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篇1

關(guān)鍵詞： 美術(shù)教學(xué) 建構(gòu)主義教學(xué) 客觀主義教學(xué)

美術(shù)教育是素質(zhì)教育的一個(gè)重要的內(nèi)容，探究式的課堂教學(xué)，是以學(xué)生為中心、獨(dú)立或合作探究為主的教學(xué)方式。而傳統(tǒng)的教學(xué)模式則在一定程度上抑制了學(xué)生的創(chuàng)新意識(shí)、創(chuàng)造思維、創(chuàng)造能力，建構(gòu)主義理論則認(rèn)為知識(shí)是在人們與環(huán)境的交互的過(guò)程中獲得的，而不僅是通過(guò)教師的傳授獲得。本文將對(duì)傳統(tǒng)教學(xué)和探究教學(xué)做一對(duì)比，說(shuō)明建構(gòu)主義在教學(xué)中的重要性。

一、美術(shù)教學(xué)的特點(diǎn)

美術(shù)教學(xué)的特點(diǎn)是學(xué)生親自實(shí)踐、親手操作、手腦并用，它要求每個(gè)學(xué)生人人自己動(dòng)手，通過(guò)嘗試、操作、研究、調(diào)整、完成作品，并在這一過(guò)程中獲得經(jīng)驗(yàn)，這一教學(xué)過(guò)程與其他科目以文化知識(shí)的傳播為重點(diǎn)的教學(xué)模式有本質(zhì)區(qū)別，且在教學(xué)的過(guò)程中不能只停留在單純的技能操作的訓(xùn)練上，也要注重在操作的過(guò)程中對(duì)技術(shù)原理與方法的追思、學(xué)生對(duì)技能學(xué)習(xí)的體會(huì)，更注重技能訓(xùn)練中學(xué)生創(chuàng)新精神和實(shí)踐能力的培養(yǎng)，在整個(gè)教學(xué)過(guò)程中，使學(xué)生創(chuàng)新的養(yǎng)成、技能的掌握、態(tài)度的養(yǎng)成、能力的發(fā)展有機(jī)統(tǒng)一。

二、客觀主義教學(xué)和建構(gòu)主義教學(xué)的對(duì)比

教育理念決定教育手段和教學(xué)方法，目前的教育大體可分為兩大教學(xué)方式，客觀的教學(xué)方式和建構(gòu)的教學(xué)方式。

客觀的教學(xué)方式認(rèn)為世界是一種客觀存在，在教學(xué)過(guò)程中只要按照前人的經(jīng)驗(yàn)與客觀理論，對(duì)所存在的客觀結(jié)構(gòu)進(jìn)行再現(xiàn)與認(rèn)識(shí)就可以了，而客觀的東西是不變的，因此知識(shí)也是相對(duì)穩(wěn)定的。在這種教學(xué)模式下，以教師為中心，教學(xué)是教師將知識(shí)準(zhǔn)確無(wú)誤地傳遞給學(xué)生，學(xué)生從所聽(tīng)到的知識(shí)中獲得相同的理解。

而建構(gòu)主義學(xué)習(xí)理論認(rèn)為學(xué)習(xí)的過(guò)程是學(xué)習(xí)者主動(dòng)建構(gòu)知識(shí)的過(guò)程，“學(xué)習(xí)是建構(gòu)內(nèi)在心理表征的過(guò)程，學(xué)習(xí)者并不是把知識(shí)從外界搬到記憶中，而是以原有的經(jīng)驗(yàn)為基礎(chǔ)，通過(guò)與外界的相互作用來(lái)建構(gòu)新的理解”（D.J.Cunnighan，1991）。[1]因此，學(xué)習(xí)活動(dòng)不是由教師單純向?qū)W生傳遞知識(shí)，也不是學(xué)生被動(dòng)地接受信息的過(guò)程，而是學(xué)生憑借原有的知識(shí)和經(jīng)驗(yàn)，通過(guò)與外界的互動(dòng)，主動(dòng)地生成對(duì)該知識(shí)理解的過(guò)程。建構(gòu)主義學(xué)習(xí)理論對(duì)學(xué)生所學(xué)的知識(shí)也提出了新的理解，即知識(shí)不再是我們通常所認(rèn)為的通過(guò)課本、文字、圖片及教師的板書(shū)和演示等所進(jìn)行的對(duì)知識(shí)的傳授，而是一種理解和假設(shè)，學(xué)生對(duì)知識(shí)的理解并不存在唯一標(biāo)準(zhǔn)，而是依據(jù)自己的經(jīng)驗(yàn)背景，通過(guò)自己的方式進(jìn)行學(xué)習(xí)與理解。

兩種認(rèn)識(shí)論支持著不同的教育方式，傳統(tǒng)教學(xué)和探究教學(xué)，前者以教師為中心，強(qiáng)調(diào)間接經(jīng)驗(yàn)的作用，注重對(duì)已有文明的繼承，后者以學(xué)生為中心，強(qiáng)調(diào)直接經(jīng)驗(yàn)的作用，提倡親歷過(guò)程。實(shí)際上，它們各有長(zhǎng)處，關(guān)鍵在于教師如何取舍，具體對(duì)比見(jiàn)下表。

兩種教育方式的觀點(diǎn)、優(yōu)缺點(diǎn)對(duì)比

三、建構(gòu)主義教學(xué)的特點(diǎn)

基于上述觀點(diǎn)，建構(gòu)主義學(xué)習(xí)理論認(rèn)為學(xué)習(xí)應(yīng)具備五個(gè)基本特征：（1）學(xué)習(xí)的目標(biāo)：深層理解。學(xué)習(xí)目標(biāo)是獲得知識(shí)的意義。但目標(biāo)不是從外部由他人設(shè)定，而是形成于學(xué)習(xí)過(guò)程的內(nèi)部，由學(xué)習(xí)者自己設(shè)定。其深刻程度可以用幾個(gè)指標(biāo)刻畫(huà)：能否用自己的語(yǔ)言解釋、表述所學(xué)的知識(shí)；能否基于這一知識(shí)作出推論和預(yù)測(cè)，從而解釋相關(guān)現(xiàn)象；能否用這一知識(shí)解決變式問(wèn)題和綜合性問(wèn)題；能否將所學(xué)知識(shí)遷移到新問(wèn)題中去。（2）學(xué)習(xí)的內(nèi)部過(guò)程：通過(guò)思維構(gòu)造實(shí)現(xiàn)意義建構(gòu)。要求學(xué)習(xí)者在建構(gòu)自己的知識(shí)和理解過(guò)程中，不斷思考，不斷對(duì)各種信息進(jìn)行加工轉(zhuǎn)換，形成假設(shè)、推論和檢驗(yàn)。學(xué)習(xí)是累積性的，不是簡(jiǎn)單疊加和量變，而是深化、突破、超越和質(zhì)變。（3）學(xué)習(xí)的控制：自我監(jiān)控與反思性學(xué)習(xí)。學(xué)習(xí)者要不斷監(jiān)視和判斷自己的進(jìn)展及與目標(biāo)的差距，采用各種增進(jìn)理解和幫助思考的策略，并對(duì)學(xué)習(xí)活動(dòng)進(jìn)行階段反思和整體反思，修正學(xué)習(xí)策略。（4）學(xué)習(xí)的社會(huì)性：充分的溝通、合作和支持。（5）學(xué)習(xí)的物理情景：學(xué)習(xí)應(yīng)發(fā)生于真實(shí)的學(xué)習(xí)任務(wù)之中，強(qiáng)調(diào)多樣的、情景性的信息與有利的建構(gòu)工具。

篇2

【關(guān)鍵詞】 關(guān)節(jié)鏡； 自體肌腱； 同種異體肌腱； 交叉韌帶； 移植

前交叉韌帶（anterior cruciate ligament，ACL）和后交叉韌帶（posterior cruciate ligament，PCL）作為膝關(guān)節(jié)重要的穩(wěn)定結(jié)構(gòu)，一旦發(fā)生斷裂，將會(huì)導(dǎo)致膝關(guān)節(jié)不穩(wěn)定而繼發(fā)半月板損傷以及關(guān)節(jié)軟骨的損傷，進(jìn)而影響關(guān)節(jié)功能[1]。交叉韌帶發(fā)生斷裂難以自愈，因此，應(yīng)及時(shí)修復(fù)重建。近年來(lái)，微創(chuàng)技術(shù)不斷發(fā)展，利用關(guān)節(jié)鏡重建交叉韌帶備受推崇。常用的重建移植物分為三大類，包括自體移植物、同種異體移植物及人工韌帶，臨床中以自體組織的應(yīng)用較為常見(jiàn)，而同種異體移植也被越來(lái)越多的學(xué)者所接受和認(rèn)可[2-3]。2008年6月-2012年6月，本院共收治膝關(guān)節(jié)交叉韌帶斷裂85例患者，分別采用自體移植和同種異體移植物于關(guān)節(jié)鏡下進(jìn)行膝關(guān)節(jié)交叉韌帶重建，回顧性分析兩種重建移植物的治療效果，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 研究對(duì)象為2008年6月-2012年6月本院收治的膝關(guān)節(jié)交叉韌帶斷裂85例患者，均符合如下入選標(biāo)準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）有明確的膝關(guān)節(jié)外傷史，經(jīng)體格檢查、MRI檢查或關(guān)節(jié)鏡下診斷為交叉韌帶斷裂。（2）單側(cè)交叉韌帶損傷，對(duì)側(cè)下肢正常；（3）無(wú)心、肺等器質(zhì)性疾病，不伴有骨關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）身體狀況不佳無(wú)法接受手術(shù)治療者；（2）患肢嚴(yán)重畸形者；（3）伴有神經(jīng)血管損傷以及骨折者。85例患者中，男54例，女31例；年齡21～55歲，平均（34.5±6.5）歲；左膝34例，右膝51例；前交叉韌帶斷裂54例，后交叉韌帶斷裂19例，前、后交叉韌帶均斷裂12例；受傷原因：交通事故傷49例，運(yùn)動(dòng)傷24例，高處墜落傷12例；病程：1個(gè)月～2年，平均15個(gè)月；伴有半月板損傷者31例，伴有滑膜皺襞者6例，所有患者均存在不同程度的患肢關(guān)節(jié)腫脹、疼痛、膝關(guān)節(jié)伸屈活動(dòng)受限，抽屜試驗(yàn)、軸移試驗(yàn)、Lachman試驗(yàn)均陽(yáng)性。根據(jù)重建移植物的來(lái)源不同將85例患者分為兩組，自體組43例，同種異體組42例。自體組43例患者中，男28例，女15例；年齡21～56歲，平均（35.0±6.0）歲；左膝17例，右膝26例；前交叉韌帶斷裂27例，后交叉韌帶斷裂9例，前、后交叉韌帶均斷裂7例；受傷原因：交通事故傷24例，運(yùn)動(dòng)傷14例，高處墜落傷5例；病程：1～25個(gè)月，平均16個(gè)月。同種異體組42例患者中，男26例，女16例；年齡20～54歲，平均（34.0±7.5）歲；左膝17例，右膝25例；前交叉韌帶斷裂27例，后交叉韌帶斷裂10例，前、后交叉韌帶均斷裂5例；受傷原因：交通事故傷25例，運(yùn)動(dòng)傷10例，高處墜落傷7例；病程：1～23個(gè)月，平均15個(gè)月。兩組患者的性別、年齡、病程、斷裂部位等一般資料差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 材料 同種異體肌腱由山西澳瑞生物公司骨組織庫(kù)提供，固定可吸收擠壓釘及鈦釘為美國(guó)施樂(lè)輝公司產(chǎn)品；自體肌腱取患者半腱肌及股薄肌。

1.2.2 移植物的準(zhǔn)備及處理 利用Arthrex重建平臺(tái)修整移植物，將超低溫冷藏同種異體肌腱移植物解凍，然后將其置于16×104 U慶大霉素與0.9%氯化鈉溶液制成的250 mL等滲鹽水中30 min充分浸泡復(fù)溫，中點(diǎn)對(duì)折，修整編織至長(zhǎng)度約10 cm[1]。自體移植物取自患者半腱肌及股薄肌，將肌腱反折為四股編織成長(zhǎng)度10 cm。上述移植物編織縫合后預(yù)張10 min，備用。

1.2.3 重建方法 連續(xù)硬膜外麻醉下選取髕韌帶旁內(nèi)、外側(cè)手術(shù)入路，關(guān)節(jié)鏡下進(jìn)行探查，明確前、后交叉韌帶斷裂、損傷情況，并處理韌帶殘端，行髁間窩成型[4]。對(duì)合并半月板損傷的患者進(jìn)行半月板縫合、修補(bǔ)，或根據(jù)情況作全切處理；對(duì)合并軟骨損傷的患者給予修整或采取鉆孔術(shù)[4]。定位股骨與脛骨隧道，根據(jù)肌腱直徑選擇鉆頭（本研究中鉆頭直徑7.0～8.0 mm），鉆取骨道后關(guān)節(jié)鏡下將自體或異體肌腱植入前或后交叉韌帶隧道，以鈦釘或可吸收擠壓螺釘固定。關(guān)節(jié)鏡下觀察重建的前、后交叉韌帶形態(tài)，檢查其穩(wěn)定性，有無(wú)撞擊，并行前后抽屜試驗(yàn)和Lachman試驗(yàn)，判斷有無(wú)異常。徹底沖洗關(guān)節(jié)，留置引流，加壓包扎。

1.2.4 術(shù)后處理 術(shù)后患肢墊高10°～15°，佩戴膝關(guān)節(jié)角度鎖定支具，角度為0°～15°，給予抗生素3～5 d抗感染治療，異體移植物重建患者術(shù)后靜推地塞米松10 mg，治療3 d。術(shù)后1 d開(kāi)始進(jìn)行直腿抬高鍛煉，20～30組/d，30次/組；術(shù)后3 d進(jìn)行主動(dòng)伸膝抬腿訓(xùn)練，并在扶拐的情況下下地行走，同時(shí)調(diào)整支具角度0°～45°。術(shù)后4周開(kāi)始屈膝功能鍛煉，活動(dòng)幅度為0°～90°；術(shù)后6周屈膝可大于90°，達(dá)120°，可扶拐下地部分負(fù)重行走；術(shù)后8周自體肌腱移植者開(kāi)始進(jìn)行下蹲訓(xùn)練，并可保護(hù)性棄拐行走；術(shù)后12周異體肌腱移植者進(jìn)行下蹲訓(xùn)練，保護(hù)性棄拐行走；術(shù)后6個(gè)月開(kāi)始慢跑，避免重體力勞動(dòng)；1年后可行對(duì)抗性活動(dòng)，或參加較為劇烈的體育活動(dòng)[2]。

1.3 觀察指標(biāo) 記錄并比較兩組患者的手術(shù)時(shí)間、住院時(shí)間及不良反應(yīng)發(fā)生情況，統(tǒng)計(jì)術(shù)后1年Lysholm評(píng)分、Larson評(píng)分及國(guó)際膝關(guān)節(jié)評(píng)分委員會(huì)（IKDC）評(píng)分，評(píng)價(jià)關(guān)節(jié)功能[5]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 18.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用 字2檢驗(yàn)，以P

2 結(jié)果

2.1 隨訪結(jié)果 所有患者均獲隨訪，隨訪12～48個(gè)月，平均22個(gè)月。

2.2 手術(shù)時(shí)間、住院時(shí)間及不良反應(yīng)發(fā)生情況 自體組手術(shù)時(shí)間72～105 min，住院時(shí)間3～5 d；異體組手術(shù)時(shí)間55～80 min，住院時(shí)間3～7 d；自體組患者手術(shù)時(shí)間較異體組長(zhǎng)，住院時(shí)間較異體組短，兩組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

2.3 膝關(guān)節(jié)功能評(píng)價(jià) 兩組術(shù)后1年Lysholm評(píng)分、Larson評(píng)分及IKDC評(píng)分情況相比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見(jiàn)表2。

3 討論

隨著交通事故及其他意外事故的增多，各類骨及關(guān)節(jié)損傷隨之增多。前、后交叉韌帶斷裂會(huì)破壞膝關(guān)節(jié)的穩(wěn)定性，且易繼發(fā)關(guān)節(jié)褪變，若不能及時(shí)正確治療，將嚴(yán)重影響關(guān)節(jié)功能。有研究表明，交叉韌帶斷裂如未采取重建治療，將有51%的患者在上后1年內(nèi)再發(fā)生關(guān)節(jié)損傷和不穩(wěn)[4]?，F(xiàn)階段，借助膝關(guān)節(jié)鏡對(duì)斷裂的交叉韌帶進(jìn)行重建被認(rèn)為是最佳的治療方法，廣泛應(yīng)用于膝關(guān)節(jié)交叉韌帶斷裂的臨床診療之中[6]。目前，用于膝關(guān)節(jié)交叉韌帶斷裂重建術(shù)的移植物主要有自體移植物、同種異體移植物和人工韌帶，因其各自具備不同的特點(diǎn)，以及各類研究試驗(yàn)設(shè)計(jì)、固定方式及術(shù)后康復(fù)計(jì)劃的不同，表現(xiàn)為臨床中應(yīng)用效果差異較大[6]。其中人工韌帶因其組織相容性尚未完全解決，因此長(zhǎng)期療效不能肯定，從而其在臨床上的應(yīng)用與發(fā)展受到很大程度的限制；而自體移植物和同種異體移植物的臨床療效長(zhǎng)久以來(lái)一直是爭(zhēng)論的焦點(diǎn)[7-8]。

本研究回顧性對(duì)比分析了不同種類移植物，即自體移植物和同種異體移植物在膝關(guān)節(jié)交叉韌帶重建術(shù)中的應(yīng)用效果，結(jié)果表明兩種移植材料中，作自體移植物重建的患者手術(shù)時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)（P0.05）。而這一研究結(jié)果也與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道相符，馬業(yè)濤等[1]在對(duì)40例前后交叉韌帶損傷后重建患者的研究中認(rèn)為，自體肌腱與單純深低溫冷凍同種異體肌腱移植在重建膝關(guān)節(jié)前后交叉韌帶的療效無(wú)明顯差異；而李衛(wèi)平等[2]的研究中也顯示，無(wú)論是自體肌腱還是同種異體肌腱應(yīng)用于重建前后交叉韌帶，不僅關(guān)節(jié)活動(dòng)度及穩(wěn)定性滿意，且均能獲得較好的中遠(yuǎn)期療。

本研究中，自體組所采用的半腱肌、股薄肌取材近年來(lái)得到廣泛應(yīng)用，其強(qiáng)度高、取材簡(jiǎn)便、切口小、利于康復(fù)等優(yōu)點(diǎn)也越來(lái)越被廣大臨床醫(yī)生所認(rèn)可[9]。在本研究中也獲得了滿意的療效。目前，同種異體肌腱在臨床的應(yīng)用也較為常見(jiàn)，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為異體移植物在體內(nèi)的愈合和重塑結(jié)果與自體移植物類似，而免疫反應(yīng)則是引起延遲愈合及失敗的常見(jiàn)原因[7]。然而隨著相關(guān)技術(shù)的不斷發(fā)展，研究表明深低溫冷凍、輻照處理既可以保持同種異體移植物的生物特性，又能夠較大程度地降低其抗原性，從而減少排斥反應(yīng)以及炎癥反應(yīng)的發(fā)生[6]。盡管本研究中異體組有2例發(fā)生引流口滲出，但經(jīng)換藥處理痊愈，并未與自體組產(chǎn)生明顯差異。與此同時(shí)，同種異體移植物的優(yōu)點(diǎn)也日漸凸顯，有效消除供區(qū)并發(fā)癥、切口小、重建時(shí)間短等優(yōu)點(diǎn)支持這一材料在膝關(guān)節(jié)交叉韌帶重建術(shù)中的應(yīng)用，本研究也顯示盡管異體組體內(nèi)愈合和重塑過(guò)程相對(duì)較慢，住院時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)，但與自體組相比較，其手術(shù)時(shí)間明顯縮短，亦減輕了患者的痛苦[10]。

綜上所述，對(duì)于膝關(guān)節(jié)前、后交叉韌帶斷裂的患者只要重建術(shù)的各項(xiàng)關(guān)鍵操作得當(dāng)，移植材料無(wú)異常，術(shù)后積極進(jìn)行康復(fù)治療，自體移植和異體移植均可以獲得滿意的治療效果。

參考文獻(xiàn)

[1]馬業(yè)濤，宋世鋒，曾凡，等.關(guān)節(jié)鏡下自體肌腱及同種異體肌腱重建膝關(guān)節(jié)前后交叉韌帶[J].中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù)，2011，15（25）：4726-4730.

[2]李衛(wèi)平，宋斌，楊睿，等.關(guān)節(jié)鏡下膝關(guān)節(jié)前后交叉韌帶重建：自體移植與異體移植的中遠(yuǎn)期療效對(duì)比[J].中國(guó)組織工程研究，2012，16（5）：939-943.

[3] Hae S K， Yong I， Chae-Gwan K， et al. Factors affecting patients’ graft choice in anterior cruciate ligament reconstruction[J]. Clinics in Orthopedic Surgery，2010，2（2）：69-75.

[4]孟險(xiǎn)峰，周磊，崔正禮，等.關(guān)節(jié)鏡下膝關(guān)節(jié)交叉韌帶斷裂重建術(shù)[J].中國(guó)矯形外科雜志，2009，17（13）：1038-1040.

[5]陳益果，丁晶，楊軍，等.關(guān)節(jié)鏡下自體與同種異體肌腱重建前交叉韌帶的臨床對(duì)比分析[J].中國(guó)骨與關(guān)節(jié)損傷雜志，2010，25（9）：791-793.

[6]張義龍，李寧，李志懷.自體與同種異體肌腱重建膝關(guān)節(jié)前交叉韌帶的比較[J].中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù)，2011，15（31）：5743-5746.

[7]劉彩龍，趙金忠，陳雷，等.同種異體半腱肌腱雙束重建前交叉韌帶的近期臨床療效[J].中國(guó)修復(fù)重建外科雜志，2009，23（12）：1451-1455.

[8]劉文祥，徐斌，徐洪港，等.關(guān)節(jié)鏡下同種異體肌腱移植重建交叉韌帶60例[J].中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù)，2010，14（5）：866-869.

[9] Ventura A， Terzaghi C， Legnani C， et al. Synthetic grafts for anterior cruciate ligament rupture： 19-year outcome study[J]. Knee，2010，17（2）：108-113.

篇3

【關(guān)鍵詞】百令膠囊；腎小管間質(zhì)纖維化；轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1；α-平滑肌肌動(dòng)蛋白

The effects of bailing capsules on the expression of α-SMA in the rats with tubulointerstitial fibrosis

LI Nuan,YANG Da-sheng.Department of Pediatrics,First Affiliated Hospital of Xinxiang Medical College,Henan 453100,China

【Abstract】 Objective To observe the effects of bailing capsules on the expression of α-SMA in the rats with tubulointerstitial fibrosis to explore the possible mechanism of renal-protecting of bailing capsules.Methods 90 male Sprague-Dawley(SD)rats,aged three months,were randomly divided into three groups:control group(n=30),model group(n=30),treatment group(n=30).The renal tubulointerstitial fibrosis model was established by gavage with 150 mg/(kg•d)adenine solved by a solution of 2 percent starch and bailing capsules solved by normal saline was gave to the rats from treatment group in a dose of 1．5 g/(kg•d)and the same volume starch and normal saline were gave to the rats from control group.At week 7,12,17,ten rats of every group were killed,the urinary protein,N-acetyl-β-D-glucosaminidase(NAG)in the urine and renal profile including BUN and serum creatinine were examined.The histological changes of kidney were observed by light microscopy,and the expression of TGF-β1,α-SMA were examined by immunohistochemistry staining.Results At 7,12,17 weeks,the value of urinary protein,urinary NAG,serum BUN and serum Cr of rats from model and treatment group were higher than those of control one(P

【Key words】Tubulointerstitial fibrosis; Transforming growth factor-beta1; α-smooth muscle actin; Cordyceps Sinensis

在腎小管間質(zhì)纖維化發(fā)生發(fā)展中肌成纖維細(xì)胞出現(xiàn)，并在細(xì)胞外基質(zhì)過(guò)度沉積，該細(xì)胞主要表達(dá)α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-smooth muscle actin，α-SMA)，α-SMA是肌成纖維細(xì)胞激活的指示性標(biāo)志物。本實(shí)驗(yàn)觀察百令膠囊對(duì)腎小管間質(zhì)纖維化大鼠腎臟α-SMA表達(dá)的影響，探討應(yīng)用中藥百令膠囊能否防治腎小管纖維化及其可能機(jī)制,現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1．1 動(dòng)物模型 選用雄性3個(gè)月齡SD大鼠90只，體質(zhì)量160~210 g，購(gòu)自鄭州大學(xué)醫(yī)學(xué)部動(dòng)物試驗(yàn)中心。大鼠適應(yīng)環(huán)境1周后，隨機(jī)分為對(duì)照組(30只)，模型組(30只)，預(yù)防組(30只。模型組參考文獻(xiàn)[1]，將腺嘌呤以2%淀粉溶液溶解，制成混懸液，以150 mg/(kg•d)灌胃，連續(xù)17周，制作大鼠腎小管間質(zhì)纖維化模型；預(yù)防組以150 mg/(kg•d)腺嘌呤灌胃，同時(shí)以1．5 g/(kg•d)百令膠囊溶于生理鹽水灌胃，對(duì)照組以腺嘌呤相同體積淀粉和百令膠囊相同體積生理鹽水灌胃，分別于實(shí)驗(yàn)第7、12、17周時(shí)各組隨機(jī)處死10只大鼠。取腎臟，經(jīng)10%多聚甲醛固定，光鏡下觀察腎組織的病理變化和免疫組織化學(xué)法檢測(cè)腎臟轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(transforming growth factor-beta1,TGF-β1)、α-SMA的表達(dá)情況。處死前取血，并于各時(shí)相點(diǎn)前1 d分別將各組10只大鼠放入代謝籠中留取24 h尿液，進(jìn)行生化指標(biāo)檢測(cè)。

1．2 生化指標(biāo)檢測(cè) 血清肌酐(creatinine,Cr)和尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)采用BECKMAN CX-7全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定；24 h尿蛋白定量采用考馬斯亮藍(lán)法；尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(N-acetyl-β-D-glucosaminidase，NAG)酶采用比色法。

1．3 腎臟組織病理 腎組織HE染色和Masson特染，光鏡觀察。在IDA-2000高清晰度數(shù)碼顯微圖像分析系統(tǒng)下計(jì)算腎小管間質(zhì)纖維化指數(shù)。高倍鏡(×200)下隨機(jī)選取10個(gè)不重疊視野測(cè)定小管間質(zhì)纖維化面積與同視野小管間質(zhì)總面積的百分比，進(jìn)行半定量評(píng)分[2]。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：0分：無(wú)病變； 1分：50%。每張切片取10個(gè)視野的平均積分，再在各組取平均值。

1．4 免疫組化 采用鏈霉親和素-生物素-過(guò)氧化物酶(SABC)法檢測(cè)腎組織中的TGF-β1和α-SMA，操作步驟按SABC試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。光鏡下組織切片呈棕黃色顆粒性沉積區(qū)域?yàn)殛?yáng)性染色部位。TGF-β1和α-SMA染色結(jié)果在高倍鏡(×200)下隨機(jī)選擇20個(gè)不重疊的視野，采用半定量評(píng)分[3]。TGF-β1半定量評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：0分：無(wú)染色；1分：染色面積

1．5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 各組數(shù)據(jù)均采用均值±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，組間比較采用兩組獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)(雙側(cè))和方差分析，由SPSS 10．0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

2 結(jié)果

2．1 生化指標(biāo)檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)大鼠24 h尿蛋白、尿NAG酶、血BUN、Cr含量變化,見(jiàn)表1。

2．2 腎臟組織病理改變 對(duì)照組腎小管間質(zhì)基本正常。實(shí)驗(yàn)7周時(shí)，模型組和預(yù)防組大鼠腎臟腎小管擴(kuò)張，間質(zhì)單核細(xì)胞浸潤(rùn)、水腫，可見(jiàn)間質(zhì)纖維組織灶性增生。12周時(shí)，模型組和預(yù)防組腎小管擴(kuò)張明顯，腎小管上皮空泡或顆粒性變性，基底膜斷裂，小管間質(zhì)區(qū)域增寬，纖維化明顯。17周時(shí)，模型組和預(yù)防組兩組大鼠腎臟病理檢查均可見(jiàn)腎小管明顯萎縮及消失，間質(zhì)廣泛纖維化。7、12周時(shí)，預(yù)防組大鼠腎臟病理改變均較模型組輕。17周時(shí)，模型組和預(yù)防組大鼠腎臟病理改變差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0．670)。各時(shí)相點(diǎn)，各時(shí)相點(diǎn)模型組和預(yù)防組大鼠腎間質(zhì)損害半定量分析見(jiàn)表2。

2．3 腎組織免疫組化變化（TGF-β1、α-SMA），見(jiàn)表3。

3 討論

腎小管間質(zhì)纖維化的發(fā)生是個(gè)復(fù)雜的病理生理過(guò)程，其機(jī)制尚未完全清楚。1952年，Philips建立腺嘌呤致大鼠腎功能衰竭模型,現(xiàn)已成為研究腎小管間質(zhì)纖維化病理機(jī)制的理想動(dòng)物模型。本實(shí)驗(yàn)以腺嘌呤150 mg/(kg•d)灌胃1次，連續(xù)17周。實(shí)驗(yàn)第7周時(shí)，模型組尿蛋白排泄量、尿NAG酶水平高于對(duì)照組。病理改變顯示，腎小管有沉積物出現(xiàn)，腎皮質(zhì)出現(xiàn)異物肉芽腫，灶性小管擴(kuò)張、間質(zhì)單核細(xì)胞浸潤(rùn)、輕度纖維組織增生，而此時(shí)血BUN、Cr 水平和對(duì)照組比較無(wú)明顯差異。隨著時(shí)間的推移，病情的進(jìn)展，至12周時(shí)，模型組血BUN、Cr等指標(biāo)進(jìn)一步增高，腎臟病理改變進(jìn)一步加重，小管萎縮、擴(kuò)張，間質(zhì)纖維組織明顯增加。17周時(shí)，模型組腎功能明顯減退，間質(zhì)大量纖維組織增生，腎小管結(jié)構(gòu)消失。模型組大鼠腎臟TGF-β1表達(dá)量呈增加趨勢(shì)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，腎小管間質(zhì)纖維化動(dòng)物模型制作是成功的，和楚非[1]報(bào)道相似。

據(jù)文獻(xiàn)報(bào)告，腎間質(zhì)纖維化的主要表現(xiàn)有腎臟固有細(xì)胞消失、肌成纖維細(xì)胞增多、細(xì)胞外基質(zhì)沉積等[4]。肌成纖維細(xì)胞在纖維化腎組織的廣泛存在及其在的重要意義已為眾多實(shí)驗(yàn)所證實(shí)。所謂肌成纖維細(xì)胞是形態(tài)上介于成纖維細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞之間的細(xì)胞，該細(xì)胞表達(dá)α-SMA。在人腎組織研究中，發(fā)現(xiàn)腎小管間質(zhì)內(nèi)α-SMA表達(dá)量與腎小管間質(zhì)纖維化的程度以及腎功能惡化程度呈正相關(guān)關(guān)系[5]。有文獻(xiàn)報(bào)道，在實(shí)驗(yàn)大鼠腎小管受損和腎間質(zhì)纖維組織增生較明顯區(qū)域檢測(cè)到了α-SMA陽(yáng)性細(xì)胞，表明肌成纖維細(xì)胞的積聚發(fā)生在纖維組織增生較明顯部位，肌成纖維細(xì)胞在腎小管間質(zhì)纖維化中發(fā)揮著重要作用，且與腎臟功能有一定相關(guān)關(guān)系[6-10]。本實(shí)驗(yàn)免疫組化結(jié)果顯示，模型組7周時(shí)α-SMA表達(dá)已明顯增多，12、17周時(shí)α-SMA表達(dá)量進(jìn)一步增加。α-SMA的變化與腎病理、腎功能、尿蛋白的變化相一致，即α-SMA高表達(dá)者，其病理重、SCr、BUN、尿NAG或尿蛋白值就高。本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果提示，在腺嘌呤致大鼠腎小管間質(zhì)纖維化模型中，隨著病情的進(jìn)展，α-SMA表達(dá)量增加，腎臟病理變化越來(lái)越重，標(biāo)志肌成纖維細(xì)胞產(chǎn)生，促進(jìn)腎小管間質(zhì)纖維化的發(fā)生。預(yù)防組血Cr、血BUN、尿NAG及24 h尿蛋白值在第7周時(shí)與模型組比較無(wú)明顯差異，第12周時(shí)均低于模型組，并且可見(jiàn)細(xì)胞浸潤(rùn)、小管細(xì)胞空泡變性及細(xì)胞壞死減少。預(yù)防組大鼠腎臟TGF-β1表達(dá)量均較模型組少，提示百令膠囊治療對(duì)腎小管上皮細(xì)胞有保護(hù)作用，能有效地改善大鼠的腎損害，減輕腎小管間質(zhì)纖維化。筆者的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示預(yù)防組大鼠腎臟α-SMA表達(dá)量均較模型組少，提示百令膠囊可能通過(guò)下調(diào)α-SMA表達(dá)，抑制肌成纖維細(xì)胞增多，使細(xì)胞外基質(zhì)沉積減少，延緩腎小管間質(zhì)纖維化而發(fā)揮其腎臟保護(hù)作用。

參考文獻(xiàn)

［1］ 楚非,鄒萬(wàn)忠,孫鎖柱,等.大鼠腎小管間質(zhì)纖維化中腎小管上皮細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化的研究.中華腎臟病雜志,2003,19(1):10-14.

［2］ Mezzano SA,Droguett MA,Burgos ME,et al.Overexpression of chemokines,fibrogenetic cytokines,and myofibroblasts in human membranous nephropathy.Kidney Int,2000,57:147-158.

［3］ Mizuno S,Matsumoto K,Nakamura T.Hepatocyte growth factor suppresses interstitial fibrosis in a mouse model of obstructive nephropathy.Kidney Int,2001,59:1304-1314.

［4］ Ng YY,Huang TP,Yang WC,et al.Tubular-epithelial-myofibroblasts transdifferen-tiation in progressive tubuloinstitial fibrosis in 5/6 nephretomized rats.Kidney Int,1998,54:864-876.

［5］ 陳楠,王偉銘.腎小管間質(zhì)纖維化機(jī)制及防治進(jìn)展.腎臟病與透析腎移植雜志,2001,10(6):551-552.

［6］ 劉清娟，何寧，劉淑霞,等.糖尿病大鼠腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化與肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子和Smad7蛋白的表達(dá).中國(guó)危重病急救醫(yī)學(xué)，2005，17(11)：675-678.

［7］ 易春霞，廖海強(qiáng)，周于祿,等.替米沙坦對(duì)糖尿病腎病大鼠腎臟α-SMA表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究.中南醫(yī)學(xué),2006，4(4):259-261.

［8］ 陳威，楊守京，劉彥仿，等.實(shí)驗(yàn)性慢性腎缺血模型腎小管-間質(zhì)細(xì)胞α-平滑肌肌動(dòng)蛋白的表達(dá)和意義.腎臟病與透析腎移植雜志,2004,13(1):30.