of the adult worms of Trichobiharzia.Methods The adult worms in vena portae and hepaticae interna were collected by the methods of exsomatization and retrograde pouring in vena of livers of ducks.The adult worms in livers，vena portae and vena mesenterica of ducks were collected by the method of pouring aorta descendens.Results A lot of non-traumatic living adult worms and non-traumat could be collected by these methords.The collecting rate of the pouring was significantly higher than that of other methords(p＜0.05).Conclusions The method of pouring was more simple，direct，practical and was better than that of dissection.

KEY WORDS Trichobiharzia adult worm pouring collecting method

毛畢屬（Trichobilharzia）吸蟲為鳥類血吸蟲，其尾蚴可侵襲人體引起變態(tài)反應(yīng)性皮炎，該屬吸蟲宿主較多，家鴨是毛畢屬吸蟲主要的終宿主之一［1～10］。從家鴨體內(nèi)分離出成蟲，是研究其形態(tài)、結(jié)構(gòu)并進行分類的重要基礎(chǔ)。作者在淮河水系毛畢屬吸蟲研究的過程中，對毛畢吸蟲成蟲的分離方法進行了初步研究，取得了較為滿意的結(jié)果，現(xiàn)報道如下。

1　材料和方法

1.1　材料

1.1.1　病鴨　用毛畢屬吸蟲尾蚴（50條）人工感染的、并在院動物房內(nèi)飼養(yǎng)30天以上的雛鴨（為當?shù)鼐用穹趸募银啠毁徸援數(shù)鼐用瘢O民及農(nóng)民）于毛畢吸蟲流行水域內(nèi)放養(yǎng)1年以上的陽性家鴨。

1.1.2　藥品器材　肝素（Ehter.批號：930407，上海浦江應(yīng)用生物化學(xué)研究所。）乙醚（Diethylether，批號：960423，宜興市第二化學(xué)試劑廠）、注射器、9號注射針頭、吊瓶、解剖針、橡皮導(dǎo)管、玻璃導(dǎo)管、手術(shù)刀、剪等。

1.2　方法

1.2.1　肝門靜脈、腸系膜靜脈解剖法　將病鴨（其糞便經(jīng)毛蚴孵化為陽性的家鴨）固定在解剖臺上，用乙醚麻醉后，剖開胸腹部，將肝門靜脈和肝靜脈結(jié)扎，用眼科剪、解剖針和“0”號毛筆剖檢肝門靜脈和腸系膜靜脈分離成蟲。即從較細的腸系膜靜脈開始，分段以解剖針刺破靜脈，并以解剖針從靜脈遠端驅(qū)趕血液（成蟲）從刺流出，用毛筆輕取流出血液至含有生理鹽水的平皿中，用生理鹽水反復(fù)清洗換水，直至蟲體被洗凈為止。最后在解剖鏡下收集成蟲。

1.2.2　在體肝臟灌注法　將病鴨（其糞便經(jīng)毛蚴孵化為陽性的家鴨）固定在兔解剖臺上，在翅根部靜脈注射2ml肝素鈉（12500U），隨即用乙醚麻醉后剖開胸腹部，暴露內(nèi)臟（操作中應(yīng)避免劃傷心臟和肝臟）。接著在肝靜脈出口遠端和門靜脈起始端各作一切口，分別插入導(dǎo)入管和導(dǎo)出管（上述兩管可由普通玻璃吸管替代，其長短、粗細根據(jù)鴨子的大小與靜脈的粗細選用）。將含有生理鹽水的500ml吊瓶，置于2.5m高處，通過輸液皮條與導(dǎo)入管相連，接通生理鹽水，生理鹽水和成蟲一起即可從門靜脈導(dǎo)出管口流出（抬高導(dǎo)入端解剖臺效果尤佳）。

當流出液中含有較多組織液和血液時，可在量杯中換水沉淀幾次，每次5min。若流出液較清晰，立即吸入小培養(yǎng)皿內(nèi)，在解剖鏡下或用肉眼直接分檢。

1.2.3　離體肝臟灌注法　將病鴨（其糞便經(jīng)毛蚴孵化為陽性的家鴨）固定在解剖臺上，在翅膀根部注射2ml肝素鈉。隨即用乙醚麻醉后解剖，暴露內(nèi)臟。用止血鉗或縫合線分別夾（扎）住肝靜脈和門靜脈起始端，仔細分離肝臟，并移至平皿內(nèi)。然后將連有生理鹽水吊瓶的吸管慢慢插入肝靜脈內(nèi)，接通生理鹽水進行灌注，將門靜脈流出液倒入300ml量杯內(nèi)，沉淀，換水2次，緩慢棄去上液，沉淀液倒入小平皿內(nèi)，在解剖鏡下或手持放大鏡用肉眼直接分檢。

1.2.4　肝門靜脈及腸系膜靜脈同時灌注法　將病鴨（其糞便經(jīng)毛蚴孵化為陽性的家鴨）固定在解剖臺上，在翅膀根部注入2ml肝素鈉，雛鴨酌減，用乙醚麻醉后，迅速打開胸腹腔，暴露內(nèi)臟。用止血鉗夾住肝靜脈，將連有生理鹽水吊瓶的9號針頭插入降主動脈內(nèi)，隨后將門靜脈起始端剪斷，用一漏斗放于大、小腸的下方。接通生理鹽水，流出液經(jīng)尼龍網(wǎng)過濾，將阻留物翻入含生理鹽水的培養(yǎng)皿中，直接鏡檢。

2　結(jié)果

2.1　肝門靜脈系統(tǒng)和腸系膜靜脈解剖法　分別解剖人工感染毛畢吸蟲尾蚴的雛鴨和在當?shù)亓餍袇^(qū)自然感染的家鴨各20只，共分離到完整的成蟲388條（雌蟲349條，雄蟲39條）。其中從人工感染毛畢屬吸蟲尾蚴的雛鴨體內(nèi)共分離成蟲138條（雌蟲127條，雄蟲11條），每只雛鴨檢獲成蟲數(shù)目不等，最少3條，最多26條，平均6.9條；從自然感染的家鴨體內(nèi)共分離成蟲250條（雌蟲194條，雄蟲56條），每只家鴨檢獲的成蟲2～72條，平均12.5條。從40只家鴨體內(nèi)均分離到活體成蟲，此外尚有部分蟲體斷片。

2.2　在體肝臟灌注法　分別灌注人工感染毛畢吸蟲尾蚴的雛鴨20只和在當?shù)亓餍袇^(qū)自然感染的家鴨35只。共分離成蟲2546條（雌蟲1393條，雄蟲1153條）。其中從人工感染毛畢屬吸蟲尾蚴的雛鴨體內(nèi)檢獲成蟲699條（雌蟲249條，雄蟲350條），每只雛鴨檢獲成蟲5～38條，平均34.95條；從自然感染的家鴨體內(nèi)共檢獲成蟲1847條（雌蟲932條，雄蟲915條），每只家鴨檢獲成蟲12～86只，平均52.77條。從55只家鴨體內(nèi)分離到的成蟲均為活蟲。

2.3　離體肝臟灌注法　分別灌注人工感染的病鴨6只和自然感染的病鴨10只，共分離成蟲2495條（雌蟲1215條，雄蟲1280條）。其中人工感染的病鴨檢獲成蟲192條（雌蟲95條，雄蟲97條），每只人工感染的病鴨檢獲成蟲22～41條，平均32條；從自然感染的病鴨檢獲成蟲2303條（雌蟲1006條，雄蟲1297條），每只病鴨檢獲成蟲186～315條，平均230.3條。從16只病鴨檢獲的成蟲均為活蟲。

2.4　肝門靜脈及腸系膜靜脈灌注法　分離人工感染的雛鴨10只和在流行區(qū)購買的陽性家鴨10只，分別檢獲成蟲448條（雌蟲197條，雄蟲251條）和2554條（雌蟲1231條，雄蟲1323條）。每只人工感染的病鴨檢獲成蟲22～56條，平均45條；每只購自流行區(qū)的陽性家鴨檢獲成蟲194條～396條，平均255條。從20只病鴨所分離的成蟲均為活蟲。

3　討論

毛畢屬吸蟲的終宿主主要為家鴨和綠頭鴨、綠翅鴨、斑嘴鴨和斑背潛鴨、蒼頂夜鷺等候鳥［1～10］，其中家鴨是人們研究毛畢屬吸蟲常用的實驗動物，無論是研究其生活史、分類還是流行病學(xué)調(diào)查都用家鴨作為成蟲的動物模型。據(jù)以往文獻記載，從家鴨體內(nèi)分離毛畢吸蟲，多采用肝門靜脈、腸系膜靜脈解剖法，而肝臟灌注法收集毛畢吸蟲成蟲，尚未見報道。從本次研究結(jié)果可見，肝門靜脈、腸系膜靜脈解剖法手工操作分離成蟲較慢，費時費力，從解剖1只病鴨到其中的成蟲分離完畢，一個人要花4～6h，因蟲體較小，又與血液混合在一起，分離時不易看清，易漏檢，且血凝后無法進行操作。因此，該方法成蟲收集率低。應(yīng)用肝臟灌注法（無論是采取在體灌注，還是離體灌注），從解剖1只病鴨到成蟲分離完畢，一個人僅需用1～2h。因此肝臟灌注法與常規(guī)的肝門靜脈、腸系膜靜脈解剖法相比較，具有省時、省力，所獲成蟲蟲體完整、潔凈、便于活體測量和操作簡便等優(yōu)點，且成蟲收集率也明顯增高。因為鴨肝靜脈位于心臟的背面，粗而短；門脈位于腸系膜中，既細又短，在體灌注有一定困難。因此，離體肝臟與在體肝臟灌注兩者相比，前者更便于操作。但在離體肝臟灌注時，若操作不熟練、分離肝臟的時間長，可導(dǎo)致肝門靜脈內(nèi)血液凝固，灌洗出的蟲體包裹在血凝塊中，檢出率將大受影響、甚至檢不出成蟲。由于鴨肝很脆弱，易損傷，故在灌注前插管和分離肝臟時，應(yīng)細心操作。若操作不慎，肝臟出現(xiàn)裂損，可降低肝臟內(nèi)的灌注壓力，從而影響灌洗效果，使蟲體不能全部沖出。較高的灌注壓力和完整無損的鴨肝是灌注成功的關(guān)鍵。

雖然肝臟灌注法大大地提高了收集成蟲的效率，但是，寄生于腸系膜內(nèi)的成蟲無法沖出，采用肝門靜脈和腸系膜靜脈同時灌注法較好地解決了這個矛盾，無疑是毛吸蟲分離方法上的一大進步。

由于灌注法具有常規(guī)肝門靜脈、腸系膜靜脈解剖法不可比擬的優(yōu)點，建議此方法應(yīng)用于家畜（牛、羊）體內(nèi)東畢吸蟲成蟲的分離。常規(guī)收集家畜東畢吸蟲成蟲的方法有二種：一是?；蜓蚋伍T靜脈解剖法；二是將牛或羊肝用刀切數(shù)下而不切穿，放于篩筐內(nèi)沖洗，同時用手擠壓20min，將篩內(nèi)容物洗入量杯，用水反復(fù)沉淀，取沉淀渣檢查蟲體，費力、費時。應(yīng)用灌注法可能會克服上述不足，產(chǎn)生更好分離效率。

關(guān)于毛畢吸蟲在鴨體內(nèi)的寄生部位，根據(jù)唐仲璋，唐崇惕（1962）報道，毛畢吸蟲除寄生在門靜脈和腸系膜靜脈外，還可以寄生于肺和心臟。解剖9只鴨子共收集毛畢吸蟲成蟲233條，其中186條（79.83％）寄生于肝門靜脈和腸系膜靜脈，25條（10.73％）和22條（9.44％）分別寄生于肺部及心臟。因此要計算鴨體蟲荷的多少，應(yīng)對病鴨進行較細致的解剖和灌注，才能較客觀地了解其毛畢吸蟲感染度。作者已初步嘗試采用肝臟和腸系膜靜脈灌注法及灌注后再對肺、心進行解剖分離家鴨體內(nèi)的毛畢吸蟲成蟲，此項工作尚待進一步完善、總結(jié)。此方法對于了解毛畢吸蟲的分布和不同部位雌雄蟲的比例具有價值。

參考文獻

1.李朝品.淮河水系發(fā)現(xiàn)毛畢屬吸蟲.中國人獸共患病雜志，1996，12（3）：54.

2.李朝品，等.淮河水系毛畢吸蟲的研究初報.中國血吸蟲病防治雜志.1999，11（1）：27.

3.李朝品，等.淮河水系尾蚴性皮炎流行畜學(xué)調(diào)查初報.中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志，1998，16（5）：384.

4.楊士靜，蘇信生.自病兔獲取血吸蟲成蟲灌注法的改進，上海醫(yī)學(xué)院.

5.唐仲璋，唐宗惕.產(chǎn)生皮膚疹的家鴨血吸蟲的生物學(xué)研究及其在哺乳動物的感染實驗.福建師范學(xué)院學(xué)報，1962，2：1.

6.唐仲璋，唐宗惕.中國裂體科吸蟲和稻田皮膚疹.動物學(xué)報，1976，22（4）：341.

7.劉忠.吉林省稻田皮炎的調(diào)查及集安毛畢吸蟲生活史的觀察.動物學(xué)報，1980，26（2）：153，

8.上海市稻田皮炎防治研究組.禽類血吸蟲尾蚴皮炎調(diào)查和預(yù)防措施的研究.中華皮膚科雜志，1996，12（3）：131.

篇9

關(guān)鍵詞：谷氨酰胺;燒傷;休克心;心肌細胞;線粒體

諸多研究顯示，嚴重?zé)齻缙诩闯霈F(xiàn)心肌器質(zhì)性損害。由于燒傷早期出現(xiàn)的心肌缺血缺氧損害，不僅引起心功能不全還可以誘發(fā)或使燒傷休克加重，成為燒傷早期缺血缺氧的重要啟動因素之一，因此黃躍生等于2000年提出了“休克心”這一概念[1]。鑒于此，臨床上開展對燒傷后“休克心”的防治研究具有非常重要的理論與臨床意義。

近年來有研究表明，谷氨酰胺（glutamine，Gln）在燒傷營養(yǎng)中的作用已遠遠超出了傳統(tǒng)非必需氨基酸的范疇。當機體處于燒傷、創(chuàng)傷、感染等應(yīng)激狀態(tài)時，機體發(fā)生一系列的代謝變化，需要補充外源性谷氨酰胺。谷氨酰胺作為腸道粘膜細胞代謝所必需的營養(yǎng)物質(zhì)，能夠促進胃腸道細胞增殖，維持免疫細胞的正常功能，提高燒傷、創(chuàng)傷的治愈率并且降低病死率。[2]。本研究中，我們將重點觀察Gln對燒傷后心肌細胞線粒體的影響，以進一步闡明Gln保護燒傷“休克心”，維護心臟正常功能的作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組

健康成年Wistar大鼠90只，雌雄不限，體質(zhì)量（220±30）g，由南華大學(xué)實驗動物學(xué)部提供。隨機分成3組，正常對照組（A組，n=10）、燒傷對照組（B組，n=40）和Gln組（C組，n=40）。分別觀察傷前（ A 組） ，以及傷后3、6、12、24h四個時相點 （ B 組、C 組） ，每個時相點10只大鼠。

1.2 燒傷模型的制備

A組不予燒傷，其他2組大鼠燒傷前禁食12h，1%戊巴比妥鈉（30mg/kg）腹腔注射麻醉，背部電推剃毛，置于92℃水浴中燙傷18秒，造成30%體表面積Ⅲ度燒傷（病理切片證實）。傷后按40ml/kg腹腔注射乳酸林格氏液進行液體復(fù)蘇，創(chuàng)面涂以碘伏抗感染，每天2次。Gln組大鼠采用灌胃方式給予Gln 1.0 g / （ kg? d）。燒傷對照組給予同等劑量的甘氨酸， 使各組大鼠等氮、等熱量。傷后動物自由進食，自由飲水。

1.3 心肌線粒體的制備

斷頭處死大鼠， 摘取心臟， 心肌線粒體的提取采用組織線粒體分離試劑盒（美國Pierce公司），操作按照試劑盒說明書進行。將新鮮的心肌組織（約50～100mg）置于已預(yù)冷的玻璃勻漿器中， 用眼科剪將心臟反復(fù)剪碎，直至剪成肉泥; 再加入800ml線粒體分離試劑A，小心勻漿約20次，將勻漿液轉(zhuǎn)移至Eppendorf管中，再加入800ml線粒體分離試劑C，700g，4℃條件下，離心10min。取上清液在3000g，4℃條件下，離心15min。取沉淀加入500ml線粒體分離試劑C，在12000g，4℃條件下，離心5min。第三次離心后的沉淀即為心肌組織的線粒體。

1.4 心肌線粒體細胞色素C的測定

取兩個比色杯，分別加入線粒體懸液適量，0.1mol/L磷酸緩沖液（pH7.4），10%去氧膽酸鈉及10mmol/L K3Fe（CN） 6，測定杯中加入連二硫酸鈉，記錄波長540～630nm 處的氧化-還原光譜，取540～ 550nm 光譜差計算細胞色素C含量。

1.5 心肌線粒體SOD、 MDA和GSH-Px和含量測定

SOD活性測定采用黃嘌呤氧化酶法，MDA含量測定采用硫代巴比妥酸法，GSH-Px 活性測定采用二硫代二硝基苯甲酸比色法。具體操作方法按試劑盒說明書進行。

1.6 統(tǒng)計分析

數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差（用±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，所有數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件分析。

2 結(jié)果

2.1 Gln對燒傷大鼠心肌線粒體細胞色素C水平的影響

與對照組比較，燒傷組心肌線粒體細胞色素C在傷后3、6、12及24 h均呈顯著性降低，其中傷后12 h下降幅度最大，Gln治療組心肌線粒體的細胞色素C在燒傷后3、6、12及24 h 均較燒傷組有明顯升高，見表1。

表1 心肌細胞線粒體內(nèi)細胞色素C水平（±s）

組別

傷后時間

t/h

細胞色素c水平

/μmo l? mg - 1PRO

對照組（A組）

0.53±0.04

燒傷組（B組）

3

0.35±0.03#

6

0.29±0.05#

12

0.27±0.02#

24

0.33±0.04#

Gln組（C組）

3

0.47±0.07*

6

0.42±0.05*

12

0.35±0.06*

24

0.41±0.06*

與對照組比較， #P < 0.05;與燒傷組比較，* P < 0.05

2.2 Gln對燒傷大鼠心肌線粒體SOD、 MDA、GSH - Px含量的影響

由表2可見，大鼠燒傷后心肌線粒體SOD、GSH - Px活性在傷后均呈顯著性下降，MDA含量有不同程度的升高。與燒傷組比較，Gln治療組SOD、GSH - Px活性明顯升高，MDA含量顯著降低。

表2 心肌線粒體內(nèi)SOD、MDA及GSH C Px的含量（±s）

組別

傷后時間

t/h

SOD

/U? mg - 1

MDA

/nmol? mg - 1

GSH-Px

/U? mg - 1

對照組（A組）

712.5±106.2

3.5±0.8

18.5±5.7

燒傷組（B組）

3

493.5±78.5#

5.6±1.1#

12.2±4.9#

6

441.1±72.8#

8.3±1.5#

9.7±4.5#

12

458.7±83.3#

7.9±1.3#

12.1±4.7#

24

480.2±88.4#

6.5±0.9#

13.4±5.5#

Gln組（C組）

3

696.8±74.6*

4.1±1.2*

16.9±5.2*

6

660.5±80.4*

4.7±1.5*

13.2±4.4*

12

682.1±77.2*

4.2±0.9*

15.8±5.3*

24

692.1±84.5*

3.9±0.8*

17.1±6.2*

與對照組比較， #P < 0.05;與燒傷組比較，* P < 0.05

3 討論

研究表明心肌損害在嚴重?zé)齻脑缙诰鸵殉霈F(xiàn)， 由于心臟的特殊重要性， 其損害不僅可引起心功能不全，還可成為造成或加重全身其它組織器官的缺血缺氧損害的推手，因此，燒傷后“休克心”的研究則具備了其必要性與重要性。嚴重?zé)齻缙诔霈F(xiàn)的心肌器質(zhì)性損害，主要表現(xiàn)如下： 1.心功能降低：燒傷后，心臟脈搏量（SV） 、脈搏指數(shù)（SVI） 、心排出量（CO） 和心排血指數(shù)（ CI）均降低;2. 心肌力學(xué)指標降低：燒傷后，主動脈收縮壓（AOSP） 、主動脈舒張壓（ AODP） 、主動脈平均壓（MAP） 、左心室收縮壓（LVSP） 、左心室舒張末期壓（ LVEDP） 、左心室等容收縮期壓力最大上升/下降速率（± dp/ dtmax）等均有所下降;3. 心肌細胞結(jié)構(gòu)受損：燒傷后，肌球蛋白Ca2+ - ATP 酶活性降低，而血中肌球蛋白輕鏈1（ CM- LC1） 和肌鈣蛋白T（ TnT ） 明顯升高。心肌肌膜下出現(xiàn)空泡， 基膜與質(zhì)膜分離，基膜缺損或質(zhì)膜斷裂。光鏡下可見心肌橫紋模糊不清，隨著病程進展，還可出現(xiàn)心肌間質(zhì)水腫、肌纖維斷裂 、線粒體腫脹甚至空化等現(xiàn)象。 燒傷后“休克心”的發(fā)病機制較為復(fù)雜，主要總結(jié)為以下幾個方面：1.心肌缺

血再灌注損傷;2.心肌組織水腫;3.心肌細胞氧利用及能量代謝障礙;4.失控性炎癥反應(yīng)。

心肌細胞線粒體的含量較為豐富，線粒體是為生命活動提供能量的重要細胞器。當機體受到外界等諸多致病因素的影響時，如燒傷、創(chuàng)傷、感染等應(yīng)激情況，可引起線粒體結(jié)構(gòu)與功能的改變[3]。SOD 是體內(nèi)重要的抗氧化酶，能夠清除體內(nèi)的氧自由基，保護機體細胞和組織免受自由基的損害，而SOD活力下降也預(yù)示著機體清除自由基的能力降低。GSH-Px在細胞內(nèi)能清除過氧化物代謝產(chǎn)物，阻斷脂質(zhì)過氧化連鎖反應(yīng)，從而起到保護細胞結(jié)構(gòu)和功能的作用。SOD、GSH-Px的水平下降，機體對氧自由基的清除能力降低，可導(dǎo)致機體出現(xiàn)嚴重的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，損傷組織細胞。MDA是脂質(zhì)過氧化的分解產(chǎn)物，是反映組織氧化損傷水平的指標之一，MDA含量增高說明機體氧化損傷加重。

大量研究顯示： 燒傷后早期發(fā)生心肌線粒體結(jié)構(gòu)與功能損傷，損傷的心肌產(chǎn)生大量的氧自由基，線粒體SOD、 GSH-Px 為了清除過多的自由基而導(dǎo)致消耗增多、活性下降。體內(nèi)自由基增多導(dǎo)致導(dǎo)致組織過氧化反應(yīng)，使得線粒體內(nèi)MDA 含量升高。MDA含量增高能夠影響線粒體的電子傳遞和磷酸化過程，導(dǎo)致ATP 酶活性下降， 使ATP 合成減少，能量供應(yīng)不足最終影響細胞的功能。本研究中，我們給予燒傷大鼠Gln 后，增強了心肌線粒體SOD 和GSH-Px 的活性， 降低了線粒體脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA 水平， 從而保證了線粒體的正常氧化和產(chǎn)能功能，明顯減輕燒傷后導(dǎo)致的心肌損傷。

線粒體另一個重要的功能是進行生物氧化和提供細胞生命活動所需的能量。細胞色素C 是一種結(jié)構(gòu)松散的水溶性膜外周蛋白[4]，細胞色素C缺失或者功能障礙，會導(dǎo)致線粒體呼吸鏈電子傳遞中斷，導(dǎo)致ATP生成減少，細胞生命活動所需能量不足;另外，呼吸鏈電子傳遞障礙所致氧化不全也會造成ROS生成增多，從而損傷組織細胞。本研究顯示，燒傷后心肌細胞線粒體內(nèi)細胞素C 水平明顯降低，Gln能顯著提高燒傷后大鼠心肌細胞線粒體細胞色素C水平，有利于線粒體的生物氧化進而起到保護細胞的作用。

谷氨酰胺是一種中性氨基酸，它是含量最豐富的游離氨基酸， 60% 的游離氨基酸是谷氨酰胺。Gln是目前臨床上應(yīng)用得非常廣泛的營養(yǎng)制劑，它具有保護腸道粘膜、提高免疫力、促進蛋白質(zhì)合成、促進傷口愈合、抗抑郁、抗衰老等多種功能。業(yè)界認為，Gln屬于條件必需氨基酸， 更是一種特殊的藥物，因為它不僅能夠作為營養(yǎng)物質(zhì)提供氮源，還能強化機體免疫系統(tǒng)和抗氧化反應(yīng)，目前已應(yīng)用于骨髓移植和AIDS的患者。但是Gln 本身具有其局限性，溶解度低、穩(wěn)定性差，難以做為常規(guī)靜脈制劑，使其在臨床上作為常規(guī)的急救藥物應(yīng)用于燒傷早期心肌損害的防治受到了限制，因此我們后續(xù)的研究有待進一步解決相關(guān)問題。

篇10

關(guān)鍵詞：實踐；細胞生物學(xué)；教學(xué)效果

中圖分類號：G642.0 文獻標志碼：A 文章編號：1674-9324（2013）46-0176-02

任何知識的學(xué)習(xí)都以學(xué)以致用為最終目的，必須做到理論聯(lián)系實際，細胞生物學(xué)的學(xué)習(xí)也是如此，而且生物這門學(xué)科本身具有較強的實踐性，我國在進行生物學(xué)教學(xué)的時候，也是將實驗教學(xué)放在首要位置的，但是，我國基于實踐的細胞生物學(xué)教學(xué)體系并不完善，需要對教學(xué)方法進行深入的改進，使細胞生物學(xué)的知識能在實踐研究中得到更好的應(yīng)用。

一、將細胞生物學(xué)教學(xué)與實踐結(jié)合的重要意義

1.將細胞生物學(xué)教學(xué)與實踐結(jié)合起來是學(xué)科本身發(fā)展的需求。細胞生物學(xué)是一門基礎(chǔ)性的生命科學(xué)，主要任務(wù)是研究細胞的生命活動規(guī)律，通過對細胞生命現(xiàn)象的觀察，總結(jié)出細胞生命活動的規(guī)律，進而采用合理的方法手段控制或者引導(dǎo)細胞向有利于人們身心健康的方向發(fā)展，近些年，全球癌癥的發(fā)病率逐年上升，鑒于這種實際現(xiàn)狀，世界上的細胞生物學(xué)開始嘗試通過一定的物理或者化學(xué)手段，減少癌癥的發(fā)病率、增強癌癥患者的生命期，并且已經(jīng)取得了良好的研究成果，所以，生物學(xué)本身的發(fā)展就要求理論與實踐相結(jié)合。

2.將細胞生物學(xué)教學(xué)與實踐結(jié)合起來是人才培養(yǎng)的需要。目前，根據(jù)我國生物科學(xué)的發(fā)展現(xiàn)狀，生物學(xué)方面的學(xué)生就業(yè)方向主要是地方教育機構(gòu)或者一些生物方向的廠家。對于地方教育機構(gòu)來講，隨著我國教育事業(yè)的不斷發(fā)展，現(xiàn)在的生物學(xué)教育理念已經(jīng)發(fā)生了巨大的變化，現(xiàn)在的教育模式更傾向于課堂實驗教學(xué)，老師通過課堂做實驗，讓學(xué)生對自己得出結(jié)論。

3.將細胞生物學(xué)教學(xué)與實踐結(jié)合起來是提高教學(xué)質(zhì)量的需求。細胞生物學(xué)的實踐教學(xué)可以提高學(xué)生對事物的觀察能力和操作能力，對未來的生物數(shù)據(jù)處理和實際應(yīng)用生物理論解決問題能力也有很大的幫助，在進行有效的生物教學(xué)之前，學(xué)校必須首先為實踐教學(xué)創(chuàng)造良好的硬件條件，購買一些先進的生物設(shè)備、根據(jù)實際需要建立具有一定規(guī)模的實習(xí)基地，社會對學(xué)生細胞生物學(xué)的檢驗標準不僅僅是依靠學(xué)習(xí)成績，更多的是考查學(xué)生對實驗內(nèi)容、實驗操作細節(jié)等的理解程度。實踐是學(xué)好細胞生物學(xué)課程的基礎(chǔ)，將細胞生物教學(xué)與實踐結(jié)合起來對提高教學(xué)質(zhì)量有很好的效果。

二、提高基于實踐的細胞生物學(xué)教學(xué)效果的措施

我國的細胞生物學(xué)實踐教學(xué)主要方式是課堂的實驗教學(xué)，所以，要想提高基于實踐的細胞生物學(xué)教學(xué)效果還得從提高實驗教學(xué)效率入手，通過提高學(xué)生做實驗的學(xué)習(xí)效率來達到提高生物屑教學(xué)效果的目的。

1.改變實驗教學(xué)模式。以前我國的學(xué)校進行細胞生物學(xué)實驗的方法是：老師將實驗步驟、實驗操作、注意事項在實驗之前全部告訴學(xué)生，學(xué)生在老師設(shè)置的要求里用心完成課堂實驗，造成學(xué)生在做實驗的時候，對老師的指導(dǎo)形成了嚴重的依賴性，缺乏創(chuàng)新意識，不利于學(xué)生未來實踐能力的培養(yǎng)。鑒于這種情況，我國開始改變實驗教學(xué)模式，在保證學(xué)生生命安全的條件下，盡可能的將實驗變成開放性實驗，增強學(xué)生在實驗過程中的自主性，學(xué)生根據(jù)自己的設(shè)想，用一定的實驗方法去驗證自己設(shè)想的可行性，老師的任務(wù)是現(xiàn)場監(jiān)督實驗的安全性，對一些存在安全隱患的實驗方法進行制止，并在實驗快要結(jié)束的時候，將課本上的實驗方法進行講解，并鼓勵學(xué)生無論設(shè)想是否正確都要積極去做，科學(xué)的路上本來就充滿挫折，失敗是很正常的，使學(xué)生更加愿意按照自己的設(shè)想去做實驗，久而久之增強了學(xué)生的實驗設(shè)計能力和創(chuàng)新能力，從長遠來看必將推動我國甚至世界生物科學(xué)的發(fā)展。

2.及時的更換實驗內(nèi)容?？茖W(xué)技術(shù)在不斷的進步，生物科學(xué)也不例外。在生物學(xué)實踐教學(xué)的路上必須不斷豐富實驗內(nèi)容，及時的讓學(xué)生學(xué)習(xí)到世界先進的研究成果或者優(yōu)良的研究方法。學(xué)校可以根據(jù)本校學(xué)生的實際情況，適當增加實驗的難度，在安排實驗的時候盡量多一些創(chuàng)新性的實驗減少驗證性實驗的比例，因為相對應(yīng)于驗證性實驗，創(chuàng)新性的實驗更加有利于培養(yǎng)學(xué)生的創(chuàng)新能力和生物研發(fā)能力，創(chuàng)新性實驗提前不知道實驗結(jié)果，學(xué)生帶著問題和好奇去做實驗，而驗證性實驗學(xué)生在做實驗之前就已經(jīng)知道了本實驗的實驗結(jié)果，只是通過一定的方法驗證結(jié)論即可，此外創(chuàng)新性實驗的實驗結(jié)果不唯一，有利于培養(yǎng)學(xué)生的發(fā)散思維，根據(jù)自己對實驗現(xiàn)象的不同理解，從不同的角度得出不同的實驗結(jié)論。實驗是一個實踐性的教學(xué)，更改實驗內(nèi)容光從改變這些實驗的理論是不夠的，還必須要求實驗硬件的配合，增加在實驗方面的投資，購買一些先進的實驗設(shè)備，聘請一些國內(nèi)外知名的生物學(xué)教授來學(xué)校進行教師的培訓(xùn)或者辦學(xué)生講座，軟件和硬件雙管齊下才能達到更換實驗內(nèi)容目標，最終提高基于實踐的細胞生物學(xué)教學(xué)效果。

3.老師根據(jù)學(xué)?，F(xiàn)有的物質(zhì)條件，合理的安排實驗內(nèi)容。雖然我們在細胞生物學(xué)的教學(xué)過程中，大力支持和發(fā)揚實踐教學(xué)，也就是將課堂做生物實驗作為教學(xué)的主要形式，學(xué)生通過做實驗，將理論與實踐結(jié)合起來，并從中鍛煉自己實際解決問題的能力，甚至創(chuàng)造出一些科技成果來，但是，我們也不能盲目的追求實驗教學(xué)，因為大多數(shù)實驗尤其是生物實驗需要非常先進的設(shè)備，有的還需要珍貴的材料做實驗標本，這會無形之中提高學(xué)校的教學(xué)成本，不利于學(xué)校的可持續(xù)發(fā)展，所以，必須將實踐教學(xué)與學(xué)校的實際辦學(xué)條件緊密結(jié)合起來，老師根據(jù)目前學(xué)校目前擁有的先進設(shè)備和實驗標本合理的安排實驗，保證將現(xiàn)有的資源合理利用，對于那些必須的先進生物設(shè)備和實驗標本老師應(yīng)該向上級部門提出申請，希望學(xué)校能盡力滿足。當學(xué)校的實際條件不允許的時候，老師不能將實驗內(nèi)容省略，而是可以對實驗的實際環(huán)境和場景進行模擬，讓學(xué)生盡可能的感受實驗的過程，雖然模擬環(huán)境與實踐環(huán)境有一定的差異，但是對學(xué)生未來的實踐卻有著不可忽視的作用。此外，提高生物學(xué)實踐教學(xué)效果的方法還要求老師根據(jù)本校實際情況自編實驗教材、在實驗結(jié)束后開展實驗討論會、完善細胞生物學(xué)實驗的考核制度等等。

理論聯(lián)系實踐是當代教育改革的一個重要任務(wù)，細胞生物學(xué)的教育也是如此，必須將生物知識通過具體的實驗與實踐聯(lián)系，才能讓學(xué)生真正的理解知識的內(nèi)涵，增加對知識的理解深度，并積累豐厚的實踐經(jīng)驗，為以后的實際工作打下堅實的基礎(chǔ)。本文通過介紹細胞生物學(xué)實踐教學(xué)的重要性，從如何提高課堂實驗教學(xué)效率方面入手，對基于實踐的細胞生物學(xué)教學(xué)做簡要分析。

參考文獻：

[1]樊廷俊，初建松，細胞生物學(xué)課程教學(xué)改革與教書育人的初步嘗試[J].中國大學(xué)教育報，2003，（05）：25-25.

[2]聞亮，加強實踐教學(xué)，注重學(xué)生創(chuàng)新精神和實踐能力的培養(yǎng)[J].內(nèi)蒙古師范大學(xué)學(xué)報，2009，（02）：46-48.