導(dǎo)語(yǔ)：如何才能寫(xiě)好一篇詠雪聯(lián)句，這就需要搜集整理更多的資料和文獻(xiàn)，歡迎閱讀由公務(wù)員之家整理的十篇范文，供你借鑒。

篇1

《義務(wù)教育語(yǔ)文課程標(biāo)準(zhǔn)》指出：“語(yǔ)文課程應(yīng)致力于學(xué)生語(yǔ)文素養(yǎng)的形成與發(fā)展”“引導(dǎo)學(xué)生豐富語(yǔ)言的積累，培養(yǎng)語(yǔ)感，發(fā)展思維，初步掌握學(xué)習(xí)語(yǔ)文的基本方法，養(yǎng)成良好的學(xué)習(xí)習(xí)慣，使他們具有適應(yīng)實(shí)際需要的識(shí)字寫(xiě)字能力、閱讀能力、寫(xiě)作能力、口語(yǔ)交際能力”。語(yǔ)文教學(xué)中，詞匯的積累、把句子說(shuō)完整的訓(xùn)練等等，對(duì)學(xué)生將來(lái)的語(yǔ)言表達(dá)具有無(wú)可替代的作用。因此，一方面，我們教學(xué)時(shí)不可忽視這些“細(xì)節(jié)”；另一方面，我們應(yīng)針對(duì)小學(xué)各個(gè)階段學(xué)生的身心發(fā)展特點(diǎn)、知識(shí)儲(chǔ)備和能力基礎(chǔ)，進(jìn)行相應(yīng)的字、詞、句、段、篇的訓(xùn)練，從整個(gè)小學(xué)階段的高度把握訓(xùn)練的尺度，使這一要求呈現(xiàn)螺旋上升的良性態(tài)勢(shì)。唯有如此，才能讓語(yǔ)文工具性的訓(xùn)練具備序列化的特點(diǎn)。

當(dāng)前小學(xué)語(yǔ)文課堂中，針對(duì)“學(xué)用字詞句”練習(xí)部分的教學(xué)存在以下問(wèn)題。

【存在問(wèn)題】

一、 編者意圖的“跳躍性空白”

“以學(xué)生為本，走綜合之路，貼近學(xué)生實(shí)際，創(chuàng)設(shè)生活化場(chǎng)景，提高學(xué)生學(xué)用能力”是“學(xué)用字詞句”練習(xí)編寫(xiě)的中心原則和特點(diǎn)。但是一道道練習(xí)題之間的聯(lián)系由于文本平面性所固有的束縛、版面的限制以及編者思維的跳躍性，呈現(xiàn)出一種文本所特有的跳躍性空白。由于能力限制，這種空白對(duì)于一些執(zhí)教者來(lái)說(shuō)恰恰是備課過(guò)程中認(rèn)識(shí)水平難以逾越的一道鴻溝，客觀上造成了教師因?yàn)閷?duì)文本理解的不到位而割裂項(xiàng)目訓(xùn)練之間的內(nèi)在聯(lián)系的、單一化的、以完成練習(xí)題為目的的課堂教學(xué)。以至于整節(jié)課呈現(xiàn)出一種“做題—核對(duì)答案—再做題—再核對(duì)答案”的單向循環(huán)，課堂效率極低。

二、 教師課堂教學(xué)的理解性缺失

1.對(duì)學(xué)生現(xiàn)有知識(shí)經(jīng)驗(yàn)、生活經(jīng)驗(yàn)了解不深入，盲目設(shè)定教學(xué)目標(biāo)

這種在日常閱讀教學(xué)中時(shí)常出現(xiàn)的問(wèn)題，在看似簡(jiǎn)單的綜合練習(xí)課上仍舊出現(xiàn)，并且執(zhí)教者往往不自知，甚至因?yàn)閷W(xué)生的“不配合”而郁悶不已。比如，第三冊(cè)練習(xí)8“看圖寫(xiě)話·踢足球”，學(xué)生對(duì)此題目感到困難絕不是因?yàn)樗麄儾粣?ài)這項(xiàng)運(yùn)動(dòng)，也不是因?yàn)樗麄儾粯?lè)于表達(dá)，而是在于他們?nèi)狈?duì)這項(xiàng)運(yùn)動(dòng)的深入了解（比如運(yùn)動(dòng)規(guī)則、專(zhuān)業(yè)術(shù)語(yǔ)之類(lèi)）。

2.缺乏細(xì)致的教學(xué)環(huán)節(jié)的預(yù)設(shè)與教學(xué)生成的處理機(jī)智，課堂教學(xué)受眾單一

貌似平實(shí)的練習(xí)，實(shí)則環(huán)環(huán)相扣，“牽扯”眾多。如果教師課前缺乏細(xì)致全面的預(yù)設(shè)，或在課堂上缺乏教學(xué)生成的處理機(jī)智，一不小心，課堂教學(xué)就會(huì)陷入被動(dòng)。最終的處理結(jié)果，要么是教者抓過(guò)一名優(yōu)秀生迅速“解決問(wèn)題”，使課堂成為“展示臺(tái)”“一言堂”；要么是教者“虛晃一槍”，以回家作業(yè)的形式“下放”權(quán)力給家長(zhǎng)，讓該項(xiàng)練習(xí)的課堂教學(xué)流于形式。這最終將造成學(xué)生對(duì)該練習(xí)存在的漠視，極大地浪費(fèi)了教材資源。

三、 學(xué)生認(rèn)知局限造成的淺嘗輒止的缺憾

充滿(mǎn)兒童情趣的“學(xué)用字詞句”練習(xí)閃爍著“人文的關(guān)愛(ài)”，形成了學(xué)生“上手快，丟得更快”的尷尬。學(xué)生在輕易地成功面前迷失了自我，最終對(duì)于“學(xué)用字詞句”的學(xué)習(xí)往往只是蜻蜓點(diǎn)水般淺嘗輒止，既不深入也不持久，更遑論融會(huì)貫通，進(jìn)而養(yǎng)成習(xí)慣了。

【教學(xué)策略】

一、“補(bǔ)白”，勾連項(xiàng)目，構(gòu)建綜合學(xué)習(xí)板塊

針對(duì)教材的“跳躍性空白”，一方面我們應(yīng)該內(nèi)延相關(guān)概念，以期勾連各練習(xí)項(xiàng)目，達(dá)到引導(dǎo)學(xué)生領(lǐng)會(huì)其內(nèi)在聯(lián)系的目的；另一方面我們還應(yīng)該適度拓展，努力構(gòu)建綜合學(xué)習(xí)的板塊，讓每次“學(xué)用字詞句”練習(xí)的效益最大化。

教師要仔細(xì)研讀課標(biāo)、教參，廣泛查閱相關(guān)文獻(xiàn)資料，深入了解編者意圖，理解教材編纂的目的，適度“補(bǔ)白”，為教材的二度開(kāi)發(fā)奠定堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)和正確的教學(xué)理念。

比如，第二冊(cè)練習(xí)8“看圖涂色·填詞·說(shuō)話”，如果僅僅就題做題，那么勢(shì)必割裂該項(xiàng)三個(gè)練習(xí)題之間的內(nèi)在聯(lián)系，達(dá)不到1+1>2的預(yù)期目標(biāo)。事實(shí)上，現(xiàn)行絕大多數(shù)教案都拘泥于教材表面所呈現(xiàn)出來(lái)的對(duì)于涂色、寫(xiě)字的練習(xí)，使得課堂教學(xué)“一片繁榮”。隨后又花費(fèi)大量時(shí)間在學(xué)生說(shuō)話訓(xùn)練上，卻又因?yàn)閷W(xué)生們各自根據(jù)圖意編故事而難以逐一輔導(dǎo)，造成課堂上只有個(gè)別優(yōu)秀生展示，絕大多數(shù)學(xué)生無(wú)話可說(shuō)的現(xiàn)象。實(shí)際上，這恰恰是對(duì)本題按照“字—詞—句—段”逐層遞進(jìn)的訓(xùn)練意圖視若無(wú)睹的體現(xiàn)。

新課標(biāo)要求第一學(xué)段的學(xué)生“樂(lè)于運(yùn)用閱讀和生活中學(xué)到的詞語(yǔ)”“能較完整地講述小故事”。顯而易見(jiàn)，對(duì)于剛剛開(kāi)始學(xué)習(xí)規(guī)范表達(dá)的一年級(jí)學(xué)生，應(yīng)該以漢字的使用、詞語(yǔ)的積累、完整句式的訓(xùn)練為主，幫助他們初步樹(shù)立講述完整故事的意識(shí)，并且做到“見(jiàn)好就收”。因此，面對(duì)完整體現(xiàn)了“表象—字—詞—句—段”的語(yǔ)言形成過(guò)程的本篇教材，以下的教學(xué)設(shè)計(jì)，尤其是第三、第四層次的“補(bǔ)白”對(duì)于低年段學(xué)生不可或缺。

第一層次：涂色。激發(fā)興趣的同時(shí)，自然地引導(dǎo)出學(xué)生細(xì)致的前期觀察，解決對(duì)事物的認(rèn)知問(wèn)題，為后面深入的語(yǔ)言表達(dá)做準(zhǔn)備。

第二層次：寫(xiě)字。在學(xué)生學(xué)會(huì)運(yùn)用文字表達(dá)確切意思的同時(shí)，繼續(xù)練習(xí)端端正正地寫(xiě)字。

第三層次：擴(kuò)詞。讓學(xué)生在“填上合適的詞”的練習(xí)中，積累能夠把句子說(shuō)具體的短語(yǔ)，初步形成運(yùn)用形容詞能夠使事物描述得更加具體、生動(dòng)的意識(shí)，為進(jìn)一步的學(xué)習(xí)奠定基礎(chǔ)。

第四層次：照樣子補(bǔ)充句子、組合句子。由詞到句，滲透使用形容詞以及把句子說(shuō)完整的概念，培養(yǎng)學(xué)生的語(yǔ)感，并且解決后面講故事的素材問(wèn)題。

第五層次：編故事。由句到段到篇，讓學(xué)生運(yùn)用剛剛練習(xí)所得的詞句連綴成話，并且要言之有物。

層層推進(jìn)、環(huán)環(huán)相扣的教學(xué)設(shè)計(jì)，很好地解決了學(xué)生語(yǔ)言表達(dá)的材料問(wèn)題，使本節(jié)課清晰地呈現(xiàn)出“積累—簡(jiǎn)單運(yùn)用—綜合性運(yùn)用”的層次感、梯度感，這足以引起我們對(duì)教材“留白”處的深思，以及如何“補(bǔ)白”的探究熱情。

二、對(duì)話，巧設(shè)訓(xùn)練坡度，教學(xué)目標(biāo)多元化

備課期間，教師認(rèn)真與文本、編者及學(xué)生對(duì)話尤為重要。只有心中有教材、有編者、有學(xué)生，課堂教學(xué)才能立體起來(lái)，呈現(xiàn)出科學(xué)訓(xùn)練所特有的坡度，也正因?yàn)橛辛诉@樣的多邊對(duì)話，學(xué)生的語(yǔ)言學(xué)習(xí)才會(huì)呈現(xiàn)出異彩紛呈的多元化局面。

1.充分了解學(xué)生現(xiàn)有的知識(shí)經(jīng)驗(yàn)及生活經(jīng)驗(yàn)，及時(shí)解決學(xué)生面臨的“無(wú)米之炊”的尷尬。

仍以第三冊(cè)練習(xí)8“看圖寫(xiě)話·踢足球”為例，教師教學(xué)時(shí)立足于學(xué)生知識(shí)經(jīng)驗(yàn)、生活經(jīng)驗(yàn)的欠缺，以適量提供詞語(yǔ)及句式的方式彌補(bǔ)了學(xué)生關(guān)于足球運(yùn)動(dòng)的“知識(shí)盲點(diǎn)”和學(xué)生較少接觸正式的足球運(yùn)動(dòng)造成的“生活盲點(diǎn)”，以及由于該運(yùn)動(dòng)過(guò)快造成的學(xué)生難以觀察、描摹細(xì)致的“習(xí)作盲點(diǎn)”。教師適度地指導(dǎo)學(xué)生觀察、敘述的視角，有效地解決了學(xué)生描寫(xiě)場(chǎng)面時(shí)敘述混亂無(wú)序的毛病。

教師提供關(guān)于足球運(yùn)動(dòng)的詞、句：

生龍活虎、汗流浹背

傳、帶、飛奔而來(lái)、抬腿、繃直腳背、飛起一腳、劃過(guò)一道優(yōu)美的弧線

伸出雙手、向上躍起、奮不顧身

緊張、狂喜、歡呼雀躍、噓聲一片、一蹦三尺高

有的……有的……還有的……

一會(huì)兒……一會(huì)兒……

可以想見(jiàn)，在這樣的精心設(shè)計(jì)中，雖然每個(gè)學(xué)生最終的說(shuō)話內(nèi)容不盡相同，但是他們的語(yǔ)言能力都得到了穩(wěn)步提高，而且基礎(chǔ)扎實(shí)，很難出現(xiàn)語(yǔ)言不通，或者無(wú)話可說(shuō)的狀況。這種多元化的學(xué)習(xí)目標(biāo)，才能夠真正達(dá)成編者編撰“學(xué)用字詞句”練習(xí)的目的，達(dá)到優(yōu)化課堂教學(xué)效率的目標(biāo)。

2.教學(xué)預(yù)設(shè)力求全面，細(xì)化教學(xué)實(shí)施步驟，面向全體落實(shí)訓(xùn)練

蘇教版教材中“學(xué)用字詞句”的練習(xí)尤其彰顯了立足于“生本”的特色。比如，第三冊(cè)練習(xí)1-3的“音序查字法”，第四冊(cè)練習(xí)1-4的“部首查字法”，以及第四冊(cè)練習(xí)8、第五冊(cè)練習(xí)6的“選擇正確讀音”，第五冊(cè)練習(xí)2的“選擇正確義項(xiàng)”，還有第六冊(cè)練習(xí)4的“學(xué)習(xí)查詞典”等。這一系列教給學(xué)生如何使用工具書(shū)的方法的練習(xí)，淺顯、實(shí)用，讓學(xué)生在最短的時(shí)間里學(xué)會(huì)了最基本的語(yǔ)文學(xué)習(xí)技能，并能為學(xué)生終身發(fā)展服務(wù)。

但是實(shí)際操作中，卻不乏把該項(xiàng)練習(xí)以回家作業(yè)的形式“布置”給家長(zhǎng)的“聰明”教師。于是，學(xué)生們形形的不正確、不科學(xué)的查閱工具書(shū)的方法層出不窮，最后以家長(zhǎng)埋怨、教師暴怒、學(xué)生迷糊結(jié)束。若問(wèn)教師：為什么會(huì)把“權(quán)力下放”？答曰：這又不難，但是在課堂上，卻很難整齊劃一地教學(xué)，不如“化整為零”，還節(jié)省時(shí)間呢。

這樣的答案歸根結(jié)底是教師的惰性在作怪。如果我們動(dòng)動(dòng)腦筋，那么就不難把使用工具書(shū)的方法劃分為幾個(gè)清晰的步驟，進(jìn)而利用課堂時(shí)間，由扶到放，給予學(xué)生充分的實(shí)際操作時(shí)間，有效引導(dǎo)學(xué)生學(xué)習(xí)正確的使用方法和思維模式，為今后的學(xué)習(xí)奠定堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

當(dāng)然，僅僅如此是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的，教師還要長(zhǎng)期堅(jiān)持，以布置預(yù)習(xí)作業(yè)的方式要求學(xué)生查字典、選讀音、選義項(xiàng)，從而引導(dǎo)學(xué)生熟練掌握使用工具書(shū)的方法。長(zhǎng)此以往，學(xué)生就能形成良好的使用工具書(shū)的習(xí)慣，從長(zhǎng)遠(yuǎn)看也奠定了學(xué)生全面發(fā)展和終身發(fā)展的基礎(chǔ)。

事實(shí)上，不僅是如何使用工具書(shū)，對(duì)于語(yǔ)法學(xué)習(xí)的引導(dǎo)更需要教師的“垂直”指導(dǎo)和堅(jiān)持。比如，第四冊(cè)練習(xí)7、第六冊(cè)練習(xí)8的“學(xué)用標(biāo)點(diǎn)符號(hào)”，第七冊(cè)練習(xí)1的“避免重復(fù)”等練習(xí)，課堂上的朗讀、討論和交流，可以有效地讓學(xué)生在探究的過(guò)程中明白，不同的標(biāo)點(diǎn)符號(hào)表示不同的停頓與語(yǔ)氣，前后句子的主語(yǔ)應(yīng)該避免重復(fù)，正確使用代詞可以有效精煉語(yǔ)句等。教師如果能夠堅(jiān)持在課堂教學(xué)中不著痕跡地通過(guò)有重點(diǎn)地推敲一些標(biāo)點(diǎn)符號(hào)來(lái)指導(dǎo)朗讀，指導(dǎo)學(xué)生聯(lián)系上下文理解一些關(guān)鍵性的代詞的含義，必能為學(xué)生以后正確使用標(biāo)點(diǎn)符號(hào)、流暢行文奠定基礎(chǔ)。相對(duì)的，蜻蜓點(diǎn)水式的讀過(guò)，由優(yōu)秀生代替全體學(xué)生完成教師眼中簡(jiǎn)單至極的練習(xí)的做法，是肯定不能達(dá)到這樣的效果的。

三、“留白”，創(chuàng)設(shè)情境實(shí)踐，培養(yǎng)良好的學(xué)習(xí)習(xí)慣

基于“語(yǔ)文課程的多重功能和奠基作用”，我們需要在課堂教學(xué)之外留下“空白”，創(chuàng)設(shè)情境給予學(xué)生大量的實(shí)踐語(yǔ)言的機(jī)會(huì)，最終達(dá)到培養(yǎng)學(xué)生良好學(xué)習(xí)習(xí)慣的目的。

“學(xué)用字詞句”練習(xí)中有一批旨在拓寬學(xué)生視野，引導(dǎo)學(xué)生了解自然、了解祖國(guó)、了解生活，從而達(dá)到學(xué)語(yǔ)文、用語(yǔ)文的目的的題目。對(duì)于這樣一批訓(xùn)練題，我們不能急于在課堂上結(jié)束任務(wù)，應(yīng)該適度“留白”，給學(xué)生留下實(shí)踐和持續(xù)發(fā)展的空間。

比如，第三冊(cè)練習(xí)6的“小小氣象站”，在學(xué)完相應(yīng)的符號(hào)含義之后，我們可以在黑板的一角長(zhǎng)期開(kāi)辟一個(gè)“小小氣象員”專(zhuān)欄，按學(xué)號(hào)每天更新，引導(dǎo)學(xué)生觀察生活，知道氣象預(yù)報(bào)的含義及意義，懂得一些氣象專(zhuān)業(yè)術(shù)語(yǔ)，對(duì)一些地理名詞形成初步概念。

篇2

關(guān)鍵詞：西班牙語(yǔ)句子連詞;虛擬式;非虛擬式

中圖分類(lèi)號(hào)：G648 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B文章編號(hào)：1672-1578（2014）13-0008-01

實(shí)例分析講解

1.使用虛擬式的情況

此次研究使用虛擬式的情況，所涉及的連詞主要包括：como; como si ; por si(acaso); a no ser que/ a menos que/ excepto que/ salvo que; en caso de que; a condición de que/ con la condición de que/ con tal de que; con que/ a poco que/ a nada que; a cambio de que; siempre que/ mientras

1.1 Como si (ni que) 譯為：仿佛好像Como si 無(wú)論主句動(dòng)詞是什么時(shí)態(tài)，從句中表未完成時(shí)用虛擬式過(guò)去未完成時(shí); 完成時(shí)用虛擬式過(guò)去完成時(shí)。請(qǐng)看以下虛擬式未完成時(shí)(Ega,Egb)和虛擬式完成時(shí)(Egc,Egd)的例子。

Eg a : La mujer trata a los jóvenes como si fuera sus propios hijos. 譯為：這女人對(duì)待這些年輕人像對(duì)待自己孩子一樣（此時(shí)的時(shí)值相當(dāng)于陳述式現(xiàn)在時(shí)）

b. Cuando entraron, no nos saludaron , como si no nos conocieran. （此時(shí)的時(shí)值相當(dāng)于陳述式過(guò)去未完成時(shí)）譯為：當(dāng)他們進(jìn)來(lái)時(shí)，沒(méi)有和我們打招呼，仿佛不認(rèn)識(shí)我們。

Egc: Nos contó lo ocurrido en detalle como si lo hubiera visto con sus propios ojos. (時(shí)值相當(dāng)于簡(jiǎn)單過(guò)去時(shí)) 譯為：他給我們很細(xì)致的講述了所發(fā)生的一些仿佛他親眼看到了。

d: Por qué gritas tanto a los presentes como si ellos te hubieran ofendido.(時(shí)值相當(dāng)于一般現(xiàn)在時(shí)) 譯為：你為什么沖在場(chǎng)的人大聲喊叫仿佛他們侮辱了你一樣。

1.2 como /si，譯為"如果"

Eg: Como/si llegues tarde, no te esperaré. 譯為：如果你到晚了，我就不等你了。

1.3. Por si / por si acaso 譯為：以防萬(wàn)一

Eg: Lleva el paraguas por si llueve .

Lleva el paraguas por si lloviera.

這兩句都可譯為：你帶著傘以防萬(wàn)一下雨。但有所不同的是llover這個(gè)詞的虛擬式時(shí)態(tài)。用Llueve虛擬式現(xiàn)在時(shí)說(shuō)話人傾向于很有可能下雨，而lloviera虛擬式過(guò)去未完成時(shí)說(shuō)話人則傾向于下雨的可能性很小。

1.4 A no ser que/ a menos que/ excepto que/ salvo que 譯為：除非

Eg: Iremos de excursión a menos que haga mal tiempo.

我們將要去遠(yuǎn)足除非天氣不好。

1.5 En caso de que 譯為：倘若

Eg: Creo que llegaré pronto, pero en caso de que no sea así, no me esperes.

我認(rèn)為我很快會(huì)到的，但是倘若不是這樣，你不要等我。

1.6 Con que/ a poco que/ a nada que 譯為：雖然，盡管

Eg: Con que estudies un poco, aprobarás.

雖然他學(xué)的不多，但是他能過(guò)。

1.7 A cambio de que 譯為：換取

Eg: Te ayudaré con el trabajo a cambio de que me invites a cenar.

我?guī)湍愎ぷ鳎ㄒ該Q?。┠阏?qǐng)我吃飯。

1.8 A condición de que/ con la condición de que/ con tal de que 譯為：只要

Eg: Te dejaré conducir a condición de que te calles.

只要你閉上嘴我就讓你開(kāi)車(chē)。

1.9 Siempre que/ mientras 譯為:只要

Eg: Siempre que tengas dinero, tendrás amigos.

只要你有錢(qián)，你就會(huì)有朋。主要注意的是，"siempre que" 除了當(dāng)"只要"講時(shí)用虛擬式，"Siempre que"還可譯為"每次，" 無(wú)需使用虛擬式。如: Siempre que vengo a verte, estás ocupado. 每次我來(lái)看你，你都在忙。

可以看得出來(lái)，除了como si 與虛擬式連用作為固定搭配外，其余的連詞與虛擬式連用所表達(dá)的含義都是未來(lái)時(shí)，還未發(fā)生的。

2.使用非虛擬式的情況

2.1 Con/ sólo con/ con sólo + infinitivo(動(dòng)詞原形) 譯為：雖然

Eg: Con estudiar un poco, aprobarás el examen. 雖然學(xué)的不多，但你會(huì)通過(guò)考試的。

2.2 Que.....que (si......si no....)譯為：如果......否則(如果不)......

Eg: Que hace bueno, salimos, que no, nos quedamos en casa. 如果天氣不錯(cuò)，我們就出門(mén)，如果不好，就留在家里。這句話也可以用si......si no來(lái)說(shuō)，si hace bueno,salimos, si no，nos quedamos en casa.

參考文獻(xiàn)：

篇3

【關(guān)鍵詞】拓展訓(xùn)練；體育教學(xué)；應(yīng)用實(shí)踐；效果

為了加快現(xiàn)代化教育的進(jìn)程，體育教學(xué)也成為了現(xiàn)代化教育中的一個(gè)重點(diǎn)，它能夠更好的培養(yǎng)人才，引導(dǎo)他們向全面發(fā)展的方向前進(jìn)。高職體育教學(xué)的發(fā)展也跟著時(shí)代的進(jìn)程不斷地前進(jìn)，為了讓高職的學(xué)生能夠更好的適應(yīng)社會(huì)，讓他們能夠提高自身的實(shí)踐能力，高職院校就利用有多種教學(xué)模式的體育教學(xué)，來(lái)激發(fā)學(xué)生自身能力。

現(xiàn)在有一些職業(yè)學(xué)院體育教學(xué)就已經(jīng)走在了前面，引入了拓展訓(xùn)練。拓展訓(xùn)練這個(gè)項(xiàng)目不僅僅是一個(gè)體育的教學(xué)方式，它還能夠調(diào)動(dòng)學(xué)生的思考能力。拓展訓(xùn)練的設(shè)計(jì)都是具有趣味性的，通過(guò)大家的合作來(lái)完成，例如其中的穿越火線、三米跳等活動(dòng)項(xiàng)目既有對(duì)自身的能力訓(xùn)練，還有對(duì)社交能力和合作信任等方面進(jìn)行訓(xùn)練，通過(guò)拓展訓(xùn)練這種非常富有刺激性的教學(xué)方式，能夠引起學(xué)生的強(qiáng)烈的欲望。不但能夠激發(fā)學(xué)生對(duì)體育鍛煉的興趣，還能夠讓學(xué)生的體質(zhì)真正得到改善。

一、拓展訓(xùn)練在高職體育教學(xué)中應(yīng)用的必要性

（一）滿(mǎn)足現(xiàn)代教育發(fā)展的需要

現(xiàn)代的教育方式和教育的要求已經(jīng)變化，和傳統(tǒng)的教育相比較，現(xiàn)代教育更注重以人為本，并且教育的發(fā)展方向更人性化和個(gè)性化，教育要求學(xué)生“德智體美勞”全面發(fā)展。在體育發(fā)展中拓展訓(xùn)練是一個(gè)非常有效的活動(dòng)，它具有一定的挑戰(zhàn)性，通過(guò)實(shí)際的模擬，讓學(xué)生能夠親身經(jīng)歷，引導(dǎo)學(xué)生自己經(jīng)歷磨難并克服困難，培養(yǎng)自己的思維能力、激發(fā)自己的潛能，學(xué)會(huì)團(tuán)結(jié)合作等。在拓展訓(xùn)練的活動(dòng)中，教師的角色就是一個(gè)導(dǎo)演，學(xué)生就是演員。在這個(gè)過(guò)程中，就不再是傳統(tǒng)體育教學(xué)的模式，老師在上面示范動(dòng)作，學(xué)生就依照葫蘆畫(huà)瓢。拓展訓(xùn)練更加注重的是：學(xué)生自身的學(xué)習(xí)和體驗(yàn)，通過(guò)這樣的教學(xué)方式才能夠真正的激發(fā)學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣，才能夠讓他們表現(xiàn)出自身的特點(diǎn)。

（二）高職體育教學(xué)改革需要拓展訓(xùn)練的融入

在原來(lái)的體育教學(xué)的定義中，體育教學(xué)內(nèi)容主要以體育基本的知識(shí)和身體訓(xùn)練為主，針對(duì)于心靈上的教育根本沒(méi)有進(jìn)行深入的教學(xué)，不能全面均衡的培養(yǎng)學(xué)生。隨著素質(zhì)教育不斷地推行，現(xiàn)在對(duì)學(xué)生的培養(yǎng)要求變得越來(lái)越高，在這種前提下，現(xiàn)在高職院校中就對(duì)現(xiàn)在的體育教學(xué)改革進(jìn)行不斷的深入研究和拓展。拓展訓(xùn)練就能夠很好的將原來(lái)傳統(tǒng)的體育教學(xué)方式和有趣的體育活動(dòng)鏈接起來(lái)，不但能夠從身體訓(xùn)練上提高學(xué)生的素質(zhì)，而且還能夠從心里上提高學(xué)生的素質(zhì)，因此拓展訓(xùn)練必須要融入高職體育教學(xué)的改革中。

二、拓展訓(xùn)練在高職體育教學(xué)中的具體應(yīng)用方式

在高職體育教學(xué)素質(zhì)拓展訓(xùn)練中，訓(xùn)練的不僅僅只是身體方面，更多的是心理素質(zhì)方面的訓(xùn)練。在身體素質(zhì)方面的訓(xùn)練主要就是訓(xùn)練學(xué)生的耐力、爆發(fā)力和協(xié)調(diào)能力等，在心理素質(zhì)方面就不僅僅是涉及到個(gè)人，相應(yīng)的還有自身的團(tuán)隊(duì)。

（一）身體素質(zhì)訓(xùn)練

1.耐力訓(xùn)練

耐力訓(xùn)練是鍛煉一個(gè)人意志最好的方法。體育教學(xué)中的拓展訓(xùn)練和傳統(tǒng)的體育教學(xué)中的耐力訓(xùn)練相比更加的有趣。傳統(tǒng)的耐力訓(xùn)練就是讓學(xué)生進(jìn)行長(zhǎng)跑訓(xùn)練，通過(guò)這樣的方式既可以提高學(xué)生的心肺功能還能夠讓腿部肌肉得到良好的訓(xùn)練，利用這樣的方法來(lái)訓(xùn)練學(xué)生的耐力。在拓展訓(xùn)練中：耐力訓(xùn)練不只是結(jié)合了傳統(tǒng)的耐力訓(xùn)練方式而且還結(jié)合了學(xué)生自身的特色，比如耐力訓(xùn)練可以通過(guò)接龍比賽的方式進(jìn)行，將學(xué)生分成幾個(gè)組，在組與組之間進(jìn)行一個(gè)接力比賽，比賽的時(shí)長(zhǎng)要有一個(gè)科學(xué)的度，PK的形式讓耐力訓(xùn)練更加的有意思。在學(xué)生都能夠適應(yīng)以后，在進(jìn)行別的方式，可以在長(zhǎng)跑的過(guò)程中加入一些新的元素，比如中間添加手臂的動(dòng)作。

2.協(xié)調(diào)性訓(xùn)練

協(xié)調(diào)性的訓(xùn)練是一個(gè)非?；A(chǔ)的訓(xùn)練，因?yàn)樵诟黜?xiàng)體育運(yùn)動(dòng)中，都必須要具有一定的協(xié)調(diào)性。協(xié)調(diào)性的訓(xùn)練可以采用比較常用的一些方式，例如跳繩，可以花式跳繩、也可以進(jìn)行多人跳，或者是通過(guò)穿越火線的方式來(lái)訓(xùn)練協(xié)調(diào)性。用這兩種方式都能夠讓學(xué)生發(fā)揮充分的想象能力，而且還能夠激發(fā)學(xué)生的興趣，使課堂的學(xué)習(xí)氣氛變得活躍；不但如此在穿越火線中還需要團(tuán)隊(duì)的配合，這樣能夠培養(yǎng)學(xué)生的團(tuán)隊(duì)配合能力。

（二）心里素質(zhì)訓(xùn)練

在拓展訓(xùn)練中，針對(duì)于心里素質(zhì)訓(xùn)練不僅僅是訓(xùn)練個(gè)人自身的心里素質(zhì)，還可以訓(xùn)練團(tuán)隊(duì)的團(tuán)結(jié)力和整個(gè)團(tuán)隊(duì)人員的心里素質(zhì)。心里素質(zhì)訓(xùn)練能夠讓個(gè)人提高自身的信心，能夠從容的面對(duì)以前自己有可能不敢應(yīng)對(duì)的挑戰(zhàn)，從交流和信任、心里素質(zhì)等多方面促進(jìn)學(xué)生和團(tuán)隊(duì)的關(guān)系，激發(fā)團(tuán)隊(duì)的力量。心里素質(zhì)訓(xùn)練在高職的體育教學(xué)中用得最多的是場(chǎng)地訓(xùn)練，其中在場(chǎng)地上進(jìn)行的一個(gè)項(xiàng)目非常能夠考驗(yàn)心里素質(zhì)，那就是三米跳。要跳的同學(xué)要面背著要接住她的同學(xué)向后倒，這就在訓(xùn)練自身的心里素質(zhì)和是否信任團(tuán)隊(duì)，團(tuán)隊(duì)的力量。

在高職體育拓展訓(xùn)練教學(xué)將心里素質(zhì)訓(xùn)練融合到每一節(jié)課中，例如同舟共濟(jì)的游戲就能很好的培養(yǎng)學(xué)生的協(xié)調(diào)性和團(tuán)結(jié)協(xié)作能力，所有的同學(xué)都踩著連接的報(bào)紙，大家要齊心協(xié)力才能夠真正的能夠?qū)ⅰ皥?bào)紙”舟運(yùn)行起來(lái)，還可以采用其他的活動(dòng)培養(yǎng)學(xué)生的的能力。

三、總結(jié)

綜上所述：本文通過(guò)舉例說(shuō)明了拓展訓(xùn)練不但非常具有挑戰(zhàn)能力，而且還非常的有趣，在高職教學(xué)中應(yīng)用后能夠從耐力、協(xié)調(diào)能力、團(tuán)結(jié)能力等方面提高學(xué)生的素質(zhì)，能夠促進(jìn)學(xué)生的全面發(fā)展。

參考文獻(xiàn)：

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[2]劉曉明.拓展訓(xùn)練在高職體育教學(xué)中的作用分析[J].華章，2013，13：241

[3]張叢林.探析拓展訓(xùn)練在高職體育教學(xué)中的作用[J].學(xué)園，2013，19：65-66

篇4

【關(guān)鍵詞】游戲訓(xùn)練;戲劇表演教學(xué);戲劇表演能力

中圖分類(lèi)號(hào)：J812 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1007-0125（2015）01-0020-01

藝術(shù)來(lái)源于生活，戲劇由實(shí)際生活改編而成，展現(xiàn)著生活中的各種細(xì)節(jié)和故事。單一的“灌輸式”教學(xué)模式無(wú)法使學(xué)生深刻理解戲劇中的內(nèi)涵，同時(shí)也會(huì)影響學(xué)生的戲劇表演學(xué)習(xí)熱情，而游戲教學(xué)法在戲劇表演教學(xué)中的應(yīng)用，能夠在充分激發(fā)學(xué)生戲劇表演學(xué)習(xí)興趣的基礎(chǔ)上，使學(xué)生能夠在輕松、愉快的氛圍中掌握戲劇表演的技巧。

一、游戲訓(xùn)練在戲劇表演教學(xué)中應(yīng)用的意義

游戲訓(xùn)練在戲劇表演教學(xué)中的應(yīng)用，能夠有效激發(fā)學(xué)生的戲劇表演學(xué)習(xí)興趣，提升學(xué)生的戲劇表演綜合素質(zhì)，對(duì)學(xué)生的戲劇表演學(xué)習(xí)具有積極的影響。

（一）激發(fā)學(xué)生的戲劇表演學(xué)習(xí)興趣。游戲訓(xùn)練在戲劇表演教學(xué)中的應(yīng)用，通過(guò)精彩而有趣的游戲設(shè)計(jì)，能夠有效豐富戲劇表演教學(xué)的內(nèi)容，激發(fā)學(xué)生的戲劇表演學(xué)習(xí)興趣和學(xué)習(xí)熱情，讓學(xué)生積極、主動(dòng)地參與到戲劇表演學(xué)習(xí)的過(guò)程當(dāng)中，使戲劇表演教學(xué)產(chǎn)生“事半功倍”的教學(xué)效果。

（二）提升學(xué)生的戲劇表演綜合素質(zhì)。游戲訓(xùn)練在戲劇表演教學(xué)中的應(yīng)用，能夠使沒(méi)有戲劇表演學(xué)習(xí)基礎(chǔ)的學(xué)生也愛(ài)上戲劇表演學(xué)習(xí)，通過(guò)游戲快速突破戲劇表演的心理障礙。同時(shí)，游戲訓(xùn)練在戲劇表演教學(xué)中的應(yīng)用，也能夠使學(xué)生在潛移默化中，形成一定的觀察能力和創(chuàng)造能力，提升學(xué)生的戲劇表演綜合素質(zhì)。

二、游戲訓(xùn)練在戲劇表演教學(xué)中應(yīng)用的策略

游戲訓(xùn)練在戲劇表演教學(xué)中的應(yīng)用，可以通過(guò)靈活設(shè)計(jì)游戲情境，激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)興趣，合理借助游戲活動(dòng)，提升學(xué)生表演能力等方式來(lái)開(kāi)展。

（一）靈活設(shè)計(jì)游戲情境，激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)興趣。靈活的游戲情境設(shè)計(jì)能夠有效激發(fā)學(xué)生的戲劇表演學(xué)習(xí)熱情，使學(xué)生快速進(jìn)入到游戲情境當(dāng)中，感受戲劇表演的豐富魅力和樂(lè)趣，對(duì)戲劇表演中的人物產(chǎn)生濃厚的情感[1]。

例如在指導(dǎo)學(xué)生學(xué)習(xí)“京劇”這一項(xiàng)內(nèi)容時(shí)，教師可以首先借助多媒體等信息技術(shù)軟件，為學(xué)生展示不同的臉譜，組織學(xué)生進(jìn)行臉譜的搶答游戲活動(dòng)。這種游戲活動(dòng)能夠快速調(diào)動(dòng)學(xué)生的“京劇”藝術(shù)學(xué)習(xí)熱情，營(yíng)造良好的課堂教學(xué)氛圍。同時(shí)，這種游戲教學(xué)方式也能夠有效檢驗(yàn)學(xué)生對(duì)“京劇”的掌握程度，為教學(xué)活動(dòng)的深入開(kāi)展奠定良好的基礎(chǔ)，使教師能夠根據(jù)學(xué)生的實(shí)際知識(shí)掌握能力，靈活開(kāi)展“京劇”教學(xué)。此外，教師可以借助游戲訓(xùn)練方法，為學(xué)生播放一小段京劇視頻，組織學(xué)生自由選擇“凈”、“旦”等角色進(jìn)行表演。教師可以為學(xué)生提供化妝等服務(wù)，增加課堂教學(xué)的樂(lè)趣，展現(xiàn)學(xué)生的學(xué)習(xí)質(zhì)量。

（二）合理借助游戲活動(dòng)，提升學(xué)生表演能力。戲劇和游戲在英語(yǔ)中都可以用“play”來(lái)表達(dá)，足可以看出，戲劇和游戲具有一定的共通性[2]。很多學(xué)生由于沒(méi)有一定的戲劇表演學(xué)習(xí)基礎(chǔ)，所以對(duì)戲劇表演的認(rèn)知程度較低。教師可以借助游戲訓(xùn)練方法，指導(dǎo)學(xué)生進(jìn)行戲劇表演學(xué)習(xí)。

在戲劇表演教學(xué)的過(guò)程中，教師要注意把握游戲訓(xùn)練的“趣味性”原則，恰當(dāng)選擇游戲，將學(xué)生的注意力吸引到游戲活動(dòng)當(dāng)中，并在游戲參與的過(guò)程中，使學(xué)生獲得更多的情感體驗(yàn)[3]。比如在指導(dǎo)學(xué)生對(duì)“小品表演”這一項(xiàng)內(nèi)容學(xué)習(xí)完成之后，教師可以通過(guò)組織學(xué)生進(jìn)行小組合作，自行設(shè)計(jì)和編創(chuàng)游戲的方式，將學(xué)生所學(xué)習(xí)的戲劇表演知識(shí)和實(shí)踐活動(dòng)相結(jié)合。在學(xué)生設(shè)計(jì)和表演完成之后，由教師和學(xué)生共同評(píng)選出最富有內(nèi)涵和趣味的小品，以及小品表演中最有表現(xiàn)能力的學(xué)生，給予鼓勵(lì)和嘉獎(jiǎng)，增加游戲訓(xùn)練的趣味性和競(jìng)技性。這種方式能夠使學(xué)生感受到小組合作的樂(lè)趣，在合作中感受自編自創(chuàng)小品的趣味，使學(xué)生獲得更多的情感體驗(yàn)，提升學(xué)生的戲劇表演實(shí)踐能力。

三、結(jié)語(yǔ)

游戲訓(xùn)練在戲劇表演教學(xué)中的應(yīng)用，能夠激發(fā)學(xué)生的戲劇表演學(xué)習(xí)興趣和學(xué)習(xí)熱情，并使學(xué)生積極、主動(dòng)地參與到戲劇表演學(xué)習(xí)的過(guò)程當(dāng)中，快速突破學(xué)生在戲劇表演中的心理障礙，并使學(xué)生形成一定的觀察能力和創(chuàng)造能力，提升學(xué)生的戲劇表演綜合素質(zhì)，不斷提升戲劇表演教學(xué)的價(jià)值和效果，為學(xué)生未來(lái)的學(xué)習(xí)和發(fā)展奠定良好的基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)：

[1]王.淺析山藝戲劇影視學(xué)院表演教學(xué)中的教學(xué)特色――從戲曲、說(shuō)唱元素到戲劇表演[J].戲劇叢刊，2013，（10）：123-124.

[2]王彥波.聚焦教學(xué)本源特色深化教學(xué)方法改革――關(guān)于戲劇表演課程教學(xué)方法改革的思考[J].藝術(shù)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，（07）：156-157.

[3]張騰.傳統(tǒng)?發(fā)展?創(chuàng)新――反思教學(xué)工作評(píng)價(jià)背景下的軍藝戲劇表演教學(xué)[J].藝術(shù)學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，（10）：167-168.

篇5

[關(guān)鍵詞] 阿司匹林；氯吡格雷；糖尿病合并腦梗塞

[中圖分類(lèi)號(hào)] R587.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1672-4062（2016）10（a）-0095-02

糖尿病是一種比較常見(jiàn)的代謝性疾病，往往容易出現(xiàn)諸多并發(fā)癥，尤其是腦梗塞，不僅損害腦組織，在一定程度上還增加了病死率[1]。當(dāng)前臨床上在治療糖尿病合并腦梗塞時(shí)，主要為對(duì)癥治療，包括穩(wěn)定斑塊、降糖、營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)、降脂以及改善循環(huán)等，但是療效較差。因此，該文探討了糖尿病合并腦梗塞治療中運(yùn)用雙聯(lián)抗血小板聚集療法的臨床價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇該院2015年5月―2016年5月期間收治的82例糖尿病合并腦梗塞患者為研究對(duì)象，糖尿病病程2～15年，平均（8.2±4.5）年，年齡42～79歲，平均年齡為（62.2±10.9）歲，其中45例為男性、37例為女性，按照數(shù)字隨機(jī)法分組，每組41例。入選標(biāo)準(zhǔn)：①有糖尿病病史；②符合腦梗塞診斷標(biāo)準(zhǔn)，且經(jīng)顱內(nèi)MRI或者CT檢查確診；③年齡48 h者；②合并肝腎功能不全、惡性腫瘤、昏迷者；③藥物禁忌證者。兩組的病程、性別等資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

1.2 方法

1.2.1 對(duì)照組 對(duì)照組患者入院后，主要接受常規(guī)治療，包括清除自由基、營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)、改善腦循環(huán)、穩(wěn)定斑塊、降脂、降糖以及營(yíng)養(yǎng)支持等，對(duì)于合并水腫的患者，再運(yùn)用甘露醇治療，并且在此基礎(chǔ)上，再運(yùn)用阿司匹林聯(lián)合治療，即口服阿司匹林腸溶片（國(guó)藥準(zhǔn)字H43021814，規(guī)格50 mg），100 mg/次，3次/d，15 d為1個(gè)療程，連續(xù)治療2個(gè)療程，共30 d。

1.2.2 觀察組 觀察組在對(duì)照組治療的基礎(chǔ)上，再運(yùn)用氯吡格雷聯(lián)合治療，即硫酸氫氯吡格雷片（注冊(cè)證號(hào)H20100750，規(guī)格75 mg）口服，75 mg/次，1次/d，1個(gè)療程為15 d，連續(xù)治療30 d，共2個(gè)療程。

1.3 觀察指標(biāo)

于治療前后運(yùn)用神經(jīng)功能缺損評(píng)分（NIHSS）分別評(píng)價(jià)兩組的神經(jīng)功能缺損情況，得分越低，說(shuō)明神經(jīng)功能損傷越小。同時(shí)，觀察兩組的血小板參數(shù)，包括血小板比率（P-LCR）、血小板分布寬（PDW）、平均血小板體積（MPV）以及血小板（PLT）。

1.4 療效判定標(biāo)準(zhǔn)

根據(jù)NIHSS評(píng)分情況將治療效果分為四個(gè)等級(jí)：①基本痊愈。病殘程度為0級(jí)，且NIHSS評(píng)分較治療前下降90%～100%；②顯效。病殘程度為1～3級(jí)，且與治療前相比，NIHSS評(píng)分下降46%～89%；③有效。NIHSS評(píng)分較治療前下降18%～45%；④無(wú)效。與治療前相比，NIHSS評(píng)分下降

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

運(yùn)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件分析該次研究數(shù)據(jù)，其中計(jì)數(shù)資料采用百分率（%）表示，運(yùn)用χ2檢驗(yàn)組間治療有效率對(duì)比，采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示計(jì)量資料，運(yùn)用t對(duì)組間NIHSS、PLT、MPV等比較，P

2 結(jié)果

2.1 兩組NIHSS評(píng)分治療前后比較

兩組NIHSS評(píng)分治療前對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；治療后，相比較對(duì)照組而言，觀察組的NIHSS評(píng)分明顯下降，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

2.2 兩組治療效果對(duì)比

與對(duì)照組相比，觀察組的治療有效率較高，組間對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

2.3 兩組血小板參數(shù)比較

兩組的P-LCR、PDW、MPV以及PLT等血小板參數(shù)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

3 討論

通常情況下，糖尿病合并腦梗塞患者往往容易出現(xiàn)彌漫性血管病變，再加上高血糖容易增加乳酸生成，增高血黏度，使腦水腫加重，從而升高致死率和致殘率，所以在控制血糖的基礎(chǔ)上，抗血小板治療極其重要[3]。阿司匹林是比較常見(jiàn)的一種抗血小板聚集藥物，在糖尿病心腦血管疾病的治療和預(yù)防中得到廣泛運(yùn)用，其作用機(jī)制主要為通過(guò)對(duì)TXA2生成進(jìn)行抑制，對(duì)血小板生成環(huán)氧酶進(jìn)行抑制，避免體內(nèi)形成前列腺素，從而發(fā)揮抗血小板聚集功效[4]。氯吡格雷作為新型的一種抗血小板聚集藥物，其作用機(jī)制包括幾點(diǎn)：①通過(guò)選擇性結(jié)合ADP受體，對(duì)血小板聚集進(jìn)行抑制，從而避免形成血栓；②通過(guò)將ADP誘發(fā)的血小板活化擴(kuò)增阻斷，對(duì)其他激動(dòng)劑誘發(fā)的血小板聚集進(jìn)行抑制；③使血小板膜糖蛋白的表達(dá)降低，使血液流變功能得到改善，對(duì)使腦部缺氧、缺血狀態(tài)得到改善[5]；④使動(dòng)脈粥樣硬化斑塊面積縮小，使血清C反應(yīng)蛋白濃度降低；⑤使動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的組成成分發(fā)生改變，增加斑塊的穩(wěn)定性[6]。同時(shí)，阿司匹林還可以對(duì)前列腺素進(jìn)行抑制，減輕機(jī)體炎癥反應(yīng)，發(fā)揮抗炎效果，對(duì)組胺、緩激肽釋放進(jìn)行抑制，減輕機(jī)體疼痛感，并且與氯吡格雷聯(lián)合運(yùn)用，能夠減輕神經(jīng)功能缺損，改善臨床癥狀，從而達(dá)到治療目的[7]。

綜上所述，在糖尿病合并腦梗塞的臨床治療中，運(yùn)用雙聯(lián)抗血小板聚集療法，不僅可以使治療效果提高，還能對(duì)血小板聚集進(jìn)行抑制，改善患者神經(jīng)功能，具有一定的推廣價(jià)值。

[參考文獻(xiàn)]

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篇6

［關(guān)鍵詞］ 聚凝胺試驗(yàn)； 微柱凝膠試驗(yàn)； 不規(guī)則抗體； 交叉配合試驗(yàn)

［中圖分類(lèi)號(hào)］ R446.6 ［文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼］ B ［文章編號(hào)］ 1671-7562（2011）01-0093-03

doi:10.3969/j.issn.1671-7562.2011.01.省略

傳統(tǒng)的鹽水介質(zhì)法只能檢出相對(duì)分子質(zhì)量大的IgM類(lèi)抗體，對(duì)相對(duì)分子質(zhì)量小的不規(guī)則抗體（主要是IgG類(lèi)抗體）往往造成漏檢。手工聚凝胺試驗(yàn)對(duì)Kell系統(tǒng)外的大多數(shù)血型系統(tǒng)均適用，且操作簡(jiǎn)便、快速、經(jīng)濟(jì)［1］，作為臨床輸血配合試驗(yàn)正在被國(guó)內(nèi)許多基層醫(yī)院所采用。微柱凝膠試驗(yàn)靈敏度高，結(jié)果直觀，能定量自動(dòng)化操作，最大限度減少人為誤差［2-4］。為確保臨床輸血安全，有效防止急、慢性溶血性輸血反應(yīng)的發(fā)生，我院根據(jù)《臨床輸血技術(shù)規(guī)范》，對(duì)有妊娠史、輸血史和短期內(nèi)需大量輸血的患者進(jìn)行不規(guī)則抗體篩選，再根據(jù)篩選結(jié)果選擇微柱凝膠試驗(yàn)或聚凝胺試驗(yàn)進(jìn)行交叉配血，收到良好效果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源

受血者系本院2010年1月至2010年6月住院和門(mén)診輸血患者共1 367例，其中男743例，女624例，年齡1 d～89歲。供血者血液全部來(lái)自江蘇省血液中心。

1.2 試劑

紅細(xì)胞血型抗體篩選細(xì)胞（瑞士達(dá)亞美公司產(chǎn)品），聚凝胺試劑盒（臺(tái)灣Baso公司產(chǎn)品），單克隆抗A、B標(biāo)準(zhǔn)血清（長(zhǎng)春博德生物技術(shù)有限責(zé)任公司），抗-D試劑（上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司），微柱凝膠卡及配套離心機(jī)、孵育箱（瑞士達(dá)亞美公司產(chǎn)品）。

1.3 方法

對(duì)有妊娠史、輸血史和短期內(nèi)需大量輸血的患者均進(jìn)行不規(guī)則抗體篩選，不規(guī)則抗體陰性患者采用聚凝胺試驗(yàn)進(jìn)行交叉配血，陽(yáng)性患者采用微柱凝膠試驗(yàn)進(jìn)行交叉配血。

1.3.1 不規(guī)則抗體篩查 采用微柱凝膠試驗(yàn)進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查，即將3種濃度為0.8%的普細(xì)胞懸液各50 μl加入微柱凝膠卡反應(yīng)室，再各加入血清 25 μl，37 ℃孵育15 min，離心10 min。觀察凝集情況，紅細(xì)胞全部沉積在反應(yīng)室底部判為陰性，懸浮于凝膠表面或散在分布于凝膠中則為陽(yáng)性。

1.3.2 交叉配合試驗(yàn) （1） 微柱凝膠試驗(yàn)：首先在微柱凝膠卡上注明受血者、供血者姓名及主、次側(cè),然后制備受血者、供血者0.8%～1.0%紅細(xì)胞懸液。主側(cè)加入50 μl供者細(xì)胞及25 μl受者血清,次側(cè)加入50 μl受者細(xì)胞及25 μl供者血清，37 ℃孵育15 min,離心10 min。結(jié)果判斷同上。（2） 聚凝胺試驗(yàn)：首先在試管上注明受血者、供血者姓名及主、次側(cè),主側(cè)加入受血者血清2滴及供血者3%紅細(xì)胞懸液1滴，次側(cè)加入供血者血清2滴及受血者3%紅細(xì)胞懸液1滴，然后主、次側(cè)管各加低離子溶液0.6 ml，混勻，室溫靜置1 min后加入聚凝胺溶液2滴，混勻，室溫靜置15 s，離心15 s，傾去上清液，輕輕搖動(dòng)試管，若觀察到紅細(xì)胞凝集，則加入2滴復(fù)懸液，輕輕混勻。觀察結(jié)果，紅細(xì)胞仍有凝集者判為陽(yáng)性，紅細(xì)胞均勻懸浮于溶液中則判為陰性。

2 結(jié) 果

1 367例患者中不規(guī)則抗體陽(yáng)性者12例，采用微柱凝膠試驗(yàn)、聚凝胺試驗(yàn)同時(shí)做交叉配血試驗(yàn)。聚凝胺法交叉配血試驗(yàn)不相合7例，相合5例，相合率為41.7%;微柱凝膠法交叉配血試驗(yàn)不相合9例，相合3例，相合率為25%。由此可見(jiàn)，微柱凝膠法交叉配血試驗(yàn)不相合率高于聚凝胺法，即微柱凝膠法敏感性高于聚凝胺法。因此，不規(guī)則抗體陽(yáng)性患者采用微柱凝膠法進(jìn)行交叉配血提高了輸血安全性。12例陽(yáng)性標(biāo)本的具體交叉配血結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 12例抗體篩選陽(yáng)性標(biāo)本兩種配血方法進(jìn)行交叉配血的結(jié)果

3 討 論

不規(guī)則抗體是指抗A、抗B以外的血型抗體［5-6］，多為IgG類(lèi)抗體,主要是經(jīng)輸血或妊娠等免疫刺激而產(chǎn)生，在鹽水介質(zhì)中IgG類(lèi)抗體不能引起紅細(xì)胞凝集，只能使相應(yīng)紅細(xì)胞致敏。IgG類(lèi)不規(guī)則抗體可引起受血者溶血性輸血反應(yīng)和新生兒溶血?。?］，對(duì)患者健康造成嚴(yán)重危害，甚至威脅生命。本研究對(duì)1 367例患者進(jìn)行了不規(guī)則抗體篩查，陽(yáng)性12例，陽(yáng)性患者采用聚凝胺法交叉配血，相合率為41.7%（5/12），微柱凝膠法交叉配血相合率25%（3/12），交叉配合試驗(yàn)聚凝胺法相合率高于微柱凝膠法。對(duì)于微柱凝膠法交叉配血不相合的樣本，再與其它獻(xiàn)血者進(jìn)行交叉配血，直至找到相合的供者。

聚凝胺試驗(yàn)對(duì)結(jié)果的觀察是從凝集到無(wú)凝集的過(guò)程，對(duì)試管振搖的力度和解聚的時(shí)間需要嚴(yán)格掌握，弱凝集的標(biāo)本由于用力振搖或放置時(shí)間稍長(zhǎng)凝集也會(huì)消失。因此，聚凝胺法雖能檢出IgG類(lèi)不完全抗體，但其本質(zhì)仍是介質(zhì)法，且操作難以標(biāo)準(zhǔn)化、影響因素多、缺乏完善的質(zhì)控體系，易造成假陰性結(jié)果，敏感性低于微柱凝膠試驗(yàn)［8］。微柱凝膠試驗(yàn)在操作程序上更加標(biāo)準(zhǔn)化，加樣量精確到微升，孵育時(shí)間、離心速度和時(shí)間都進(jìn)行了標(biāo)準(zhǔn)化設(shè)置，克服了許多人為因素造成的誤差，因而大大提高了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性，且具有靈敏度高、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)［9］。因此，使用微柱凝膠法交叉配血能夠減少輸血反應(yīng)的發(fā)生，保證臨床輸血安全。

在實(shí)際工作中建議選用微柱凝膠試驗(yàn)進(jìn)行受血者不規(guī)則抗體篩選，不規(guī)則抗體陰性患者采用聚凝胺法進(jìn)行交叉配合試驗(yàn)，陽(yáng)性患者采用微柱凝膠法進(jìn)行交叉配合試驗(yàn)。根據(jù)患者情況選擇不同方法交叉配血既能更加快速、高效地為臨床提供安全的血液制品，減輕患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，同時(shí)能夠確?；颊叩妮斞踩?。

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篇7

2.陽(yáng)光透過(guò)淡薄的云層，照耀著白茫茫的大地，反射出銀色的光芒，耀得人眼睛發(fā)花。

3.寒風(fēng)起，思念意；立冬至，長(zhǎng)相憶；遙相寄，祝福你；變天氣，多注意；冷添衣，顧身體；愿朋友，甜如蜜，書(shū)美麗。立冬快樂(lè)。

4.這個(gè)立冬的季節(jié)，我的祝福浸潤(rùn)每一個(gè)時(shí)光，耕耘出一方思念的熱土，我把牽掛的情懷播種，用關(guān)懷澆灌，盛開(kāi)出兩朵美麗的花。一朵霜花綻放好運(yùn)的笑臉，一朵雪花迎來(lái)如意的腳步，此刻我把這兩朵美麗的花送給你，愿好運(yùn)隨著你，如意伴著你。

5.白雪紛紛何所似?撒鹽空中差可擬。——謝安《詠雪聯(lián)句》

6.又到立冬，飄零的落葉旋轉(zhuǎn)隨風(fēng)，冰雪將大地封凍，愿你依然快樂(lè)輕松，帶著好運(yùn)攜手成功，在我的祝福聲里感受溫暖向前沖，把身體保重，圓幸福美夢(mèng)。

7.立冬啦，祝你：好運(yùn)像雪花紛紛而落，煩惱像落葉深深埋藏，幸福像冰塊堅(jiān)不可摧，壓力如蛇娃已然冬眠，情誼如松柏長(zhǎng)青不萎，日子像炭火暖暖融融！

8.天冷了，他不會(huì)給你擁抱，你只能自已添外套。

9.風(fēng)沙吹過(guò)，凍雨飄落，冬天的旋律誰(shuí)載了我的相思?看這一盞盞燈，我獨(dú)自烤著火，潔白的落幕在發(fā)稍，是癡情卷生的愁素。

10.立冬到了，天氣漸涼，加強(qiáng)鍛煉，身體健康。今晚到明天：晴到少云，東北風(fēng)到級(jí)，氣溫到度，濕度到%。汕頭氣象臺(tái)日晚發(fā)。

11.品一杯香茶：思念朋友；聽(tīng)一首老歌：回憶朋友；發(fā)一條：聯(lián)絡(luò)朋友；道一聲問(wèn)候：最近好嗎？傳一份關(guān)懷：天冷保重；送一個(gè)祝福；立冬快樂(lè)！

12.今日立冬。一年又一年，一個(gè)節(jié)氣又一節(jié)氣。但其實(shí)又不是簡(jiǎn)單的重復(fù)，因?yàn)榻駮r(shí)今日再不會(huì)有。唯有珍惜每個(gè)一天！

13.天冷了，我卻凍的像個(gè)小丑，沒(méi)人給暖手。

14.不要忘記冬天的理想，那是你在春天的愿望。

15.遠(yuǎn)處巍峨的群山，在陽(yáng)光照映下，披上了金黃色的外衣，顯得格外美麗。

16.墻角數(shù)枝梅，凌寒獨(dú)自開(kāi)?！醢彩睹坊ā?/p>

17.又是寒冷立冬時(shí)，冒著凜冽寒風(fēng)吹，頂著鵝毛大雪飛，忍著超常低溫凍，拎著冷靜頭腦奔，沖著時(shí)間比賽跑，趕著手機(jī)結(jié)冰前，接著友情信息念。朋友，又立冬了，穿厚點(diǎn)可別凍著！

18.眨眼立冬降臨，忍不住發(fā)條提醒你：天冷多注意，添衣保暖防病襲；保持好心情，莫要煩躁壞情緒；有空時(shí)多聯(lián)系，溫馨帶去溫暖！祝身康體健，快樂(lè)如意，好運(yùn)繼續(xù)！

篇8

關(guān)鍵詞 全血直接擴(kuò)增; 線性指數(shù)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng); 焦磷酸測(cè)序; 基因多態(tài)性; 酒精代謝

1 引 言

隨著基因組學(xué)及后基因組學(xué)的發(fā)展，人們意識(shí)到基因多態(tài)性在闡明疾病的發(fā)生和發(fā)展、毒物的易感性與耐受性、疾病臨床表現(xiàn)的多樣性以及對(duì)藥物治療的反應(yīng)上都起著重要作用，而單核苷酸多態(tài)性是目前最受關(guān)注的一類(lèi)多態(tài)性。

焦磷酸測(cè)序技術(shù)是通過(guò)核苷酸和單鏈模板結(jié)合后釋放焦磷酸引發(fā)酶級(jí)聯(lián)反應(yīng)，促使熒光素發(fā)光并進(jìn)行檢測(cè)的一種核酸測(cè)序技術(shù)[1～3]，用于基因多態(tài)性檢測(cè)^[4]、微生物分型^[5]、基因甲基化檢測(cè)^[6]等領(lǐng)域，尤其是在大規(guī)模DNA測(cè)序中^[7]的應(yīng)用，使測(cè)序技術(shù)發(fā)生了革命性變化。但是目前焦測(cè)序的單鏈模板制備主要采用固相微球法^[8]，該方法操作步驟繁瑣且效率較低; 使用生物素標(biāo)記引物、鏈親和素包被微球增加了檢測(cè)的成本; 同時(shí)，單鏈制備過(guò)程中容易引起樣品的交叉污染，以上不足極大地妨礙了焦測(cè)序技術(shù)的臨床應(yīng)用^[9]。

為了解決單鏈模板制備問(wèn)題，可以采取不對(duì)稱(chēng)PCR直接產(chǎn)生單鏈產(chǎn)物^[10]，但常規(guī)不對(duì)稱(chēng)PCR方法擴(kuò)增單鏈的效率低，無(wú)法得到廣泛使用。線性指數(shù)PCR（Linear-after-the exponential-polymerase chain Rreaction， LATE-PCR）^[11]在不對(duì)稱(chēng)PCR的基礎(chǔ)上，通過(guò)優(yōu)化引物濃度和Tm值，可獲得接近對(duì)稱(chēng)PCR的擴(kuò)增效率，產(chǎn)生大量單鏈DNA產(chǎn)物，能夠滿(mǎn)足基于單鏈核酸序列的雜交、實(shí)時(shí)熒光PCR等反應(yīng)的需要^[12]。但是LATE-PCR引物設(shè)計(jì)要求嚴(yán)格，且隨著PCR的進(jìn)行，非限制性引物與擴(kuò)增產(chǎn)物產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng)，若擴(kuò)增片段較長(zhǎng)則得到的單鏈DNA產(chǎn)率會(huì)降低。改進(jìn)的LATE-PCR方法（Improved LATE-PCR， imLATE-PCR）^[13]彌補(bǔ)了LATE-PCR的不足，增加非限制性引物長(zhǎng)度，減少限制性引物長(zhǎng)度，使兩者的Tm差值更大，引物的設(shè)計(jì)相較于LATE-PCR更為寬泛，產(chǎn)生擴(kuò)增片段長(zhǎng)度也更長(zhǎng)，擴(kuò)大了不對(duì)稱(chēng)PCR的實(shí)際使用范圍。

為了提高基因檢測(cè)速度，降低樣本污染的可能性，本研究將全血直接擴(kuò)增和imLATE-PCR技術(shù)相結(jié)合，建立了基于普通rTaq聚合酶和“高pH緩沖液（HpH Buffer）”的全血imLATE-PCR擴(kuò)增方法。本方法具有以下優(yōu)點(diǎn)：（1）檢測(cè)速度快，操作簡(jiǎn)便。采用全血直接作為擴(kuò)增單鏈DNA測(cè)序的模板，省去了DNA提取和單鏈模板制備兩個(gè)繁瑣的步驟，極大提高了檢測(cè)速度，簡(jiǎn)化了操作過(guò)程，縮短了檢測(cè)時(shí)間; （2）成本低，經(jīng)濟(jì)環(huán)保。無(wú)需制備DNA單鏈可以避免使用生物素修飾引物和磁性微球，無(wú)需DNA提取可以省去大量有機(jī)試劑和實(shí)驗(yàn)耗材，降低了成本; （3）污染少。避免了DNA提取和模板制備過(guò)程中反復(fù)打開(kāi)管蓋進(jìn)行加液、移液等操作，減少了平行測(cè)多份樣品時(shí)交叉污染的可能性; （4）靈敏度高。實(shí)驗(yàn)表明， 0.1 μL全血即采用指尖取血即可得到較好的測(cè)序結(jié)果，應(yīng)用于臨床檢測(cè)方便、快速^[14]。采用本方法對(duì)酒精代謝相關(guān)基因ADH1B、ADH1C進(jìn)行了基因多態(tài)性焦測(cè)序檢測(cè)，用于臨床快速評(píng)估人體酒精代謝能力，對(duì)于預(yù)防與飲酒行為相關(guān)的多種疾病，以及常規(guī)體檢監(jiān)測(cè)有重要意義。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 儀器與試劑

EDC-10基因擴(kuò)增儀（東勝創(chuàng)新生物科技有限公司）; 小型焦測(cè)序儀（日本Hitachi公司）。

三磷酸腺苷硫酸化酶（ATP-sulfurylase）和Klenow聚合酶為實(shí)驗(yàn)室自表達(dá); rTaq DNA聚合酶、500 bp DNA Ladder marker（日本Takara公司）; 聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、QuantiLum重組熒光素酶（美國(guó)Promega公司）; 腺苷三磷酸雙磷酶-Ⅶ（Apyrase-Ⅶ）、腺苷-5′-磷酸硫酸（Adenosine 5′-phosphosulfate， APS）、牛血清蛋白（Bovine serum albumin， BSA）（美國(guó)Sigma公司）; Sepharose Beads（美國(guó)GE Healthcare公司）; α-硫化三磷酸腺苷 （dATPαS）、三磷酸脫氧胞苷酸（dCTP）、三磷酸脫氧鳥(niǎo)苷酸（dGTP）、三磷酸脫氧胸腺苷酸（dTTP）（美國(guó)Amersham Pharmacia公司）; 其它試劑均為分析純; 實(shí)驗(yàn)用水均為滅菌二次蒸餾水。

所有引物由上海Invitrogen公司合成，具體引物名稱(chēng)及序列見(jiàn)表1。

2.2 實(shí)驗(yàn)方法

2.2.1 imLATE-PCR引物設(shè)計(jì) 本研究選取與酒精代謝相關(guān)的乙醇脫氫酶（ADH）基因中中國(guó)人較常見(jiàn)位點(diǎn)進(jìn)行擴(kuò)增。擴(kuò)增引物使用Primer 5.0軟件進(jìn)行設(shè)計(jì)，引物設(shè)計(jì)原則：TmE-TmL≥5 ℃; TmA-TmE≤13 ℃^[13]（TmE為過(guò)量引物Tm值，TmL為限制性引物Tm值，TmA為擴(kuò)增產(chǎn)物Tm值）。Tm值計(jì)算采用OligoAnalyzer 3.1軟件（地址：http：///analyzer/Applications/OligoAnalyzer/）。本實(shí)驗(yàn)中所用到的PCR擴(kuò)增引物見(jiàn)表1。

2.2.2 全血imLATE-PCR擴(kuò)增 取抗凝外周全血樣本1μL（本研究中血樣均來(lái)源于總院受試者，受試者已簽署知情同意書(shū)并獲得倫理委員會(huì)同意。除特別說(shuō)明，抗凝血所用抗凝劑均為EDTA二鉀。）直接用于ADH1B、ADH1C位點(diǎn)的目的片段擴(kuò)增。PCR 反應(yīng)體系包括用于全血PCR 反應(yīng)的HpH Buffer（100 mmol/L Tris-HCl，50 mmol/L KCl，pH 9.3～9.5）5.35 μL，2 mmol/L Mg2+，dNTPs 100 μmol/L，過(guò)量引物（PE）1 μmol/L，限制性引物（PL）0.1 μmol/L，Taq 酶2.5 U，適當(dāng)PCR添加劑（10% BSA和5% 吐溫20），全血模板1 μL，加水補(bǔ)充至50 μL。ADH1B位點(diǎn)PCR反應(yīng)條件：3個(gè)循環(huán)（94 ℃， 3 min; 55 ℃， 3 min）; 65個(gè)循環(huán)（90 ℃， 10 s; 53 ℃， 20 s; 72 ℃， 20 s）。ADH1C位點(diǎn)PCR反應(yīng)條件： 94 ℃預(yù)變性3 min; 65個(gè)循環(huán)（90 ℃，10 s; 55 ℃， 20 s; 72 ℃， 20 s）。

2.2.3 單鏈擴(kuò)增產(chǎn)物處理以及焦磷酸測(cè)序 imLATE-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物除了大量單鏈DNA可用做測(cè)序模板，還含有過(guò)量的dNTPs、延伸產(chǎn)生的PPi、部分未完全延伸的產(chǎn)物等，這些成分都會(huì)對(duì)后續(xù)的焦測(cè)序反應(yīng)造成影響。因此，擴(kuò)增產(chǎn)物需經(jīng)過(guò)處理后方可進(jìn)行焦測(cè)序反應(yīng)。本研究使用自制的焦測(cè)序反應(yīng)液^[15]對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行處理，主要成分為0.1 mol/L Tris-HAc（pH 7.7），2 mmol/L EDTA，10 mmol/L Mg（Ac）2， 0.1% BSA，1 mmol/L DTT，80 μmol/L APS，0.4 mmol/L D-蟲(chóng)螢光素，60 U/mL ATP-sulfurylase，1.6 U/mL Apyrase-Ⅶ，18 U/mL Klenow聚合酶，適量熒光素酶。反應(yīng)液中的APS可以和延伸產(chǎn)生的PPi作用生成ATP，過(guò)量的dNTPs和少量的ATP可以在Aprase-Ⅶ作用下發(fā)生降解，從而減少對(duì)焦測(cè)序反應(yīng)的影響^[10]。具體步驟為：取3 μL imLATE-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，加入自制焦測(cè)序反應(yīng)液，置于小型焦磷酸測(cè)序儀中，室溫反應(yīng)5 min; 加入10 pmol測(cè)序引物，常溫下退火5 min，再循環(huán)加入dATPαS， dCTP， dTTP 和dGTP 進(jìn)行焦測(cè)序反應(yīng)。測(cè)序引物如下： ADH1B： 5′-ATGGTGGCTGTAGGAATCTGTC-3′， ADH1C： 5′-TTTCGTTTGAAGTCATCGGTC-3′。

3 結(jié)果與討論

3.1 PCR擴(kuò)增體系對(duì)全血imLATE-PCR的影響

以全血代替DNA作為模板，其中的免疫球蛋白G、血紅蛋白和乳鐵蛋白等成分會(huì)抑制PCR反應(yīng)，且常用血液抗凝劑EDTA或肝素也會(huì)抑制PCR反應(yīng)。所以，采用全血代替DNA作為PCR反應(yīng)模板時(shí)，需要調(diào)整PCR反應(yīng)體系。本實(shí)驗(yàn)室之前報(bào)道的“HpH Buffer”體系可以很大程度上減少全血成分對(duì)PCR擴(kuò)增的影響，主要由于高pH值的緩沖體系可以使蛋白質(zhì)表面帶負(fù)電，抑制其與帶負(fù)電的基因組DNA相互作用，從而降低對(duì)PCR反應(yīng)的抑制作用^[16]。

3.2 全血imLATE-PCR擴(kuò)增血液模板量考察

考察了上述方法在進(jìn)行全血imLATE-PCR擴(kuò)增時(shí)，0.05， 0.10， 0.50， 1.00和2.00 μL 5個(gè)模板加入量對(duì)擴(kuò)增和測(cè)序結(jié)果的影響。結(jié)果表明，50 μL擴(kuò)增體系中加入0.10～2.00 μL的EDTA抗凝全血作為模板進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)處理后進(jìn)行焦測(cè)序，均可得到良好的焦測(cè)序結(jié)果（圖2），擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測(cè)平均單堿基信號(hào)值分別為0.629、0.794、0.879、0.883，均可進(jìn)行準(zhǔn)確的SNP分型。由此證明，本方法僅需0.10 μL全血樣本就可對(duì)乙醇脫氫酶的兩個(gè)SNP位點(diǎn)進(jìn)行焦測(cè)序檢測(cè)并分型，大大減少了對(duì)病人的創(chuàng)傷。

3.3 乙醇脫氫酶ADH1B、ADH1C基因SNP位點(diǎn)檢測(cè)

對(duì)收集到的24例臨床血樣的乙醇脫氫酶基因ADH1B、ADH1C的多態(tài)性檢測(cè)結(jié)果（圖3）顯示，本方法測(cè)序結(jié)果較好，測(cè)序信號(hào)強(qiáng)度高，可以進(jìn)行準(zhǔn)確的SNP分型。24例樣本的基因型測(cè)序結(jié)果如表2所示，其中ADH1C位點(diǎn)AA純合型本實(shí)驗(yàn)中未檢測(cè)到，而NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)也顯示了亞洲人群中AA型基因頻率接近于0。為了驗(yàn)證測(cè)序結(jié)果的準(zhǔn)確性，從24例樣本中抽取10例進(jìn)行Sanger測(cè)序（圖4），結(jié)果與本實(shí)驗(yàn)的測(cè)序結(jié)果完全一致，證明了本方法的準(zhǔn)確性。ADH1B位點(diǎn)的AA型和ADH1C位點(diǎn)的GG型的患者酒精代謝能力較強(qiáng)，可加快乙醇向乙醛轉(zhuǎn)化的速度，易產(chǎn)生面紅、惡心等反應(yīng)，使飲酒者對(duì)乙醇耐受性降低，一定程度上可以避免產(chǎn)生酗酒或酒精依賴(lài)^[17]; ADH1B位點(diǎn)的GG純合型和ADH1C位點(diǎn)的

AA型患者的乙醇代謝能力較弱，易產(chǎn)生酒精依賴(lài)和酒精濫用，臨床應(yīng)建議減少酒精的攝入^[18]。

考察了臨床上常用的3種血液抗凝劑EDTA二鉀、檸檬酸鈉和肝素鈉對(duì)全血imLATE-PCR擴(kuò)增的影響。結(jié)果表明，3種抗凝劑對(duì)擴(kuò)增無(wú)明顯影響，均能夠得到準(zhǔn)確的測(cè)序結(jié)果。

3.4 本方法與傳統(tǒng)焦測(cè)序檢測(cè)方法的比較

表3是本實(shí)驗(yàn)方法和傳統(tǒng)焦磷酸測(cè)序檢測(cè)方法^{[20，21]}在耗時(shí)和成本方面的比較。本方法以全血作為模板省去了DNA提取過(guò)程，從收到樣本到得到PCR擴(kuò)增產(chǎn)物可在2 h內(nèi)完成，同時(shí)降低了樣品間交叉污染的可能性; 另外，高靈敏的焦磷酸測(cè)序在保證檢測(cè)準(zhǔn)確性的前提下僅使用0.10 μL全血或3.00 μL PCR產(chǎn)物，與傳統(tǒng)焦磷酸測(cè)序方法相比，成本下降了約40%。

a基因組DNA提取使用QIAamp DNA 血液提取試劑盒。b傳統(tǒng)PCR方法和全血imLATE-PCR方法均使用rTaq DNA 聚合酶。c傳統(tǒng)基于PCR的焦測(cè)序方法單鏈DNA制備使用鏈親和素瓊脂糖球珠。d傳統(tǒng)基于PCR的焦測(cè)序方法采用PyroMark Gold Q24 焦測(cè)序試劑。

a QIAamp DNA Blood Mini Kit （QIAGEN） was used for gDNA extraction. b rTaq DNA polymerase （TaKaRa） was used for conventional PCR and whole blood-imLATE-PCR. c Streptavidin Sepharose beads （GE Healthcare） were used for ssDNA preparation in conventional PCR-based pyrosequencing. d PyroMark Gold Q24 Reagents （QIAGEN） were used for conventional PCR-based pyrosequencing.

4 結(jié) 論

乙醇脫氫酶基因多態(tài)性導(dǎo)致乙醇在不同個(gè)體中的代謝速率不同。研究表明，急性酒精中毒、酒精性肝病、胰腺炎、心腦血管疾病、肝癌以及結(jié)直腸癌等一些癌癥都與乙醇脫氫酶基因多態(tài)性有關(guān)^{[17，18]}。乙醇對(duì)許多腫瘤是一種促癌劑，已有報(bào)道表明乙醇代謝酶基因多態(tài)性與腫瘤發(fā)生密切相關(guān)^[19]。所以檢測(cè)酒精代謝相關(guān)基因的多態(tài)性，評(píng)估人體酒精代謝能力，可用于預(yù)防與飲酒相關(guān)疾病，對(duì)人類(lèi)健康有著非常重要的意義。

本研究改進(jìn)了LATE-PCR方法，采用“HpH Buffer”以全血為模板直接擴(kuò)增，建立了全血imLATE-PCR方法，該方法具有檢測(cè)速度快、靈敏度高、污染少、成本較低等優(yōu)點(diǎn)，為臨床上檢測(cè)基因多態(tài)性和疾病早期預(yù)警提供了新手段。

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Genotyping of Alcohol Dehydrogenase Gene by Pyrosequencing

Coupled with Improved Linear-after-the-Exponential

Polymerase Chain Reaction Using Human

Whole Blood as Starting Material

XIANG Zheng1， LIU Yun-Long2， XING Xiao-Qing1， CHU Ya-Nan2， SONG Qin-Xin*1，2， ZHOU Guo-Hua1，2

1（Key Laboratory of Drug Quality Control and Pharmacovigilance of Ministry of Education，

China Pharmaceutical University， Nanjing 210009， China）

2（Department of Pharmacology， Jinling Hospital， Nanjing University School of Medicine， Nanjing 210002， China）

Abstract Pyrosequencing is one of the important genetic polymorphism detection methods currently， but the complicated pretreatment procedure limits its application in clinical test. To simplify the whole process of pyrosequencing， on the basis of the linear-after-the-exponential-polymerase chain reaction （LATE-PCR）， we improved the primer design method of LATE-PCR， increased the length and the concentration of the excess primer， applied direct amplification technology with whole blood， and established a whole blood-imLATE-PCR method based on common rTaq polymerase and “HpH Buffer” （High pH buffer）. The amplification system was optimized， and the influences of blood anticoagulant and the amount of whole blood template were investigated. The single stranded template for the pyrosequencing was obtained by PCR amplification using a single tube in one-step process， and the alcohol dehydrogenase gene polymorphisms of 24 clinical blood samples were then detected successfully. The results could be used to guide clinical individualized medication. The genotypes of ADH1B locus of 24 samples were 6 cases of AA homozygote， 14 cases of AG heterozygote， and 4 cases of GG homozygote. The genotypes of ADH1C were 20 cases of GG homozygote， 4 cases of AG heterozygote， and no cases of AA homozygote.

篇9

我期盼這場(chǎng)雪已經(jīng)好久，等待著它來(lái)滋潤(rùn)萬(wàn)物。說(shuō)實(shí)話，我對(duì)雪也是挑剔的，《詠雪聯(lián)句》中說(shuō)：“撒鹽空中差可擬，未若柳絮因風(fēng)起”。我想這可能是江南的雪，顯得細(xì)膩。南國(guó)的雪愛(ài)跟雨水湊熱鬧，落地即化，不能在人間長(zhǎng)駐。“燕山雪花大如席”或許描寫(xiě)的有些夸張，卻是北方那大學(xué)飛紛的真實(shí)寫(xiě)照。

這場(chǎng)雪來(lái)的干凈利落，毫無(wú)保留的把它積攢的能量釋放出來(lái)。這場(chǎng)雪是地地道道的北方雪。如北國(guó)風(fēng)光，千里冰封，萬(wàn)里雪飄，帶有一種豪放粗曠。雪來(lái)之時(shí)，天地如同一張白紙，不知怎地，也許太陽(yáng)不想?yún)⑴c這白色的盛宴，直到上午10點(diǎn)多，太陽(yáng)都沒(méi)有出現(xiàn)，被封殺在白茫茫里。

曾聽(tīng)一些長(zhǎng)輩說(shuō)過(guò)，冬至后，一九開(kāi)始，諺語(yǔ)說(shuō)“一九二九不出手，三九四九冰上走……”。雖然此時(shí)已不是一九二九，卻同樣寒冷?？墒窃诖笱╋w紛中，我并沒(méi)有感覺(jué)到無(wú)法出手的冷意，取而代之的是興奮。在雪中，我們奔跑與歡笑，在我們的歡聲笑語(yǔ)中，雪漸漸大了，雪花直直地快速墜落，鋪在地上，越來(lái)越密，越來(lái)越厚，像織成了一張大網(wǎng)?；氐浇淌?，平時(shí)最?lèi)?ài)聽(tīng)的生物課也無(wú)心眷戀，只是一直久久地注視窗外，希望不要停，越來(lái)越大，我不知道為什么這樣想，或許是想讓潔白的雪來(lái)豐富我的生活。

放學(xué)后，走在回家的路上，在微弱的燈光下，雪層反射出刺眼的白光，一閃一閃，接連不停，這時(shí)，我才能真正了解雪的晶瑩剔透，看著透明的雪，我甚至不忍去踩它們。

不管如何如何，我總覺(jué)得這次雪與其它時(shí)候不一樣，我也無(wú)法將全部都注入到這張紙上。