導(dǎo)語：如何才能寫好一篇古詩草的解釋，這就需要搜集整理更多的資料和文獻(xiàn)，歡迎閱讀由公務(wù)員之家整理的十篇范文，供你借鑒。

篇1

2011年，剛滿21歲的成都女孩宋靜被診斷出白血病，接著是痛苦無盡的化療。在生命灰暗的時刻，她在余華小說《活著》中尋求勇氣和光明，終于堅持了下來，她的舉動感動了《活著》的作者余華，作家余華給宋靜送來祝福和10萬元錢，鼓勵她繼續(xù)和病魔抗?fàn)帯?/p>

這是一段溫暖動人的故事，很多網(wǎng)友為之唏噓不已。然而，大家也知道，無論多少祝福和金錢，如果沒有合適的骨髓供移植，死神冰冷的手終將帶走宋靜。

誰能拯救宋靜？沒有人知道。

操石杰帶來了“生命種子”

身高1.65米、體重不到50公斤的操石杰是湖北工業(yè)大學(xué)四年級學(xué)生。2010年，操石杰志愿加入了中華骨髓庫湖北分庫，成為湖北省第126例、全國第3340例骨髓捐獻(xiàn)志愿者。

2012年12月27日這一天，操石杰被告知，他的骨髓和宋靜配型成功，需要他到醫(yī)院來做相關(guān)檢查。操石杰立刻將消息告訴了媽媽。媽媽堅決不同意：“你那么瘦，還給別人抽血，想不想活了？”

操石杰理解媽媽的擔(dān)心。因為在一年前，父親剛剛因癌癥去世，媽媽可不想他再有什么閃失。

操石杰開始做媽媽的工作，告訴媽媽捐髓不會影響身體。

“現(xiàn)在對身體沒有影響，老了不會有嗎？”操石杰說：“沒有！”

面對兒子的堅持，媽媽最終改變了主意。經(jīng)檢查，操石杰和宋靜10個骨髓位點中有9個相吻合。

其實，這已經(jīng)不是操石杰第一次被“相中”。一年前，有個患者的骨髓也和他很合?？刹恢朗裁丛?，對方中途放棄了。沒想到這一次和宋靜的也很配。朋友們不禁開玩笑說：“小子，你隨便報個號碼吧，我們?nèi)ベI彩票，準(zhǔn)能中！”

這確實是罕見的事，畢竟非血緣關(guān)系的骨髓供需者之間，配對相符率只有五千分之一甚至幾萬分之一，而能達(dá)到這種吻合程度的機(jī)率更是百萬分之一?，F(xiàn)在，這種百萬分之一的概率在石杰身上發(fā)生了兩次。被做通工作的石杰媽媽陳金梅笑著說：“這也許就是天意。”

在“救命種子”旅行的春天

2013年3月14日上午9時30分，中建三局總承包公司安裝分公司“準(zhǔn)員工”操石杰微笑鎮(zhèn)定地躺在武漢市中心醫(yī)院血液科采集間的病床上，鮮紅的血液緩緩地從他體內(nèi)流進(jìn)血細(xì)胞分離機(jī)。

與此同時，遠(yuǎn)在河北廊坊一家腫瘤中心的無菌倉內(nèi)，準(zhǔn)備接受造血干細(xì)胞移植的宋靜開始了靜靜的等待，等待這期盼已久的造血干細(xì)胞飛越千山萬水延續(xù)如花青春。兩人雖相隔千里、素昧平生，但這顆傳遞大愛傳遞青春正能量的生命種子正在春天里的旅行。

血液科醫(yī)生心疼地介紹，由于操石杰體重比宋靜還輕，明日，他還要忍受痛苦，再捐約200毫升造血干細(xì)胞，才能滿足宋靜之需。

操石杰在接受手術(shù)的同時，母親陳金梅也在為兒子的平安默默祈禱。陳金梅告訴記者：“天下父母都心疼孩子，我不贊成他做這個事，但我理解他的這份愛。”

“石杰是個懂事的孩子，他曾想賣腎救父。”陳金梅說。她的愛人操良詠被確診為淋巴癌后，面對高昂手術(shù)費，石杰曾想賣腎救父，被她阻止。一家老小借債10余萬元，為父親做了手術(shù)。手術(shù)后，操良詠回到家中接受后期放療。陳金梅說，那時為了還債，她和大兒子包括媳婦都忙著干活賺錢，照顧父親的重?fù)?dān)就落在石杰身上。

“陪父親放療的日子很艱辛，石杰常常趴在父親床邊很久，偶爾還會坐到天亮。3個月后，他爹還是走了”，陳金梅說，丈夫離世那天，石杰很傷心，為沒能力救父親而深深自責(zé)。

如今，陳金梅在家附近的茶園里干活，每天有40元工錢。陳金梅很滿足，她說，等兒子做完手術(shù)，就買點好吃的給他補補身子。

他為什么會這樣做

可能正是失去父親，讓石杰體會到失去親人的傷痛，所以這次救白血病女孩，他一點沒猶豫。

生活的磨難，也讓石杰更懂得什么是責(zé)任心和愛心。大四時，他來到中建三局一家安裝公司實習(xí)，每月實習(xí)工資800元。學(xué)校老師和公司同事都喜歡上這個為人熱心、工作勤懇的好小伙。操石杰不僅在學(xué)校擔(dān)任班長，去年年底，實習(xí)單位還提前聘用他，并提他為工長。

“希望我的骨髓，能夠讓宋靜重獲新生?！闭撬x擇捐髓救人的真實想法。

為鼓勵宋靜勇敢活下去，操石杰還托醫(yī)生為宋靜送去一條保平安的手鏈和一本《讓愛永存》的書，還有他一個月的實習(xí)工資。宋靜也給他送來一封感謝信和一個象征平安的水晶蘋果，祝他幸福安康。

操石杰捐髓的行為得到學(xué)校及公司的大力支持，公司為他發(fā)放了2000元補助金，并給他放了假。

手術(shù)當(dāng)天，電氣學(xué)院還派人赴新洲接他的母親來校陪護(hù)，學(xué)校領(lǐng)導(dǎo)和老師專程趕來看望他，帶來1.3萬元的慰問金，并迅速在學(xué)院組織學(xué)習(xí)宣傳操石杰事跡。

操石杰的事跡還同時受到他工作單位、中建三局的“熱捧”，鮮花和掌聲為操石杰響起。這個靦腆的小伙子卻平靜淡然：“能幫助別人是快樂的事。即便幫助了別人，我也只是個平凡的人。”

榜樣的力量讓下一個捐髓者誕生

他是王萌，湖北工業(yè)大學(xué)電氣與電子工程學(xué)院11級實驗一班學(xué)生，2013年3月27日，繼操石杰之后，王萌走進(jìn)武漢同濟(jì)醫(yī)院，為素不相識的蘇州白血病患者捐髓。

還在上大一的時候，王萌就加入了中華骨髓庫。2013年1月12日，他接到中華骨髓庫湖北分庫打來的配型成功的電話。2013年2月初，經(jīng)過高分辨配型，王萌和那位蘇州患者的10個位點中，竟然驚人地全部吻合。

當(dāng)他把要捐髓救人的消息告訴家人后，疼愛他的奶奶堅決不同意。王萌上網(wǎng)先自己“科普”了一下，做通了在美國工作的父母的思想，又給奶奶解釋，捐髓并不是從脊柱里抽取骨髓，就跟抽血差不多。他的學(xué)長操石杰也現(xiàn)身說法，給奶奶打去電話，向老人家說明捐獻(xiàn)的無危害性，奶奶才放下心來。

為讓捐髓質(zhì)量更高，王萌開始控制體重，每天晚上只吃蔬菜水果，還經(jīng)常到操場上做運動。兩個多星期，王萌瘦了4斤多。

23日起，王萌到同濟(jì)醫(yī)院開始打捐髓動員劑，連續(xù)四天，每天一針，經(jīng)常覺得膝蓋酸疼，偶爾還會痛得直不起腰來。他說：“雖然有點疼，但能救人一命，是值得的。操石杰作為師兄，剛剛為我們作出了榜樣，作為師弟我也不能落后?！?/p>

篇2

法律多元是指一國之內(nèi)不同種類的法律制度、法律文化的共存現(xiàn)象。有學(xué)者指出，法律多元意味著法律應(yīng)該有多種中心、多個層次，在一定的條件下存在著兩個以上可供人們適用的法律規(guī)范，而不能僅僅只有一個法律規(guī)范。法律多元起源于法人類學(xué)和法社會學(xué)交叉學(xué)科對法律的功能主義界定，并將其廣泛運用和進(jìn)一步發(fā)展。在一個復(fù)雜多樣的社會里，不可能存在一元法律規(guī)范或單一的社會秩序，任何社會秩序的建構(gòu)都不能僅僅依靠單一的正式法律制度。在法律多元的視野下，民間習(xí)慣法的作用不容忽視。

昂格爾在其著作《現(xiàn)代社會中的法律》中提出了三種法律概念，即習(xí)慣法、官僚法和法律秩序。奧地利學(xué)者埃利希在《法社會學(xué)基本原理》中提出了兩種法律，即國家制定的“國家法”和“社會秩序”本身，或者稱為“人類聯(lián)合的內(nèi)在秩序”。日本學(xué)者千葉正士則明確提出了法律多元，他認(rèn)為法律應(yīng)分為三個層次，即官方法、非官方法和法律基本原理。其中，非官方法是指非由官方權(quán)威正式認(rèn)可，而是由某個圈子的人們在實踐中通過普遍的一致同意、認(rèn)可的法律體系。這種普遍一致的同意可以通過成文的意見來表達(dá)，也可以通過特定的行為模式來表達(dá)。20世紀(jì)90年代以來，中國法學(xué)界也極為關(guān)注國家法之外的習(xí)慣法、民間法的研究。梁治平在《清代習(xí)慣法：社會與國家》里指出：“所謂國家法可以被一般地理解為由特定國家機(jī)構(gòu)制定、頒布、采行和自上而下予以實施的法律……國家法在任何社會里都不是唯一的和全部的法律，無論其作用多么重要，它們只能是整個法律秩序的一個部分。在國家法之外、之下，還有各種各樣其他類型的法律，它們不但填補國家法遺留的空隙，甚至構(gòu)成國家法的基礎(chǔ)?！碧K力也認(rèn)為，只要社會的各種其他條件還會（并且肯定會）發(fā)生變化，就會不斷地產(chǎn)生新的習(xí)慣，并將不斷且永遠(yuǎn)作為國家（只要國家還存在）制定法以及其他政令運作的一個永遠(yuǎn)無法掙脫的背景性制約因素而對制定法的效果產(chǎn)生各種影響?！泵耖g法的概念在中國提出，也充分說明了中國學(xué)者已經(jīng)開始關(guān)注法的實際運動、實際效力、實際作用和實際效果，即法律運行的實然性。我國蒙古族生態(tài)法作為民間法的具體形態(tài)對于我國法制社會的發(fā)展，尤其是環(huán)境法學(xué)的進(jìn)步有其獨特的作用。

二、蒙古族生態(tài)法是民間法的組成部分

德國歷史法學(xué)派的代表人物薩維尼指出，“法律和語言一樣，沒有絕對中斷的時候，它也像民族的其他習(xí)性一樣，受著同樣的運動和發(fā)展規(guī)律的支配；這種發(fā)展就像其最初階段一樣，按著其內(nèi)部必然性的法則發(fā)展。法律隨著民族的發(fā)展而發(fā)展，隨著民族力量的加強而加強，最后也同一個民族失去它的民族性一樣而消亡。”中國自古以來是一個多民族的國家，各民族在獨特的生存環(huán)境中形成了各具特色的民族文化傳統(tǒng)、價值觀念、生產(chǎn)生活方式以及與此相適應(yīng)的生活習(xí)俗和規(guī)則。由于生存環(huán)境、歷史形成、經(jīng)濟(jì)形態(tài)、生存方式、價值觀念等方面的差別，中國56個民族之間在行為規(guī)則體系上也呈現(xiàn)出一定的民族性。近年來，對民族習(xí)慣法的研究表明，中國每一個民族幾乎都有自己的習(xí)慣法體系。這些獨特的行為規(guī)范體系，不僅不完全等同于現(xiàn)代法，而且各民族之間也有顯著的差別。

在現(xiàn)實中國，民間法與國家法并存，作為指引和矯正人們行為的規(guī)范體系以及糾紛的自我愈合機(jī)制，發(fā)揮著準(zhǔn)法律的作用。蒙古族習(xí)慣法延續(xù)了400多年，有些內(nèi)容成文后仍被保留了下來，并且一直相沿不斷，可見其約束力頑強、長久性是多么驚人，這也是蒙古族法制的一大特點。蒙古族習(xí)慣法有兩層含義：一是指蒙古社會進(jìn)入階級社會以前的未成文習(xí)慣法，但符合全體成員利益，并被人認(rèn)可和遵循的“習(xí)慣行為規(guī)范”，蒙古人稱之為“約孫”；二是12世紀(jì)初蒙古社會進(jìn)入階級社會之后，早期蒙古奴隸主貴族對相沿已久的蒙古族“習(xí)慣行為規(guī)范”予以承認(rèn)、修補和增刪，變成代表奴隸主貴族階級意志的習(xí)慣法，蒙古人仍把它稱為“約孫”，它有道理、規(guī)矩、緣由、禮、法等含義。

三、蒙古族生態(tài)法的內(nèi)容

蒙元以前蒙古先民在薩滿教的氛圍中通過對“阿密”（生命）概念的確認(rèn)和“天父”（地母）意識的形成，產(chǎn)生了原始的生態(tài)環(huán)境意識。到蒙元時期，由于蒙古帝國的建立、四季輪牧方式的采用、大汗分封制下操場制度管理體系的形成，蒙古族的原始生態(tài)意識逐步向大生態(tài)觀和生態(tài)化的實踐觀的方向發(fā)展演化，人與自然環(huán)境和諧發(fā)展的生態(tài)環(huán)境意識逐步成為古代蒙古人約定俗成的知識體系和價值取向。更為重要的是，自蒙元時代開始直至清代的歷代蒙古族統(tǒng)治者，他們在繼承古代蒙古族“約孫”的基礎(chǔ)上，不斷地對其增補和發(fā)展，生態(tài)環(huán)境保護(hù)的內(nèi)容進(jìn)一步地擴(kuò)充，使環(huán)境保護(hù)的措施更加具體化、習(xí)俗化、規(guī)范化和制度化。例如，自蒙元至清相繼頒布了《阿勒坦汗法典》、《喀爾咯七旗法典》、《衛(wèi)拉特法典》、《喀爾咯吉如姆》、《阿拉善蒙古律則》等一系列保護(hù)生態(tài)環(huán)境的法典，基本確立了符合自己文化、習(xí)俗傳統(tǒng)的法律體系。它使得古代蒙古族的環(huán)境保護(hù)意識更加社會化、法制化，為古代蒙古高原生態(tài)環(huán)境保護(hù)提供了堅實的屏障和可靠的保障。整體而言，古代蒙古族生態(tài)環(huán)境保護(hù)主要以立法、習(xí)俗、道德、宗教等形式，融入蒙古族日常生產(chǎn)與生活之中，事實上使這種生態(tài)環(huán)境保護(hù)思想意識習(xí)俗化、道德化、法制化。

概括起來，蒙古族生態(tài)法主要體現(xiàn)在以下幾個方面：

（一）人與自然和諧共處

蒙古族人在實際的生產(chǎn)生活中逐步形成了人與自然環(huán)境平衡協(xié)調(diào)的發(fā)展觀，其實質(zhì)是具有可持續(xù)發(fā)展性質(zhì)的一種發(fā)展觀。例如：草場資源和水資源對蒙古高原的游牧民族來說是生死攸關(guān)的最重要的兩種資源，古代蒙古人為了處理資源與經(jīng)濟(jì)發(fā)展的協(xié)調(diào)平衡，采取倒場放牧的生產(chǎn)措施。這種倒場放牧措施既可保障畜牧業(yè)經(jīng)濟(jì)的正常發(fā)展，還可保障草場的生態(tài)環(huán)境質(zhì)量，避免了優(yōu)質(zhì)草種的退化和草場的鹽堿化或沙漠化，集中體現(xiàn)了人與自然環(huán)境的協(xié)調(diào)平衡。水資源是蒙古高原游牧民族賴以安身立命的又一重要自然資源，古代蒙古人在對水資源的利用開發(fā)上非常注重對水資源的節(jié)約與保護(hù)。水在蒙古族人心目中具有宗教意義上的神圣性，污染水源就是對水神的褻瀆，所以在生活習(xí)俗中規(guī)定了不許向水中投擲臟物。習(xí)慣法中還規(guī)定“春夏兩季人們不可以白晝?nèi)胨蛘咴诤又邢词?，或者用金銀器汲水”。

（二）愛護(hù)動植物

古代蒙古族在他們的思想意識中表現(xiàn)出來的是一種對動植物有惻隱之心的生態(tài)倫理道德觀，主要體現(xiàn)在他們的和實際的許多法規(guī)及生活習(xí)俗之中。蒙元時期蒙古族大多信仰薩滿教和藏傳佛教。佛教教誨人們慈悲為懷、嚴(yán)禁殺生。薩滿教崇拜大自然，認(rèn)為自然界的一切都有生命、有神靈，其教義里面同樣也隱含著深刻的生態(tài)倫理思想。這種思想支配著人們在實際的生產(chǎn)生活中奉行一種正確的生態(tài)倫理觀，甚至連最高統(tǒng)治者也不例外。同時，從蒙元時期開始的幾乎每位蒙古族統(tǒng)治者都曾用立法的形式嚴(yán)禁大肆濫殺野生動物，特別是懷孕的帶幼仔的動物，充分顯示出古代蒙古族對野生動植物的仁慈和惻隱之心。古代蒙古族把山川大地與神靈等齊，把其他生靈與人類齊同，客觀上提高了自然環(huán)境在人們心目中的地位，同時對人們破壞自然環(huán)境的行為產(chǎn)生了很強的道德約束作用。

（三）珍惜自然資源

古代蒙古族人認(rèn)為許多自然資源的價值超過了個人的生命價值?！对贰け居浺弧酚涊d成吉思汗七世祖篾年土敦之妻那莫侖合屯，就曾因為押刺伊兒部幼兒挖食了她牧場的“速敦”草根，破壞了她的馴馬場，雙方發(fā)生重大糾紛，結(jié)果那莫侖和她的八個兒子被殺。這場禍起于無知幼兒對草場資源破壞的事件，反映了草原等自然資源在蒙古人心目中的價值。蒙古族的習(xí)慣法中明確規(guī)定，破壞草場可誅殺其家。事實上，由于蒙古族所信奉的薩滿教的宗教作用，人們對水和動植物等許多自然資源都披上了神秘的面紗，并在實踐活動中變成一種自覺的行動。如薩滿教對水至誠崇拜：水者，地之血氣；水者，萬物之本源。基于這種觀念，薩滿教水神神話中認(rèn)為有了水才有了人。很明顯，在這種觀念里，水等自然資源的價值地位與神靈等齊，而正是這種有神論的使得許多自然資源在古代蒙古族人的心目中具有無比珍貴的價值。如果剝?nèi)ミ@層神秘的宗教面紗，實際上就是古代蒙古族看待自然資源的價值觀，它對保護(hù)古代蒙古草原生態(tài)環(huán)境的協(xié)調(diào)平衡具有不可替代的作用。

四、國家法與民間法的互動——對蒙古族生態(tài)法的揚棄

在法律多元化的視角下，應(yīng)當(dāng)承認(rèn)民間法作為一種法的形式存在。同時，國家法與民間法在文化上的阻隔和差異，決定了我們必須協(xié)調(diào)和處理好兩者之間的關(guān)系。古代蒙古族人出于生存的需要，在實際的生產(chǎn)生活中形成了一套蘊含著非常正確和樸素的生態(tài)環(huán)保思想意識。這些思想反過來通過宗教和立法手段融于整個社會的實踐活動中，使之逐步習(xí)俗化、社會化、制度化，成為對古代蒙古族地區(qū)的生態(tài)平衡和環(huán)境保護(hù)起到最根本作用的民間法。研究作為民間法組成部分的蒙古族生態(tài)法，將對環(huán)境問題提供有益的智慧啟迪，可否在民間法與國家法的融合中體現(xiàn)和發(fā)揮蒙古族生態(tài)法的作用，可從以下幾個方面考慮：

（一）吸納蒙古族生態(tài)法的合理因素

草原生態(tài)法是草原生態(tài)文化的重要內(nèi)容，草原生態(tài)文化的制度價值就是通過草原生態(tài)法來體現(xiàn)的。在蒙古族的歷史上，多部保護(hù)自然資源的法律法規(guī)注重通過社會規(guī)范約束人們的行為，引導(dǎo)人們樹立正確的生態(tài)觀，進(jìn)行環(huán)境保護(hù)和生態(tài)建設(shè)。順應(yīng)可持續(xù)發(fā)展的要求，對于蒙古族生態(tài)法中的合理成分，應(yīng)當(dāng)在民間法與國家法互動的過程中予以吸納，它對我國目前日益惡化的環(huán)境問題和西部大開發(fā)過程中的民族地區(qū)的環(huán)境保護(hù)和生態(tài)文明建設(shè)具有巨大的現(xiàn)實意義?，F(xiàn)行保護(hù)草原的政策主要有退牧還草工程、生態(tài)移民工程、圍封轉(zhuǎn)移、建設(shè)草庫倫、草原保植和飛播種草等。盡管這些政策已經(jīng)發(fā)揮了巨大作用，但是仍未能扭轉(zhuǎn)草原退化的局面。因此，在制定和完善政策的時候，應(yīng)當(dāng)盡量多考慮牧民的意愿，從下而上形成決策，正如草原生態(tài)法傳統(tǒng)一樣。

（二）摒棄蒙古族生態(tài)法中的不合理成分，使習(xí)慣法與國家法接軌

盡管蒙古族生態(tài)法中孕育著豐富的合理因素，但也不能否認(rèn)在游牧民的文化體系中也孕育了一些不利于草原平衡的習(xí)慣。傳統(tǒng)社會的蒙古族，把牲畜數(shù)量的多少視為財富和地位的象征，這在一定程度上助長了超載放牧。同時，蒙古族生態(tài)法的運行過程具有很大隨意性，也是要摒棄的因素。另外，“罰畜”傳統(tǒng)到今天往往體現(xiàn)為刑事案件用“私了”的方法解決，一定程度上影響了國家制定法的統(tǒng)一性和嚴(yán)肅性。這既需要國家加強法律的宣傳力度，使國家的強行法深入人心；也需要國家在訴訟機(jī)制上進(jìn)行完善，例如組成巡回法庭，深入案發(fā)地或當(dāng)事人的住所地辦案，既方便當(dāng)事人訴訟，又用實際案例加強對農(nóng)牧民的法律意識教育，逐步懂得如何應(yīng)用國家的公法維護(hù)自己的權(quán)利。

（三）完善民族區(qū)域自治制度是國家法與民間法融合的一個重要途徑

篇3

【摘要】

目的 探討枸櫞酸鉀對大鼠腎草酸鈣結(jié)石骨橋蛋白（osteopontn，OPN）表達(dá)的影響。方法 32只8周齡雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為正常對照組、枸櫞酸鉀組、結(jié)石組(乙二醇和氯化氨)、結(jié)石+枸櫞酸鉀組，每組8只，采用乙二醇和氯化銨誘導(dǎo)大鼠腎草酸鈣結(jié)石模型進(jìn)行試驗研究。連續(xù)給藥4周后處死大鼠取腎組織，采用HE染色和免疫組化法檢測各組腎結(jié)石形成及OPN表達(dá)情況。結(jié)果 結(jié)石+枸櫞酸鉀組大鼠腎結(jié)石形成比結(jié)石組明顯減少(P＜0.05)；結(jié)石+枸櫞酸鉀組大鼠的OPN表達(dá)比結(jié)石組明顯降低(P＜0.05)；枸櫞酸鉀組OPN表達(dá)與對照組相比無明顯變化( P＞0.05)。結(jié)論 枸櫞酸鉀可能通過減少草酸鈣結(jié)晶的形成而減輕對腎小管上皮細(xì)胞的損傷，降低腎OPN的表達(dá)。

【關(guān)鍵詞】 枸櫞酸鉀；骨橋蛋白；腎結(jié)石

Abstract: Objective To examine the effect of citrate on osteopontin(OPN) expression of urinary oxalate calcium (CaOx) stone formation in rats.Methods thirty-two adult male wistar strain rats were randomly pided into four groups (n=8 each): normal control group、the citrate group、stone formation group（ethylene glycol(EG)and ammonium chloride）and the stone formation-citrate group.After 4 weeks medication，the rats were killed and kedney was used for histological examination.The formation of renal stone and the expression of OPN in rat renal tissue of each group were determined with HE staining and Immunohistochemistry methods.Results The formation of renal stone in the stone formation-citrate group was significantly lower than that in the stone group.The expression of OPN in the stone formation-citrate group was significantly less than that in the stone group.However those in the contol group and in cirate group showed the same.Conclusion Citrate can reduce crystal formation and crystal damaging on renal duct and decrease OPN expression.

Key words:citrate; OPN; CaOx stone

泌尿系結(jié)石是泌尿外科常見的疾病。雖然泌尿系結(jié)石的治療技術(shù)不斷提高，治療策略不斷完善，但其復(fù)發(fā)率卻無明顯降低［1］。既往研究表明，枸櫞酸鉀對結(jié)石的預(yù)防起重要的作用，尤其對草酸鈣結(jié)石的發(fā)生或形成具有抑制作用［2］。目前，枸櫞酸鉀對骨橋蛋白（osteopontn，OPN）表達(dá)的影響尚不完全清楚。本文通過枸櫞酸鉀對OPN表達(dá)的研究，希望能夠為預(yù)防結(jié)石的產(chǎn)生提供新的依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

8周齡健康雄性Wistar大鼠32只，體重180～220g，由上海第二軍醫(yī)大學(xué)動物實驗中心提供。乙二醇、枸櫞酸鉀和氯化氨購于上海長城華美儀器化劑公司。兔抗OPN的多克隆抗體購于北京博奧森生物科技有限公司，二步法免疫組化試劑盒購于上海長島生物科技有限公司。

1.2 動物處理

以1%乙二醇和1%氯化氨混合溶液為致石劑。大鼠飼養(yǎng)1周，充分適應(yīng)環(huán)境后，隨機(jī)分成4組，每組8只。正常對照組以純凈水2mL灌胃，枸椽酸鉀組以25%枸椽酸鉀溶液1mL·100g-1灌胃，結(jié)石組以致石劑2mL灌胃，結(jié)石+枸椽酸鉀組以致石劑2mL灌胃同時用25%枸椽酸鉀溶液1mL· 100g-1灌胃。各組動物每日灌胃1次，連續(xù)4周。實驗結(jié)束后，取左側(cè)腎臟，用10%甲醛固定，在腎臟中段橫取2mm厚的組織塊，進(jìn)行梯度乙醇脫水、用二甲苯透明、浸蠟、包埋，Leitz1512切片機(jī)作連續(xù)切片4張，厚度為5μm。

1.3 常規(guī)HE染色

切片以二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化。入蘇木素染液5min，1%鹽酸乙醇溶液分化5s，自來水藍(lán)化30min，1%伊紅染液1min，各級乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹脂封片。

1.4 免疫組化

對大鼠腎組織的石蠟切片，厚度5μm，行免疫組化染色：① 切片以二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化，3%H2O2室溫孵育消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性；② 磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗，0.01mol·L-1檸檬酸緩沖液做抗原修復(fù)；③ 滴加兔抗OPN多克隆抗體（1∶200稀釋，每次實驗均設(shè)2張陰性對照，以PBS代替一抗)，4℃過夜；④ PBS沖洗，滴加二抗，室溫30min；⑤ PBS沖冼，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，脫水，中性樹膠封片。

1.5 顯微鏡觀察

用Olympus光學(xué)顯微鏡(×400)觀察各組別的常規(guī)HE切片及免疫組化切片。HE切片 “-”表示無結(jié)石及結(jié)晶沉淀物;“+”表示少量結(jié)晶沉淀物;“++”表示有結(jié)晶沉淀物，有時可見游離結(jié)石形成;“+++”表示有大量的結(jié)晶，并有游離結(jié)石形成。免疫組化切片按“+”表示腎小管胞漿輕度染色(淺黃色);“++”表示腎小管胞漿中度染色(黃色);“+++”表示腎小管胞漿明顯染色(深棕黃色)。隨機(jī)選取5個視野進(jìn)行分級并統(tǒng)計分析。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法

數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件，采用Kruskal-Walls非參數(shù)檢驗對4組大鼠腎臟成石程度和OPN表達(dá)強度進(jìn)行統(tǒng)計分析，采用Mann-whitney非參數(shù)檢驗進(jìn)行組間兩兩比較。

2 結(jié)果

2.1 大鼠腎臟病理切片中草酸鈣晶體形成情況

草酸鈣結(jié)晶在常規(guī)病理切片為無色透明晶體。本實驗中對照組和枸櫞酸鉀組大鼠腎小管未見擴(kuò)張和草酸鈣晶體沉積（如圖1A、B，見封2）；結(jié)石組大鼠部分腎組織腫脹，表面點狀分布黃白色結(jié)晶或鈣化，鏡下見多數(shù)管腔內(nèi)存在彌漫散布無色透明，大多呈連續(xù)片狀結(jié)晶，皮質(zhì)多于髓質(zhì)，結(jié)晶體主要位于近曲小管和遠(yuǎn)曲小管，上皮細(xì)胞明顯腫脹、變性、壞死，管腔內(nèi)可見嗜伊紅樣染色壞死物質(zhì)及部分脫落上皮細(xì)胞，且腎間質(zhì)有炎性細(xì)胞浸潤（如圖1C，見封2）；枸櫞酸鉀+結(jié)石組腎小管腔僅見較少散在草酸鈣結(jié)晶存在，管腔擴(kuò)張程度較輕（如圖1D，見封2）。大鼠腎臟成石程度分級結(jié)果詳見表1。表1 各組大鼠腎臟成石程度分級（略）

2.2 免疫組化結(jié)果

OPN在所有4組中均有表達(dá)，在腎近曲小管和遠(yuǎn)曲小管、亨利氏袢和集合管(主要髓袢升支)均明顯表達(dá)，而在皮質(zhì)腎小球中則未見表達(dá)。對照組OPN微弱表達(dá)（圖2A，見封2）；枸櫞酸鉀組OPN呈微弱表達(dá)（圖2B，見封2）；結(jié)石組大鼠腎組織中OPN表達(dá)增強（圖2C，見封2）；結(jié)石+枸櫞酸鉀組腎組織OPN的表達(dá)（圖2D，見封2）強于對照組，較結(jié)石組弱。大鼠腎臟骨橋蛋白程度分級結(jié)果詳見表2。表2 各組大鼠腎臟骨橋蛋白程度分級（略）

2.3 腎臟成石程度與OPN表達(dá)程度的關(guān)系

在成石強度為“+++”的結(jié)石組大鼠腎組織中OPN表達(dá)明顯增強為“+++”;而對照組和枸櫞酸鉀組大鼠OPN表達(dá)則均呈弱陽性“+”。將每只大鼠的成石程度與OPN表達(dá)強度相對應(yīng)，可以發(fā)現(xiàn)腎臟內(nèi)結(jié)石形成越明顯，腎組織OPN表達(dá)越強，反之腎臟內(nèi)結(jié)石形成越少，則腎組織內(nèi)OPN表達(dá)越弱。

寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)報32卷

3 討論

結(jié)石患者尿中鈣和草酸鹽經(jīng)常處于過飽和狀態(tài)，它們是腎結(jié)石形成的主要原因之一。正常人之所以不形成結(jié)石，是尿中存在著足夠的結(jié)石形成抑制物，主要包括OPN、TammHorsfall蛋白、腎鈣素、尿凝血酶原片段1等。

OPN為一帶負(fù)電荷的多功能磷酸化糖蛋白，可由全身多個組織和器官分泌。腎臟OPN主要由亨利氏襻、近曲小管和腎表面上皮分泌，與草酸鈣結(jié)晶具有強親和力，能夠抑制尿液中草酸鈣結(jié)晶體的成核、生長和聚集，是一種草酸鈣結(jié)晶的強抑制物［3］。正常情況下OPN不與存在于腎小管上皮細(xì)胞的基底膜面的αvβ3整合素［4］結(jié)合，當(dāng)上皮細(xì)胞損傷，例如由高草酸尿、高鈣尿誘發(fā)的損傷，可擾亂細(xì)胞極性，使整合素取向到小管腔內(nèi)表面與草酸鈣結(jié)晶黏附的OPN結(jié)合，形成結(jié)石的生成位點，促使草酸鈣晶體成核、生長、聚集，生成結(jié)石［5］。

枸椽酸是結(jié)石抑制因子之一［2］，在正常情況下，口服枸櫞酸鉀，大約80%被體內(nèi)吸收氧化，保留鉀離子而產(chǎn)生堿負(fù)荷：一方面提高尿pH值而使尿枸櫞酸排泄增加，另一方面慢性鉀離子存留可使尿鈣降低［6-7］；約20%未在人體中氧化，直接代謝進(jìn)入尿液中的枸櫞酸對尿中草酸鈣結(jié)晶和磷酸鈣結(jié)晶形成較強的抑制作用，對于防治鈣性結(jié)石具有重要意義［8］。

本實驗中，對照組和枸椽酸鉀組大鼠OPN表達(dá)呈弱陽性；結(jié)石枸椽酸鉀組大鼠僅1只OPN表達(dá)呈弱陽性，另外7只 呈不同程度的增強；結(jié)石組OPN表達(dá)均高于對照組。并顯示大鼠的成石程度與OPN表達(dá)強度相一致，即腎組織內(nèi)結(jié)石形成越明顯，OPN表達(dá)越強；而腎組織內(nèi)結(jié)石形成越少，OPN表達(dá)越弱。OPN的過高表達(dá)是由大鼠用乙二醇和氯化銨灌胃后誘導(dǎo)產(chǎn)生高草酸尿、高鈣尿和草酸鈣晶體在腎臟的沉積共同調(diào)控所致。YASUI等研究表明，用乙二醇和α1，25-(OH)2-VitD3灌胃而形成的草酸鈣腎結(jié)石大鼠模型中，腎小管細(xì)胞中OPNmRNA表達(dá)明顯增強［9］。本實驗從蛋白水平證明用乙二醇和氯化氨灌胃而形成的草酸鈣腎結(jié)石大鼠模型中，腎小管細(xì)胞中OPN的表達(dá)明顯增強。OPN的這種分泌情況，是機(jī)體的一種防御機(jī)制。枸櫞酸鉀能抑制草酸鈣結(jié)晶的形成，降低草酸鈣結(jié)晶對腎小管的損害，對腎小管有保護(hù)作用。居正華等發(fā)現(xiàn)，枸櫞酸鉀可使尿枸櫞酸及TammHorsfall蛋白增高，并減少草酸鈣結(jié)晶的聚集，減低結(jié)石的形成［10］。

本研究的結(jié)果表明，枸櫞酸鉀可能通過減少草酸鈣結(jié)晶的形成和結(jié)晶對腎小管上皮細(xì)胞的損傷，降低腎OPN的表達(dá)，并減少OPN黏附于受損的上皮細(xì)胞表面的成核位點，使草酸鈣晶體在腎臟的沉積減少，從而減少大鼠腎結(jié)石形成。枸櫞酸鉀影響OPN表達(dá)的具體機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

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