導(dǎo)語：如何才能寫好一篇動物行為學(xué)研究，這就需要搜集整理更多的資料和文獻，歡迎閱讀由公務(wù)員之家整理的十篇范文，供你借鑒。

篇1

關(guān)鍵詞：導(dǎo)課 實驗 思維 成功 興趣

我校是一個小縣城的三類學(xué)校，學(xué)生基礎(chǔ)普遍不好，在遭受中考的挫敗后，學(xué)習(xí)動力嚴重不足，如何將他們重新拉回課堂，恢復(fù)他們的自信，重新投入到緊張的高中學(xué)習(xí)生活當(dāng)中，這是最為緊迫的問題。

成功教育理論讓我受到啟發(fā)，高中物理課堂教學(xué)中學(xué)生在課堂上的“冷場”、“局外人”現(xiàn)象正是由于缺少成功的體驗，缺少參與的熱情。因此高中物理課堂要尋找學(xué)生感興趣的話題，站在學(xué)生的生活經(jīng)驗上，激發(fā)他們的興趣，讓每一個學(xué)生體驗到暢所欲言帶來的樂趣與成就感。

一、運用新穎的導(dǎo)課方法，引發(fā)學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣

運用小魔術(shù)、小實驗、講故事、說新聞、看圖片、幻燈片及多媒體等手段，引導(dǎo)學(xué)生從情景中進入角色。

[案例1]大氣壓強――小魔術(shù)引入

一進入課堂老師手拿著一個碗問學(xué)生，誰能夠用手掌把碗吸引住而不往下掉呢？學(xué)生都搖頭表示不能，此時，老師右手拿碗（事先把碗底弄濕），往左手手掌心上用力壓一下，排除碗底里面的空氣，慢慢地轉(zhuǎn)動左手手掌，使手掌心朝下，然后松開右手，看到了碗被左手掌心吸住了而不往下掉。學(xué)生驚嘆之余，再引出大氣壓強，學(xué)生興趣倍增。

[案例2]慣性――小實驗引入

在引入慣性新課時，老師可用這樣一個實驗來引入。在一個盛有半杯水的燒杯口上放一塊硬塑料片，塑料片上放一個雞蛋，用不銹鋼尺（相當(dāng)于彈片）與塑料片垂直后拉開，問學(xué)生，“放手后，雞蛋會怎樣？”此時學(xué)生的注意力都集中到了雞蛋上，有的說雞蛋會隨塑料片飛出來，有的說不會。這時，老師把變彎的鋼尺一松手，“啪”的一聲，塑料片飛出去了，只見雞蛋穩(wěn)穩(wěn)當(dāng)當(dāng)?shù)芈湓谒?，學(xué)生緊張而專注地目睹了這一切，此時，再問“為什么呢？”學(xué)生注意力高度集中，興趣盎然。

[案例3]磁現(xiàn)象――故事引入

在講授磁現(xiàn)象這一節(jié)時，可以用講故事的方式引入。秦始皇在建阿房宮時，為了防止刺客進入宮內(nèi)，在進宮大門的兩邊放置兩塊大磁石。此時問：你們知道為什么嗎？課堂上頓時活躍起來。

[案例4]樂音三特征――視頻引入

在引入樂音三特征這一節(jié)時，首先讓學(xué)生觀看《交響樂音樂會》錄象片段，讓學(xué)生感受到樂音的高低起伏（音調(diào)），輕重大?。懚龋?，和不同樂器聲音的差別（音色）。這樣的視頻引入，把平淡的文字表達演化為生動直觀的形象，把抽象的知識演化為具體的可以感受到的東西，能迅速抓住學(xué)生的眼球，使學(xué)生產(chǎn)生濃厚的興趣。

導(dǎo)入新課時提出一些日常生活中常見的物理現(xiàn)象，引起學(xué)生的好奇心，從而引發(fā)學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣。例如：講壓強時問：為什么我們坐在沙發(fā)上比坐在子上舒服一些？磨刀不誤砍柴工的物理道理是什么？在講摩擦起電時問：油罐車為什么拖一條尾巴――鐵鏈？冬季晚間脫毛衣時往往看到火星閃爍？在講影響浮力大小的因素時問：為什么生餃子或元宵沉在水底，煮熟后浮在水面之上？

二、新、奇、懸、趣、迷的實驗，使學(xué)生見之生趣

眾所周知，物理學(xué)是一門以實驗為基礎(chǔ)的科學(xué)，對于中學(xué)生來說，新、奇、懸、趣、迷的實驗，會使他們感到新鮮和好奇，可以給他們帶來饒有興趣的樂趣，在此基礎(chǔ)上，才能使他們有效地掌握物理基礎(chǔ)知識，使之逐步取得探索物理知識的主動權(quán)，掌握學(xué)習(xí)方法，培養(yǎng)自學(xué)能力。

[案例1]學(xué)習(xí)“功”這一章時，對功、功率、機械效率三個概念容易混淆，為了解決這一難題，可以設(shè)計一堂比賽形式的實驗課，比比誰做的功最多，誰的功率最大，誰的機械效率最高。每個同學(xué)都抱五塊磚以最快的速度從一樓跑上四樓，設(shè)計方案，測出自己做的功，功率、機械效率。然后集體討論評選出四個“全班之最”。上樓最快的，做功最多的，功率最大的，機械效率最高的，四項冠軍分別由四位同學(xué)獲取。這一結(jié)果把學(xué)生的思維集中到了同一個焦點上，為什么做功最多的，功率不是最大？機械效率也不是最高？為什么上樓最快的，做功卻不是最多？通過這樣生動有趣的實驗課，把本來混淆不清的概念變得簡單易懂，把理論知識轉(zhuǎn)變成了親眼所見的事實，使學(xué)生在歡快的“游戲”中，學(xué)到實在的知識。

[案例2] 例如講“熱傳遞”時，演示“開水煮活魚而魚不死”，吸引學(xué)生的注意力。在“慣性、慣性定律”教學(xué)中，裝滿水的杯子，當(dāng)水杯突然向左運動，杯內(nèi)的水會從杯口溢出來嗎？杯內(nèi)的水是向什么方向溢出的？為什么會發(fā)生這種現(xiàn)象？教師在講臺前認真演示，請同學(xué)回答現(xiàn)象，這樣引入新課，也能激發(fā)學(xué)生學(xué)新知識的欲望。除演示實驗作為引子外，還可以講述物理學(xué)史的內(nèi)容，來開闊學(xué)生眼界，了解物理學(xué)家及其思想工作、方法，來增強物理教學(xué)的魅力；而講述一些有趣味的小故事，也能吸引學(xué)生的注意力，引起學(xué)生興趣。

[案例3]給學(xué)生適時講授有趣味的故事是滿足學(xué)生學(xué)習(xí)興趣的一種補償方式。例如在講到玻意耳――-馬略特定律的時候，介紹定律的來歷以及不同國家對定律的不同稱呼可以吸引學(xué)生的注意力，為進一步學(xué)習(xí)創(chuàng)造良好的氛圍。當(dāng)講到歷史上曾有一位學(xué)者叫赫曼，為了驗證天電（閃電）與它電是否是同種電，竟被雷電擊死在實驗臺上時，課堂一片寂靜。當(dāng)講到秦始皇在建阿房宮時用磁石來防刺客時，課堂上又是一片活躍氣氛。

[案例4]舉例寓趣，置疑設(shè)趣，習(xí)題融趣，在課堂教學(xué)中，教師可以適時地穿插一些日常生活中富有趣味性的例子，來說明物理原理。例如講授“聲音可否在固體中傳播”時，舉例：“伏地聽聲”的故事，人可以伏在荒野的地上聽到遠處的馬蹄聲。在進行液化教學(xué)時，舉例：夏天從冰箱里拿出來的雞蛋會“出汗”，用此來說明液化原理，就可以活躍課堂氣氛，激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)的興趣。在課堂教學(xué)中，“設(shè)疑”也是教學(xué)中一個重要手段，它可以開發(fā)學(xué)生思路，激發(fā)學(xué)生探索知識的興趣，使其主動去學(xué)。正因為如此，教師不僅善于釋疑，以激發(fā)學(xué)生的好奇心，引發(fā)學(xué)生的注意力，喚起學(xué)生學(xué)習(xí)物理知識的興趣。例如：雞蛋握在手心中不容易捏破，而放在桌上，只要一個手指往下一按，就壓破？為什么熱粥要一面攪拌，一面吹氣，才使稀飯涼得快？象這類設(shè)差別，既貼近生活，又能激發(fā)學(xué)生的好奇心，引起興趣。

三、努力提供“成功的機會”，增強學(xué)生學(xué)習(xí)興趣

不論是教師的講授，還是實驗，都應(yīng)努力創(chuàng)造一種有利于學(xué)生獨立思考的情景，始終將學(xué)生置于探索者、發(fā)現(xiàn)者的位置，在條件許可的情況下應(yīng)盡可能將物理課移到實驗室去上，演示實驗盡可能讓學(xué)生參與，讓學(xué)生切身體會到成功的樂趣。

篇2

在一所學(xué)校里，無論是校園文化建設(shè)還是課堂改革，無論是學(xué)校規(guī)劃發(fā)展還是學(xué)生養(yǎng)成教育，都需要教師的參與，教師的處事態(tài)度、工作方法將直接影響到學(xué)校工作質(zhì)量。而長時間單調(diào)、繁重的教學(xué)生活，或多或少的都會使教師產(chǎn)生職業(yè)倦怠，因此，如何激發(fā)教師工作的積極性，充分挖掘教師的潛能，就成為每一位學(xué)校管理者不得不面對的一個實際問題。

一提到調(diào)動教師積極性，很多學(xué)校管理者馬上會想到通過多發(fā)獎金和物質(zhì)獎品的方法來激發(fā)教師的工作熱情，這的確是最簡單、最直接、最容易被教師接受的一種方法。但是對于義務(wù)教育階段的農(nóng)村中小學(xué)來說，有限的經(jīng)費維持平時的辦公開支還捉襟見肘，根本就拿不出用于獎勵教師的“富?！卞X。因此，在農(nóng)村中小學(xué)，我們必須把調(diào)動教師積極性的重點放在精神獎勵上，讓教師發(fā)自內(nèi)心地去愛教、樂教、愿意從教。

一、弘揚主旋律，宣傳新的教育政策，對教師們進行正面引導(dǎo)

目前國家的教育理念已經(jīng)開始改變，例如：從提倡教師像蠟燭一樣燃燒自己照亮別人轉(zhuǎn)向鼓勵中小學(xué)教師發(fā)展自我、成名成家；從大規(guī)模的合校并點轉(zhuǎn)向區(qū)域化、均衡化的教育發(fā)展。十八屆三中全會更是提出了“立德樹人”的教育理念，改變科目的分值設(shè)置，改變功利化的教育模式，讓教育回歸原生態(tài)。為了提高教師地位，對教師任職資格制度也進行了改革，提高了獲取教師任職資格的門檻，即使師范院校畢業(yè)的學(xué)生也必須通過國家統(tǒng)一組織的教師資格考試，才能取得教師任職資格證書。此外，教師職稱制度也在逐步改革，在中小學(xué)教師中已經(jīng)開始增加正高級職稱的名額。管理者可以通過這些正面信息的傳達讓教師知道國家正在想辦法提高教師待遇，引導(dǎo)他們積極地去對待教育工作。

二、學(xué)校要建立公平、公正的管理制度，做到規(guī)范化辦學(xué) 學(xué)校的管理制度都是為教學(xué)工作服務(wù)的，涉及學(xué)校所有教師的切身利益。因此，在制定管理制度時一定要尊重廣大教師的意見。學(xué)校管理制度的制定應(yīng)該分以下幾個步驟：1調(diào)查研究。制度的制定是為了解決某一方面的問題，不調(diào)查不研究就沒有發(fā)言權(quán)，所以第一步就是調(diào)查研究、了解實情。2．組織教職工委員會討論，拿出初稿。3．把初稿分發(fā)給教師并征求他們的建議。4．對教師提出的建議進行匯總并提交教職工委員會再次討論定稿。5．學(xué)校大會公布實施。

比如：《沙河五中績效工資分配方案》就是在教師全員參與的情況下制定的，并且隨著學(xué)校實情的變化不斷進行修改。修改的過程也是透明的，完全是由教師討論并提出反饋建議，學(xué)校再組織教師代表整理建議，并依照大多數(shù)教師的建議進行修改。發(fā)放績效工資時，學(xué)校嚴格按照制度執(zhí)行，對于分配結(jié)果教師也都能夠欣然接受。．

三、學(xué)校管理者要擺正自己的位置，演好自己的角色，提高自身的素質(zhì)

1．借助榜樣的力量。首先，學(xué)校管理者要做教師的榜樣，要求教師做到的事自己一定要做到、做好。在道德標準、思想作風(fēng)上，要高標準要求自己，做教師生活中的楷模；在教學(xué)工作中，要提高自身的教育教學(xué)研究能力，積極主動地參加學(xué)校的各項教學(xué)活動，做教師工作中的領(lǐng)路人。其次，從我校教師隊伍內(nèi)部找典型、樹榜樣，比如我們學(xué)校的崔然老師課堂教學(xué)理念先進，善于創(chuàng)新，在教學(xué)改革上常有突破，就可以把她作為課改榜樣；陳捧書老師，埋頭苦干從不計較工作得失，30年如一日，教學(xué)工作從未放松，可以作為師德楷模。身邊榜樣的力量，更能激發(fā)教師的積極性。

2．學(xué)會服務(wù)于教師。作為學(xué)校管理者，不應(yīng)高高在上，而應(yīng)多為教師服務(wù)，在生活上關(guān)心他們，在工作上幫助他們，在業(yè)務(wù)上指導(dǎo)他們，融入他們中間去，以此調(diào)動他們的積極性，營造和諧的工作氛圍。

從人性的角度來講，一直要求教師把全部精力放在工作中也是不現(xiàn)實的，對此，我們大膽提出了“家庭第一，健康第二，工作第三”的口號。讓教師看到學(xué)校管理者對他們的愛護，當(dāng)他們真正感受到學(xué)校管理者的關(guān)心之后，反而會做到“工作第一，健康第二，家庭第三”。我想這也許就是《孫子兵法》上所說的“不戰(zhàn)而屈人之兵”的道理吧！

3．學(xué)會與教師溝通。教師是小知識分子，普遍愛面子、自尊心強，在與他們溝通時要適時、適地、適度。對于個性特別強的教師，要運用多種渠道進行溝通，要給教師講明道理：要想獲得自尊，就必須自強，要想在工作中做出成就，就必須有勇于獻身的精神，有投入才會有收獲。不實在、不踏實、不努力、不奮斗、不積極的人永遠得不到別人的尊重。

四、規(guī)劃教師的專業(yè)化發(fā)展，為教師們樹立一個明確的奮斗目標

教師長年在學(xué)校里閉門教書，從初一教到初三，又從初三教到初一，視野被固定在一個小范圍內(nèi)，有的教師經(jīng)過幾輪教學(xué)小有成就沾沾自喜，停步不前，進而產(chǎn)生職業(yè)的倦怠。因此，必須要把老師從自滿的“牢籠”中解放出來，要為教師謀劃專業(yè)發(fā)展之路，促使他們不斷充實自己、改變自己。

1．給教師一個明確的奮斗目標。學(xué)校管理者在規(guī)劃學(xué)校愿景的時候，要幫助每位教師找到自己的發(fā)展方向，并制定個人的發(fā)展計劃。例如：為了讓教師認識到自身價值，看到自己的發(fā)展?jié)摿?，學(xué)校每年都要組織一些活動，讓教師在活動中展示自我，學(xué)會溝通．找回自信。

篇3

【關(guān)鍵詞】 地氟醚

關(guān)鍵詞: 地氟醚;缺血預(yù)處理;腦缺血，暫時性

摘 要:目的 探討地氟醚預(yù)處理對腦局灶性缺血損傷的影響. 方法 采用大腦中動脈阻閉（middle cerebral artery oc-clusion，MCAO）模型，將30只雄性SD大鼠隨機分成3組:對照組（C組，n=10），動物不接受任何處理;地氟醚組（Des組，n=10），動物每日接受1h的地氟醚預(yù)處理（57mL L-1 地氟醚，940mL L-1 O2 ），連續(xù)5d;吸O2 組（O2 組，n=10），動物每日接受1h的吸O2 預(yù)處理（940mL L-1 O2 ，無地氟醚），連續(xù)5d.所有動物均在大腦中動脈阻閉120min后恢復(fù)再灌注，觀察再灌注后24h動物神經(jīng)行為學(xué)改變及腦梗死容積. 結(jié)果 再灌注后24h神經(jīng)行為學(xué)評分Des組明顯低于C組和O2 組（P

Keywords:desflurane;ischemic preconditioning;cerebral is-chemia，transient

Abstract:AIM To investigate if desflurane preconditioning induces ischemic tolerance against neuronal damage produced by middle cerebral artery occlusion（MCAO）in rats.METHODS Thirty male SD rats weighing280～320g were randomly pided into three groups:control group（n=10），C group，without pretreatment;desflurane preconditioning group（Des group，n=10），which were pretreated with inhalation of57mL L-1 desflurane in940mL L-1 O2 1h per day for5d;and oxygen preconditioning group（O2 group，n=10），which inhaled940mL L-1 O2 1h per day for5d.Right MCAO（120min）was induced by a3-0nylon thread with round tip inserted cranially into right internal carotid artery.The neurologic deficit score（NDS）was evaluated24h after reperfusion and the infarct volume was determined24h after reperfusion.RESULTS The NDS of the Des group was lower than the other two groups（P

0 引言

自Murry等［1］ 1986年發(fā)現(xiàn)心肌缺血預(yù)處理現(xiàn)象以來，人們對缺血預(yù)處理（ischemic preconditioning，IP）進行了大量的研究.但IP是一種損傷性預(yù)適應(yīng)，研究用藥物誘導(dǎo)預(yù)適應(yīng)來替代IP成為一種必然趨勢.因此有人用化學(xué)預(yù)處理來模擬缺血預(yù)處理［2］ .最近國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)常用揮發(fā)性麻醉藥異氟醚、七氟醚、地氟醚等預(yù)處理可在心肌缺血中模擬產(chǎn)生缺血預(yù)處理效應(yīng)［3-7］ ，我們以前的研究發(fā)現(xiàn)，異氟醚預(yù)處理可誘導(dǎo)腦缺血耐受［8］ .地氟醚作為一種新型鹵素化醚類吸入性全麻藥，人們對其是否具有腦保護作用進行了大量研究，發(fā)現(xiàn)其與異氟醚等其他揮發(fā)性麻醉藥一樣，對腦缺血損傷具有保護作用［9，10］ ，但采用大腦中動脈阻閉（MCAO）模型實施預(yù)處理腦保護作用方面的研究報道甚少.我們旨在探討地氟醚預(yù)處理模擬IP的可行性.

1 材料和方法

1.1 材料 實驗動物由第四軍醫(yī)大學(xué)實驗動物中心提供.30只雄性SD大鼠（280～320g），隨機分成3組（每組n=10）:對照組（C組）、吸O

2 組（O2 組）和地氟醚預(yù)處理組（Des組）.對照組動物不接受任何處理;地氟醚組動物每日接受1h的地氟醚預(yù)處理（57mL L-1 地氟醚，940mL L-1 O2 ），連續(xù)5d;吸O2 組動物每日接受1h的吸O2 預(yù)處理（940mL L-1 O2 ，無地氟醚），連續(xù)5d.

1.2 方法

1.2.1 局灶性腦缺血模型 最后一次預(yù)處理結(jié)束24h后，動物用40mL L-1 異氟醚（氧流量4L min-1 ）面罩吸入誘導(dǎo)麻醉［8］ ，20mL L

-1 異氟醚（氧流量1.5～2.0L min-1 ）面罩持續(xù)吸入維持麻醉.MCAO模型采用右側(cè)頸內(nèi)動脈尼龍線線栓法，參考Tatlisumak等［11］ 根據(jù)Longa等［12］ 的改良方法，手術(shù)時間15～25min，術(shù)畢1min內(nèi)動物基本清醒，恢復(fù)活動.阻閉120min后再次用異氟醚快速麻醉動物，抽出尼龍線，恢復(fù)再灌注.體溫由直腸溫探頭連接多功能監(jiān)測儀（Spacelab，USA）監(jiān)測，并用烤燈維持在37.0～37.5℃.

1.2.2 動物恢復(fù)及神經(jīng)行為學(xué)評估 麻醉蘇醒后將動物放回鼠籠，自由飲食.腦缺血再灌注后24h，由一不了解分組情況的觀察者評估記錄神經(jīng)行為學(xué)評分，方法參考Longa等［12］ 的報道，即6級評分法:0級，無功能障礙;1級，不能伸展左側(cè)前肢;2級，向左側(cè)旋轉(zhuǎn);3級，向左側(cè)傾倒;4級，無自主活動伴意識抑制;5級，死亡.

1.2.3 腦梗死灶測量 24h神經(jīng)行為學(xué)評分完成后，動物用異氟醚深麻醉后被處死，迅速取出鼠腦，置入冰鹽水中10min，取冠狀切面均勻切成2mm厚腦片，迅速放入TTC溶液中，置入恒溫水浴槽中（HH-W21-Cr600，廣東汕頭醫(yī)用設(shè)備廠），水溫37℃，染色30min，最后用40g L-1 甲醛緩沖液固定.24h后用數(shù)碼相機（Kodak，DC240，USA）拍照，輸入計算機，用圖像處理軟件（Adobe，Photoshop5.0）計算梗死面積（粉紅色區(qū)為正常腦組織，白色區(qū)為梗死區(qū)），各腦片梗死面積和乘以厚度（2mm）為總的梗死容積.統(tǒng)計學(xué)處理:數(shù)值用x ±s表示.梗死容積用單因素方差分析方法（ANOVA）統(tǒng)計.神經(jīng)行為學(xué)評分用非參數(shù)檢驗（即Kruskal-Wallis方法），P

2 結(jié)果

2.1 神經(jīng)行為學(xué)改變 術(shù)后對照組和吸O2 組動物出現(xiàn)明顯神經(jīng)功能障礙，Des組神經(jīng)功能損傷明顯輕于前兩組.再灌注24h神經(jīng)行為學(xué)評分，與對照組 （2.0±0.7）相比，O2 組為2.0±0.6，Des組為0.9±0.6（P

圖1 略

2.2 腦梗死容積 再灌注24h腦梗死容積，與對照組（276.10±155.63）mm3 相比，O2 組為（253.84±174.39）mm 3 （P>0.05），Des組為（59.56±30.37）mm3 （P

圖2 略

3 討論

藥物性預(yù)處理是近年來研究熱點之一.氟醚類吸入麻醉藥如異氟醚、七氟醚和地氟醚等預(yù)處理可減輕心肌缺血損傷［3-7］ ，但采用MCAO模型行地氟醚預(yù)處理腦保護作用研究尚未見報道.本研究結(jié)果表明地氟醚可誘導(dǎo)腦缺血耐受產(chǎn)生而對大鼠短暫性局灶性腦缺血引起的腦缺血損傷起保護作用.Kersten等［3］ 進一步研究發(fā)現(xiàn)異氟醚誘導(dǎo)心肌預(yù)適應(yīng)作用與其激活心肌細胞上KATP通道有關(guān)，KATP通道選擇劑優(yōu)降糖取消其對缺血再灌注心肌的保護作用.本研究中地氟醚是否同樣經(jīng)激活KATP通道誘導(dǎo)腦缺血預(yù)適應(yīng)尚待進一步研究.

地氟醚是20世紀60年代由Ross Terrell首先合成的一種吸入麻醉劑，其血液和組織溶解度低.由于其合成困難，加之揮發(fā)罐的特殊性，曾一度限制了其在臨床中的應(yīng)用，隨著醫(yī)學(xué)的發(fā)展，其易于調(diào)控維持，麻醉恢復(fù)快［13，14］ ，在鈉石灰中穩(wěn)定［15］ ，加之抗肝降解作用的優(yōu)越性，應(yīng)用日益廣泛.因此，本研究結(jié)果具有潛在的臨床應(yīng)用價值.對于潛在腦梗死誘因的高危人群，在進行?？浦委煹耐瑫r，不妨采用異氟醚或地氟醚進行預(yù)處理，將會減輕腦梗死后的損傷.當(dāng)然，其臨床預(yù)處理方案尚需進一步研究.

本研究僅觀察雄性SD大鼠吸入57mL L-1 （1MAC［16］ ）地氟醚，每日1h，連續(xù)5d的預(yù)處理效果，主要參照異氟醚預(yù)處理的實施方案［8］ .但不同地氟醚吸入濃度和時間對腦的預(yù)處理效應(yīng)如何以及其作用機制尚待進一步研究.

參考文獻:

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［14］Saidman LJ.The rate of desflurare in the plactice of anesthesia ［J］.Anesthesiology，1991;74:399.

篇4

關(guān)鍵詞：帕金森?。淮笫?；6-羥基多巴胺

帕金森?。≒D）是常見的中老年人中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，其病因及發(fā)病機制目前尚不清楚， 研究認為可能與遺傳、環(huán)境因素、線粒體功能障礙、興奮性氨基酸、氧化應(yīng)激、過多的自由基形成及神經(jīng)生長因子缺乏等有關(guān)，是多種機制協(xié)同作用的結(jié)果[1-2]。偏側(cè)6-OHDA損毀模型是目前使用最多的PD動物模型之一，其在癥狀、病理、生化方面的表現(xiàn)與人類PD有不少相似之處，但該模型的損傷程度因6-OHDA的劑量、濃度、注射位點不同而存有爭議，特別是對損傷早期大鼠行為學(xué)方面的觀察比較缺乏。本實驗通過觀察6-OHDA損傷早期PD大鼠行為學(xué)及黑質(zhì)部位組織學(xué)的變化特點，驗證損傷早期PD大鼠模型的穩(wěn)定性及可靠性。

1資料與方法

1.1一般資料 選用健康雄性SD大鼠40只， 體重 250～300 g，由南通大學(xué)實驗動物中心提供。6-OHDA、抗壞血酸干粉劑、鹽酸阿樸嗎啡（apomorphine）、抗酪氨酸羥化酶（tyrosine hydroxylase， TH）抗體均購于Sigma公司。

1.2方法

1.2.1實驗動物分組 40只SD大鼠隨機分為三組：①空白對照組（n=8）；②6-OHDA模型組（n=24）：分為24 h組（n=8）、7 d組（n=8）和28 d組（n=8）3個亞組；③假手術(shù)組（n=8）。

1.2.2動物模型 模型組大鼠用復(fù)合麻醉劑（含戊巴比妥鈉、丙二醇、硫酸鎂等，0.25 mL/100 g體重）腹腔注射麻醉，待大鼠后肢回縮反射及角膜反射消失后，將其頭部水平位固定在腦立體定位儀上，剪除顱頂鼠毛，碘酒、酒精消毒皮膚，沿中線切開一長約2cm切口，充分暴露前囟，參照Paxinos & Watson（1996）《大鼠腦立體定位圖譜》確定左側(cè)前腦內(nèi)側(cè)束（mfb）三維坐標位置，選取mfb區(qū)坐標：前囟后2.8 mm，中線左側(cè)2.0 mm，硬膜下8.2 mm。根據(jù)注射位點確定鉆顱部位，手術(shù)刀尖小心鉆開一直徑約2 mm顱骨孔，微量進樣器緩慢進針至靶點，留針10 min，以9 ng/s的速度注入2 μg/μL 6-OHDA 4 μL（含0.02%抗壞血酸），注射完畢后留針5min，以1mm/min的速度退針。手術(shù)完畢，用明膠海綿堵塞顱骨孔，適量青霉素涂敷創(chuàng)口，消毒縫合皮膚，放回籠中飼養(yǎng)。并于24 h、7 d、28 d分別檢測大鼠行為學(xué)和組織學(xué)的改變。假手術(shù)組同法予含0.02%抗壞血酸的生理鹽水4 μL，空白對照組不作任何處理。

1.2.3行為學(xué)檢測

1.2.3.1跨步調(diào)節(jié)試驗[3] 將大鼠身體的后半部分拖起 ，并使大鼠身體重量僅由一側(cè)前肢支撐 ，記錄10s內(nèi)大鼠這一前肢走步次數(shù) ，然后同法檢測另一前肢的情況，以損傷對側(cè)前肢行走次數(shù)所占比例（損傷對側(cè)前肢行走次數(shù)/（損傷對側(cè)前肢行走次數(shù)+損傷側(cè)前肢行走次數(shù)））為評價指標。

1.2.3.2姿勢不對稱性試驗[4] 握住鼠尾的中后部將其提起，懸空于實驗臺上方約10 cm處，使大鼠頭向下處于垂直狀態(tài)， 以其偏離垂直軸不超過10°為垂直位（標準位），記錄大鼠頭或上身左右擺動的情況，以擺動偏離垂直位并再返回到垂直位記數(shù)為1次。觀察45 s內(nèi)大鼠頭或身體轉(zhuǎn)動的方向和次數(shù)，以向損傷對側(cè)擺動的次數(shù)所占比例（損傷對側(cè)擺動的次數(shù)/（損傷對側(cè)擺動的次數(shù)+損傷側(cè)擺動的次數(shù)））為評價指標。

1.2.3.3阿撲嗎啡誘發(fā)旋轉(zhuǎn)試驗 模型組分別于術(shù)后24 h、7 d、28 d于動物腹腔內(nèi)注射阿撲嗎啡0.5 mg/Kg 誘發(fā)大鼠向右側(cè)（健側(cè)）旋轉(zhuǎn)，于阿撲嗎啡注射后5 min開始記錄，持續(xù)記錄30 min。以24 h誘發(fā)旋轉(zhuǎn)次數(shù)210次/30 min為合格模型。

1.2.4組織學(xué)檢測

1.2.4.1動物灌注、固定、取材、切片 各組大鼠在最后一次行為學(xué)檢測后，用復(fù)合麻醉劑麻醉，剪開大鼠胸腔，經(jīng)主動脈快速灌注生理鹽水（37℃）150～200 mL沖洗，至大鼠肝臟發(fā)白，流出液基本無色為止。隨即灌注4%甲醛（4℃）先快速灌注 200 mL，再緩慢灌注300 mL，至頭與四肢均已發(fā)硬。斷頭取腦，置于4%甲醛，放4℃冰箱固定4 h，再依次置入20%及30%蔗糖磷酸鹽緩沖液內(nèi)，存4℃冰箱至腦塊沉入瓶底。取中腦黑質(zhì)組織塊進行冠狀連續(xù)冰凍切片，片厚20 μm。

1.2.4.2抗TH染色 作漂片SABC法染色，具體步驟依次為：冰凍切片用0.01 M（pH7.4）磷酸鹽緩沖液（PBS）漂洗3次，5 min/次。0.3% H2O2抑制內(nèi)源性過氧化物酶活性， 0.02 mol/L EDTA（95℃）復(fù)性（2 min），非免疫的正常羊血清，室溫下孵育30 min，抗TH抗體（1∶1000，抗體稀釋液稀釋），37℃孵育4 h， SABC試劑，室溫下孵育1 h， DAB顯色（陽性產(chǎn)物為棕黃色）。以上各步驟之間均以0.01M（PH7.4）PBS漂洗3次，5 min/次，正常羊血清與抗TH抗體孵育之間不漂洗。顯色后貼片，自然風(fēng)干，梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。

1.2.4.3 TH陽性神經(jīng)元記數(shù) 各組大鼠取包含黑質(zhì)致密部最明顯的中腦切片，在×100倍顯微鏡下計數(shù)兩側(cè)黑質(zhì)有完整細胞體的TH陽性細胞，計算左側(cè)與右側(cè)黑質(zhì)TH陽性細胞數(shù)的百分比（左側(cè)黑質(zhì)TH陽性細胞數(shù)/右側(cè)黑質(zhì)TH陽性細胞數(shù)×100% ）。參照蔡文琴等[5]介紹的神經(jīng)細胞計數(shù)方法進行細胞計數(shù)。

1.2.5統(tǒng)計學(xué)分析 數(shù)據(jù)結(jié)果均使用 SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。數(shù)據(jù)資料采用均數(shù)±標準差（x±s）表示。單因素方差分析進行差異性檢驗，P

2結(jié)果

2.1行為學(xué)觀察 對照組及假手術(shù)組大鼠經(jīng)阿撲嗎啡誘發(fā)后無旋轉(zhuǎn)行為，也未出現(xiàn)非藥物誘發(fā)的行為學(xué)改變。模型組大鼠在注射6-OHDA后數(shù)小時即出現(xiàn)損毀側(cè)肢體動作減少，身體重心偏向損毀側(cè)，并出現(xiàn)身體向損毀側(cè)緩慢旋轉(zhuǎn)，不能進行直線或隨意爬行。

2.1.1跨步調(diào)節(jié)試驗 對照組及假手術(shù)組大鼠兩側(cè)前肢10 s內(nèi)跨步次數(shù)基本相同，模型組大鼠在左側(cè)前腦內(nèi)側(cè)束注射6-OHDA后24 h跨步調(diào)節(jié)試驗評分出現(xiàn)有意義減少，7 d及28 d評分進一步減少，見表1。

2.1.2姿勢不對稱試驗 在左側(cè)前腦內(nèi)側(cè)束注射6-OHDA后24 h，姿勢不對稱試驗結(jié)果顯示模型組大鼠頭部和身體出現(xiàn)向右側(cè)轉(zhuǎn)動次數(shù)有意義增加，7 d及28 d姿勢不對稱試驗評分進一步增加，對照組及假手術(shù)組大鼠頭部和身體向兩側(cè)轉(zhuǎn)動次數(shù)大致相同，見表2。

2.1.3阿撲嗎啡誘發(fā)旋轉(zhuǎn)試驗 在注射6-OHDA后24 h，阿撲嗎啡腹腔注射誘發(fā)大鼠以右側(cè)后肢為支點，首尾相接向右側(cè)旋轉(zhuǎn)，30 min旋轉(zhuǎn)次數(shù)210次/30 min，對照組及假手術(shù)組大鼠未誘發(fā)出旋轉(zhuǎn)行為，見表3。

2.2組織學(xué)檢測 抗TH染色結(jié)果顯示，在左側(cè)前腦內(nèi)側(cè)束注射6-OHDA后24 h，大鼠左側(cè)黑質(zhì)TH陽性神經(jīng)元數(shù)目出現(xiàn)有意義減少，高倍鏡下見少部分神經(jīng)元出現(xiàn)胞體腫脹、核膜界限消失等變性征象，部分神經(jīng)軸突斷裂、錯亂；7 d和28 d時大鼠左側(cè)黑質(zhì)TH陽性神經(jīng)元幾乎消失，殘留的TH神經(jīng)元表現(xiàn)出染色質(zhì)濃縮壞死現(xiàn)象，神經(jīng)軸突散在稀疏；模型組大鼠右側(cè)黑質(zhì)TH陽性神經(jīng)元數(shù)目同時也有部分減少；對照組及假手術(shù)組大鼠兩側(cè)黑質(zhì)TH陽性神經(jīng)元無明顯改變，見表4，圖1。

3討論

研究PD需要建立穩(wěn)定可靠的模型。6-OHDA是一種選擇性中樞兒茶酚胺能神經(jīng)元毒性物質(zhì)，具有很強的呼吸鏈抑制作用，偏側(cè)6-OHDA損毀模型是目前使用最多的PD模型之一。1970年Ungerstedl[6]首先報道了應(yīng)用6-OHDA成功制備大鼠偏側(cè)PD模型，這種模型能夠在多巴胺能藥物的誘發(fā)下產(chǎn)生旋轉(zhuǎn)行為，以便于判斷模型成功與否。阿撲嗎啡是多巴胺（dopamine，DA）受體激動劑，能夠引起該模型向健側(cè)旋轉(zhuǎn)，這是由于損傷側(cè)紋狀體多巴胺含量下降，多巴胺D2受體代償性大量增加，且敏感性增高，出現(xiàn)超敏現(xiàn)象[7]，此時應(yīng)用DA受體激動劑使損傷側(cè)興奮作用占優(yōu)勢而產(chǎn)生向健側(cè)旋轉(zhuǎn)。

PD的神經(jīng)保護治療需要早期進行，評估6-OHDA損傷早期大鼠行為學(xué)變化，可進一步明確模型是否成功及神經(jīng)保護性治療是否有效。阿撲嗎啡誘發(fā)旋轉(zhuǎn)試驗結(jié)合非藥物誘發(fā)的行為學(xué)試驗，其評估結(jié)果更加有效、可靠[8]。在偏側(cè)前腦內(nèi)側(cè)束注射6-OHDA后數(shù)小時，大鼠出現(xiàn)肢體動作減少，身體重心偏向損毀側(cè)，并出現(xiàn)身體向損毀側(cè)不自主旋轉(zhuǎn)，不能進行直線或隨意爬行，6-OHDA注射后24 h大鼠跨步調(diào)節(jié)試驗和姿勢不對稱試驗出現(xiàn)有意義改變，腹腔注射阿撲嗎啡后可誘導(dǎo)大鼠在原地向健側(cè)旋轉(zhuǎn)，以健側(cè)后肢為支點，首尾相接，形成環(huán)狀，但旋轉(zhuǎn)次數(shù)

偏側(cè)前腦內(nèi)側(cè)束注射6-OHDA后24 h大鼠出現(xiàn)行為學(xué)和組織學(xué)方面的變化，為檢測模型的穩(wěn)定性和可靠性，實驗設(shè)立6-OHDA損傷后7d和28d組。結(jié)果顯示：大鼠行為學(xué)改變較24 h組更加顯著，阿撲嗎啡誘發(fā)旋轉(zhuǎn)次數(shù)>210次/30 min，符合成功PD模型標準；7 d和28 d時大鼠左側(cè)黑質(zhì)TH陽性神經(jīng)元減少90%。偏側(cè)前腦內(nèi)側(cè)束注射6-OHDA后，損傷對側(cè)有部分DA能神經(jīng)元丟失，可能與藥物的滲透作用或經(jīng)血液循環(huán)等有關(guān)。

綜上所述，通過早期行為學(xué)檢測，可為神經(jīng)保護性研究確立合格的PD模型，避免了藥物提前干預(yù)存在的藥物顯效與模型失敗之間的爭議。

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篇5

【關(guān)鍵詞】 DEHP；行為學(xué)；學(xué)習(xí)記憶1 材料與方法

11 主要試劑 DEHP(分析純)，美國Sigma公司。玉米油，市售。

12 實驗動物分組與染毒 Wistar大鼠35只，其中雌性25只，雄性50只，體重200~250 g，由吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院動物實驗中心提供，生產(chǎn)許可證號：SCXK(吉)20110004。動物自由飲水?dāng)z食，飼料由長春市億斯實驗動物技術(shù)有限責(zé)任公司提供，合格證號：SCXK(吉)2010~0001。動物室溫度20~22℃，相對濕度55％~65％，適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d，按體重隨機分為4組：對照組和低、中、高劑量組，每組6 只。動物雌雄大鼠以1∶ 1同籠，次日晨于盤底及陰道檢查陰栓，查出陰栓者，記為妊娠0 d，母鼠編號稱重，在妊娠期7~16 d，高、中、低三劑量組每天經(jīng)口灌胃給予DEHP，給予DEHP的量均為10 ml/100 g BW，對照組經(jīng)口灌胃給予等量玉米油。同時進行如下處理。對照組：給予母鼠對照物玉米油；高劑量組：染毒母鼠DEHP 1000 mg/kg；中劑量組：染毒母鼠DEHP 750 mg/kg；低劑量組：染毒母鼠DEHP 250 mg/kg。孕鼠產(chǎn)子后，單獨一籠哺養(yǎng)幼鼠。實驗時，每籠選取雌雄兩只子代大鼠進行神經(jīng)行為學(xué)測定。

13 仔鼠行為學(xué)改變的測定

131 跳臺實驗 實驗時，將離乳的子代大鼠置于箱中，自由活動5 min，然后將其置于安全臺上，箱底通電，觀察其跳臺的潛伏期(latency，L)并記錄5 min內(nèi)仔鼠跳下臺的次數(shù)，即錯誤次數(shù)(mistake，M)，此為訓(xùn)練成績，24 h 后再測為測試成績。

132 避暗實驗 實驗時將離乳的子代大鼠頭部背對著洞口放入明室，仔鼠一進入暗室立即受電擊，記錄仔鼠5 min內(nèi)進入暗室的錯誤次數(shù)，此為訓(xùn)練成績，24 h后再測為測試成績。

14 統(tǒng)計學(xué)方法 數(shù)據(jù)采用SPSS 105 統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析。組間比較采用最小顯著差異法檢驗(LSD法)。

2 結(jié)果

21 DEHP對子代大鼠跳臺實驗的測定 如表1 所示，跳臺實驗中高、中、低劑量組與對照組比較，錯誤次數(shù)明顯增多，平均潛伏期明顯縮短(P

22 DEHP對子代大鼠避暗實驗的測定 如表2所示，高、中、低劑量組子代大鼠進入暗箱的潛伏期縮短明顯低于對照組(P

表1 DEHP對子代大鼠跳臺測試結(jié)果的影響(x±s)

篇6

現(xiàn)在動物行為的研究在我國正處于起步階段，研究的內(nèi)容主要為描述性，在理論研究方面，在研究的廣度和深度方面，仍與國外存在著較大的差距。

而作為21世紀生物科學(xué)專業(yè)的一員，更有必要學(xué)好這門學(xué)科，為我國動物行為方面的研究做出自己的貢獻。出于對這個大千世界的好奇，我選擇了動物行為生態(tài)學(xué)這門學(xué)科，在老師的帶領(lǐng)下，我眼界變得開闊了，我也重新認識了這個世界，感受到了大自然的和諧，重新認識到了自己在這個大千世界中的價值。

在老師的推薦之下我閱讀了《小鳥的大道理》這篇短小卻飽含動物之間哲理的文章，它不是作家創(chuàng)造出來的世界，它不同于一般的文章，它是最基本的事實！是戴維斯生活的每一天每一夜，是獨自的，安靜的，幾乎與世隔絕的寂寞與艱辛，更是展示給我們的精華。

戴維斯一個將自己的精力放在小鳥身上的偉大科學(xué)家，在小鳥的繁殖季節(jié)里他幾乎每天都要去拜訪他們，比如像籬雀這種樣子很像麻雀，羽毛顏色黯淡，看上去很單調(diào)的不起眼的小鳥，在戴維斯的眼中，它的生活可是一點也不謙遜、正派。

他描述道：

“一對籬雀在一起覓食，安詳?shù)靥M樹叢中。到那里以后，雄鳥跑到一邊，雌鳥去了另一邊。一旦出了雄鳥的視線，雌鳥立即飛進附近的矮樹叢里，和藏在那里的另一只雄鳥。過后她立即和配偶會合，做出好像什么都沒有發(fā)生過的樣子?！?/p>

雖然鳥類常常被當(dāng)情的象征，天鵝、愛情鳥、鴛鴦這些美麗的鳥兒也經(jīng)常成為詩人謳歌的對象，但是它們的相親相愛顯然不是出于感情，而只是為了傳播基因。它們的生活被達爾文法則決定了：留下盡可能多的后代。雌、雄為此走在了一起，但是它們的利益并不總是一致的，其生理特征導(dǎo)致了它們的目標有所差異：雄性是要盡可能多地播種，雌性則是要盡可能多地養(yǎng)育自己的后代。對雌性來說，對自己最有利的婚姻形式是一妻多夫制，其次是一夫一妻制，第三是一夫多妻制。對雄性來說，則倒了過來，最好的形式是一夫多妻制，其次是一夫一妻制，第三是一妻多夫制。

雌性和雄性在長期進化過程中相互博弈的結(jié)果，讓大多數(shù)鳥類都采用了一夫一妻制，這樣做似乎對雌雄雙方都很公平。但是籬雀這種外表單調(diào)的小鳥卻有著最豐富的婚姻形式：一夫一妻制、一夫多妻制、一妻多夫制都存在著，還普遍存在多夫多妻制。

戴維斯發(fā)現(xiàn)，那些表面上是一夫一妻制的家庭，雌鳥通常也會主動勾引第三者來，這么做會鼓勵第三者為雌鳥的后代提供食物。而雌鳥的原配一旦發(fā)覺，會盡力把第三者趕走。根據(jù)達爾文法則，第三者應(yīng)該根據(jù)是否與雌鳥成功地來決定要不要為雌鳥的后代服務(wù)。如果成功，雌鳥的后代中有可能有第三者的種，第三者去幫忙才會增加自己的基因傳播的機會，不然就是在做無償服務(wù)了。

籬雀多姿多彩的家庭生活，其實是兩性既合作又沖突的結(jié)果，雙方都想利用對方來為自己留下盡可能多的后代。這個適用于所有有性生殖的生物的道理，卻由一種不起眼的小鳥如此鮮明地證明了。

求偶是動物繁衍的前奏，也是動物種群自我選育、優(yōu)育的基礎(chǔ)。是一方動物向另一方動物炫耀各種信號或做出各種動作的行為方式。求偶行為對保護種群的優(yōu)良素質(zhì)，更好地適應(yīng)自然環(huán)境，具有重要的意義，主要表現(xiàn)在以下幾點。

（1）每種動物的求偶行為都有物種的特異性，即使是很相近的物種也有細微的差異，這可以避免不同動物的種間雜交。種間雜交在相近物種之間也有時發(fā)生，如馬和驢雜交生騾，獅和虎也能雜交產(chǎn)仔，但這種情況大多是發(fā)生在人工喂養(yǎng)的特殊環(huán)境下。

（2）求偶行為使雌雄雙方有更多選擇機會，使后代獲得良好的遺傳基因組合。求偶不成的，常常是群體中的弱者。例如鹿科動物，雄性為爭奪配偶而斗毆，失敗的弱者，多為幼小剛成年或年老體衰者、瘦弱有病者，它們不被雌鹿選中，對物種的繁衍有利?，F(xiàn)在就來看看各類動物表現(xiàn)在求偶上的不同現(xiàn)象：

魚類

很多人肯定都看過電影《海底總動員》，里面奇妙而美麗的世界，色彩斑斕的魚的色彩，稀奇古怪的魚的樣子。里面我最喜歡的要數(shù)小丑魚了，哈哈。 魚的求偶有很多種，其中最為精妙杰出的求偶炫耀行為可能是座頭鯨的歌聲了，每只座頭鯨 ，都唱著它們自己的特殊歌曲，這種歌由一系列的長音符組成，而且能不停的重復(fù)演唱下去。它們的歌聲嘹亮，旋律美妙，以此來吸引異性的注意。

爬行動物

在我看來蛇是很討厭的動物，我最害怕也最不喜歡?？伤鼈兊那笈紖s也比較好玩。譬如：

1、響尾蛇一旦墜入愛河，它們就會如膠似膝很難再分開，感情深厚吧。

2、羅河雄鱷在期喜歡守護著一段河堤，并大聲吼叫，嚴防其他鱷魚的闖入。雌鱷聽到叫聲后就會前來相會。雄鱷就會興奮的搖頭擺尾，并將水從鼻孔射向天空。

鳥類

鳥的求偶行為多種多樣

1、孔雀的羽毛很漂亮，但這只是雄孔雀的毛。雌孔雀有點象個丑姑娘，但美麗的雄孔雀還是喜歡追求她們。雄孔雀在求偶時會展開羽毛，變成一把金光閃閃的扇子，在高興的時候還會發(fā)出嘎嘎的響聲。

2、雄鶴是最深情的求愛者。它們在求偶過程中會用美妙的舞蹈去打動雌鶴。它們一邊上下擺頭，快速拍動雙翅，突然奔走和停止。舞蹈中的鶴如癡如醉，并常常神魂顛倒的凝視對方。

其他如燕鷗喜歡在求偶時送彩禮；啄木鳥在求愛時通過有節(jié)奏的敲打樹干，發(fā)出愛情電報；信天翁求愛時非常有禮貌，經(jīng)常以不斷彎腰向?qū)Ψ绞緪?，有趣吧?/p>

哺乳動物

1、大熊貓

一只的雌熊貓，往往會引發(fā)數(shù)只雄性大熊貓的爭斗。最后最厲害的大熊貓將得到雌熊貓，并與之?dāng)y手而歸。

2、大象

處于期的大象總是通過激烈的搏斗來贏得雌大象。大象搏斗的時候用象牙做武器，龐大的身軀互相抵觸，扇動著大耳朵，并發(fā)出大聲的吼叫，直至一方落敗。

3、駱駝

駱駝是沙漠之舟。它們?yōu)榱藸帄Z妻子，常常失去了平時的溫和，變得異常兇猛。兩只公駱駝在打斗的時候，往往把對方摔倒在地上，并咬住對方的脖子。

篇7

關(guān)鍵詞：偏頭痛 垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽 三叉神經(jīng)脊束核尾核

中圖分類號：R747.2R255文獻標識碼：A文章編號：1672-1349(2011)05-0582-03

偏頭痛是臨床上常見的原發(fā)性頭痛疾患，?？稍斐蓜趧恿适АＴ谑澜缧l(wèi)生組織列出的世界范圍內(nèi)所有可造成傷殘的疾病中，按危害程度偏頭痛位列19位［1］。本實驗通過觀察尾靜脈注射垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽（PACAP38）后大鼠的行為學(xué)變化和大鼠三叉神經(jīng)核尾核（TNC）的c-fos蛋白表達情況，與已得到公認的硝酸甘油（NTG）實驗性偏頭痛大鼠模型比較，探討PACAP38能否作為誘發(fā)大鼠偏頭痛發(fā)作的誘導(dǎo)劑，為偏頭痛發(fā)病機制及治療藥物研究和開發(fā)提供實驗依據(jù)。

1材料與方法

1.1實驗動物Wistar系健康封閉群大鼠30只，體重（250～300）g，由山西醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供。

1.2主要試劑及藥品垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽（吉爾生化有限公司，批號P1009007-SY52290），兔抗大鼠c-fos抗體、SP-9001免疫組化染色試劑盒，DAB顯色劑均為博士德生物工程有限公司提供，硝酸甘油注射液（太行制藥有限公司，批號120101）。

1.3方法

1.3.1分組將30只大鼠隨機分為硝酸甘油模型組、PACAP38高劑量組、PACAP38中劑量組、PACAP38低劑量組、空白對照組，每組6只，雌雄各半。硝酸甘油組大鼠給予尾靜脈注射硝酸甘油注射液2 μg/kg，建立實驗性偏頭痛大鼠模型；PACAP38高、中、低劑量組大鼠分別給予尾靜脈注射PACAP38 12 μg/kg、6 μg/kg、3 μg/kg；空白對照組大鼠給予尾靜脈注射1 mL/kg生理鹽水。

1.3.2大鼠行為學(xué)觀察觀察耳紅、撓頭、爬籠出現(xiàn)及消失的時間。撓頭出現(xiàn)時間以大鼠連續(xù)撓頭次數(shù)達5次以上為標志，消失時間以一個時間段中大鼠撓頭次數(shù)少于5次，并出現(xiàn)倦怠疲乏表現(xiàn)為標志。采用持續(xù)時間分段計數(shù)方法，以每30 min為一時間段。

1.3.3取材及切片造模4 h后，用10%水合氯醛0.3 mL/kg麻醉動物，仰臥固定、開胸，心尖部插管入主動脈，剪開右心耳處。首先迅速灌注生理鹽水200 mL，沖凈血液后再以4%多聚甲醛250 mL灌注，待充分固定后斷頭，取腦組織，自延髓閂部向尾端行冠狀切取4 mm腦組織，放入甲醛液中固定24 h，后移入70%的乙醇中保存。常規(guī)脫水、石蠟包埋。石蠟切片機切片，每次2 μm，共4張。1.3.4免疫組化石蠟切片行常規(guī)HE染色，顯微鏡下觀察確定組織結(jié)構(gòu)未被破壞，進行免疫組織化學(xué)染色。室溫顯色，鏡下控制反應(yīng)時間，（2～3）min后顯色充分。蒸餾水充分洗滌。梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中型樹膠封固。

1.3.5免疫組化對照實驗陰性對照，用PBS緩沖液代替c-fos抗體，其他步驟與前述程序相同。

1.3.6圖像定量分析在光學(xué)顯微鏡下，切片背景為淡黃色或無色，陽性細胞呈黃褐色圓形或卵圓形，主要為核染，易與背景分別。高倍鏡下每張切片在TNC部位隨機選取5個視野，記錄陽性細胞數(shù)，取平均值進行統(tǒng)計學(xué)比較。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理計量資料以均數(shù)±標準差（x±s）表示，采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件分析。各組間先行方差齊性檢驗，在各組方差齊的情況下，采用單因素方差分析，其中兩兩比較用LSD-t檢驗。

2結(jié)果

2.1耳紅空白對照組大鼠始終沒有耳紅癥狀出現(xiàn)，硝酸甘油組、PACAP38高劑量組、PACAP38中劑量組、PACAP38低劑量組平均在靜脈給藥后4 min出現(xiàn)耳紅，各組間無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05);4組在給藥后3 h耳紅癥狀消失,數(shù)據(jù)記錄各組間無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。詳見表1。

2.2撓頭硝酸甘油組、PACAP38中劑量組、PACAP38高劑量組均出現(xiàn)了撓頭增多現(xiàn)象，出現(xiàn)與消失時間基本與耳紅時間相平行（P＞0.05）。詳見表2。大鼠在尾靜脈給藥后4 min出現(xiàn)撓頭頻繁，60 min～90 min維持高峰期，之后撓頭次數(shù)逐漸下降，至180 min撓頭消失?？瞻讓φ战M、PACAP38低劑量組撓頭次數(shù)無明顯增加，與硝酸甘油組同時間段比較有統(tǒng)計學(xué)意義（P

2.3爬籠硝酸甘油組、PACAP38中劑量組、PACAP38高劑量組大鼠在尾靜脈給藥后出現(xiàn)明顯煩躁、爬籠次數(shù)增多，增多、減少以及高峰時間與撓頭時間相類似。詳見表4。2.4c-fos蛋白表達光學(xué)顯微鏡下可見切片背景為淡黃色，c-fos免疫反應(yīng)陽性神經(jīng)元呈黃褐色圓形或卵圓形，核染為主，主要分布于兩側(cè)TNC。陰性對照片無陽性信號出現(xiàn)。硝酸甘油組、PACAP38中劑量組、PACAP38高劑量組較空白對照組c-fos免疫陽性細胞明顯增多（P0.05）；PACAP38低劑量組c-fos免疫陽性細胞較空白對照組無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。詳見表5。

3討論

三叉神經(jīng)血管系統(tǒng)目前被認為是偏頭痛發(fā)作的解剖結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，此系統(tǒng)的激活是患者偏頭痛發(fā)作產(chǎn)生疼痛的關(guān)鍵環(huán)節(jié)?；谶@一理論提出的三叉神經(jīng)血管反射假說是目前解釋偏頭痛發(fā)病機制的主流學(xué)說之一。這一假說將血管、神經(jīng)、遞質(zhì)三者相結(jié)合，認為偏頭痛患者的三叉神經(jīng)血管系統(tǒng)及中樞性調(diào)節(jié)系統(tǒng)可能存在功能。偏頭痛發(fā)作啟始，神經(jīng)組織受刺激后顱內(nèi)血管周圍的神經(jīng)纖維釋放多種神經(jīng)遞質(zhì)，引發(fā)包括顱內(nèi)血管舒縮障礙、血漿成分外滲及肥大細胞脫顆粒致無菌性神經(jīng)源性炎癥以及三叉神經(jīng)敏化在內(nèi)的一系列病理生理改變，從而觸發(fā)偏頭痛的發(fā)作［2］。

PACAP38是一種具有多樣生物活性的神經(jīng)多肽，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)和周圍神經(jīng)系統(tǒng)均有廣泛的表達，有神經(jīng)遞質(zhì)和神經(jīng)調(diào)質(zhì)的作用。PACAP38具有高度擴血管作用，而以往研究結(jié)果提示人體靜脈輸注擴血管藥物可能引發(fā)偏頭痛發(fā)作。基于上述兩點，Henrik等提出了靜脈給予PACAP38注射可能誘發(fā)人體偏頭痛發(fā)作的假設(shè)，并在隨后的實驗中得到證實，這項雙盲交叉試驗顯示，人體在肘靜脈注射PACAP38（10 mg/kg）后誘發(fā)了偏頭痛樣頭痛發(fā)作［3］。

大鼠對疼痛的行為學(xué)反應(yīng)比較復(fù)雜。付先軍等［4］建立的一套比較完整的NTG偏頭痛大鼠模型行為學(xué)特征評價體系中，評價指標主要包括耳紅、撓頭、爬籠等行為學(xué)改變，這些指標是大鼠對疼痛防御反應(yīng)的客觀表現(xiàn)，可廣泛應(yīng)用于大鼠偏頭痛發(fā)作的評估。c-fos原癌基因是一種即早基因，它的快速表達產(chǎn)物c-fos蛋白被作為神經(jīng)元激活的標志物廣泛用于感覺通路的研究，并可用于神經(jīng)元功能活動的形態(tài)定位［5］。本實驗中，觀察到尾靜脈注射中等劑量（6 μg/kg）以上的PACAP38出現(xiàn)了耳紅、連續(xù)撓頭、爬籠增多等行為學(xué)改變，相關(guān)記錄數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計學(xué)比較與硝酸甘油組無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；同時在PACAP38中、高劑量組大鼠腦干TNC部位觀察到c-fos蛋白免疫陽性細胞明顯較空白組增多（P0.05）。推測低劑量PACAP38僅能引起實驗動物動脈擴張而不能達到誘發(fā)偏頭痛閾值。

PACAP38受體可分為兩類三型即VPAC1、VPAC2、PAC1。其中VPAC1及VPAC2與血管活性腸肽（VIP）和PACAP38的親合力相當(dāng)，而PAC1與PACAP38的親和力要遠遠高于VIP［6］。目前并無明確證據(jù)表明究竟是哪型受體介導(dǎo)偏頭痛發(fā)作，且無任一PACAP38受體拮抗劑阻止偏頭痛發(fā)作的相關(guān)實驗研究。但根據(jù)VIP只能誘導(dǎo)人體較弱頭痛而非偏頭痛樣頭痛發(fā)作［7］，高度提示PAC1受體可能是PACAP38介導(dǎo)偏頭痛發(fā)作的作用靶點。

PACAP38介導(dǎo)偏頭痛發(fā)作的病理生理過程尚不明確。盡管PACAP38具有高強度的擴血管作用，但在本實驗中顯示PACAP38低劑量組大鼠僅有耳紅癥狀出現(xiàn)，耳紅程度以及出現(xiàn)、消失時間與除空白組外其余3組無統(tǒng)計學(xué)意義，但其他行為學(xué)改變并不明顯，且c-fos免疫陽性細胞無明顯增加。擴張血管并不是PACAP38誘發(fā)偏頭痛發(fā)作的決定因素。PACAP38誘導(dǎo)偏頭痛發(fā)作的可能途徑是三叉神經(jīng)二級神經(jīng)元敏化-致敏三叉神經(jīng)-級神經(jīng)元-誘發(fā)偏頭痛［8］。靜脈注射PACAP38 5 min后只有其中的0.063%可以通過血腦屏障［9］，推測PACAP38誘導(dǎo)偏頭痛發(fā)作主要依靠血腦屏障外作用。靜脈注射PACAP38致硬腦膜細胞內(nèi)cAMP濃度的提高，可能是偏頭痛發(fā)作的關(guān)鍵，這在具有同樣效應(yīng)的西洛他唑和CGRP相關(guān)研究中也得到了證實［10,11］。矛盾的是，肥大細胞脫顆粒、無菌性神經(jīng)源性炎癥這些很多認為的偏頭痛發(fā)作關(guān)鍵途徑所通過的受體均非PAC1而是VPAC。

在本實驗中，尾靜脈注射中等以上劑量的PACAP38大鼠出現(xiàn)了偏頭痛發(fā)作的行為學(xué)及病理生理改變，提示PACAP38構(gòu)建新的偏頭痛大鼠實驗?zāi)Ｐ偷目赡苄?。在未來的研究?PAC1可能會成為開發(fā)偏頭痛治療藥物的新的突破點，而對這一受體介導(dǎo)的一系列偏頭痛病理生理過程的闡述，以及PAC1受體拮抗劑的研究及應(yīng)用都可能對防治偏頭痛發(fā)作具有重要的意義。

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篇8

【摘要】 探討六味地黃丸對帕金森病小鼠模型的異常行為和黑質(zhì)抗氧化系統(tǒng)的影響。［方法］經(jīng)腹腔注射1甲基4苯基1，2，3，6四氫吡啶（MPTP），建立小鼠帕金森?。≒D）模型。通過爬竿實驗和滾筒實驗研究小鼠造模和給藥后的行為表現(xiàn)；給藥4周后測定小鼠中腦黑質(zhì)部位超氧化物岐化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSHPx）活性及丙二醛（MDA）水平的變化。［結(jié)果］經(jīng)MPTP誘導(dǎo)的小鼠，其爬竿時間、滾筒運動潛伏期與正常對照組比較有顯著性差異，經(jīng)六味地黃丸給藥后能明顯改善MPTP誘導(dǎo)的小鼠的行為學(xué)表現(xiàn)；可使MPTP誘導(dǎo)小鼠的MDA含量降低，SOD、GSHPX含量升高。［結(jié)論］經(jīng)六味地黃丸給藥可以改善MPTP致帕金森病小鼠的運動功能障礙，提高機體抗氧化能力，減輕機體的氧化應(yīng)激損傷。

【關(guān)鍵詞】 帕金森??；六味地黃丸；氧化應(yīng)激

Fund project：Subject of Integrated TCM and WM of Hubei Provincial Health Bureau（No：E.W.F［2006］63帕金森病（Parkinson’s disease，PD）是一種以黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元特征性缺失為主要病理改變的神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病，臨床上以靜止性震顫、肌僵直、運動減少和姿勢調(diào)節(jié)障礙為特征。臨床研究表明，帕金森病患者處于氧化應(yīng)激狀態(tài)，氧化應(yīng)激反應(yīng)是PD的發(fā)病機制之一［1］，在各種神經(jīng)變性機制中，氧化應(yīng)激仍占主導(dǎo)地位，并對多巴胺神經(jīng)元死亡起重要作用［2］。

1 材料與方法

1.1 材料

（1）藥物：滋陰補腎之中藥六味地黃丸。美多巴：上海羅氏制藥公司產(chǎn)品，批號：SH0607。（2）動物：C57BL小鼠50只，雄性，體重20～25g，由武漢大學(xué)動物實驗中心提供，動物合格證號：SCXK（鄂）2003-0004。（3）試劑：1甲基4苯基1，2，3，6四氫吡啶（MPTP），為Sigma公司產(chǎn)品。超氧化物岐化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSHPx）、丙二醛（MDA）試劑盒為南京建成生物工程公司產(chǎn)品。

1.2 方法

（1）動物分組 將50只小鼠隨機分為5組：正常對照組（A）、模型組（B）、美多巴組（C）、六味地黃丸組（D）、美多巴加六味地黃丸組（E），每組10只。（2）模型制備：以無菌生理鹽水溶解MPTP后，按25mg／kg的劑量腹腔注射小鼠，每日1次，連續(xù)5d。（3）給藥：美多巴組，六味地黃丸組，美多巴加六味地黃丸組根據(jù)藥理學(xué)方法計算小鼠給藥量［3］，按照每次灌胃量0.5ml配制。正常對照組，模型組每只鼠給予灌胃等體積生理鹽水，1次/d，連續(xù)4周。（4）行為學(xué)實驗5組小鼠分別進行爬竿實驗和滾筒實驗的行為測驗以檢測其肢體運動協(xié)調(diào)情況。各組小鼠于實驗前4d進行2次/d爬桿、滾筒行為訓(xùn)練。兩個實驗在實驗的第2周和第4周檢測小鼠的行為學(xué)改變，最后計算得分情況。（5）小鼠腦組織SOD、GSHPx、MDA含量測定：實驗結(jié)束后，各組小鼠斷頭取腦，分離中腦黑質(zhì)。制備腦組織勻漿液，取適量上清液進行SOD、GSHPX、MDA的檢測，具體方法按南京建成生物工程研究所試劑盒說明書步驟進行測試。（6）統(tǒng)計學(xué)處理方法：所有實驗數(shù)據(jù)采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理，結(jié)果用均數(shù)±標準差表示，對資料進行t檢驗。

2 結(jié)果

2.1 小鼠造模情況

小鼠注射MPTP后出現(xiàn)全身震顫、弓背、皮毛及尾巴豎立、后肢張開、運動遲緩、活動減少，并隨MPTP給藥次數(shù)增加上述癥狀表現(xiàn)趨于明顯。

2.2 爬竿實驗

小鼠運動功能測定結(jié)果，以爬竿時間為指標考察小鼠行為學(xué)變化。模型組與正常對照組比較有顯著性差異（P

與模型組比較，﹡P

2.3 滾筒實驗

經(jīng)過治療的3組小鼠行為都有改善，與模型組比較均有差異（P

圖1 各組小鼠的滾筒實驗評分2.4 小鼠黑質(zhì)抗氧化系統(tǒng)指標檢測 腦組織GSHPx、SOD含量與正常組比較，模型組明顯降低顯（P

腦組織SOD、和MDA含量在給藥組組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，推測與樣本數(shù)偏少有關(guān)。

3 討論

中醫(yī)認為PD屬于“顫證”范疇。早在《內(nèi)經(jīng)》中就有類似此病的記載，如《素問》“諸風(fēng)掉眩，皆屬于肝”“諸寒收引，皆屬于腎”“骨者髓之府，不能久立，行則震掉”等。本病為腦髓與肝脾腎等臟器受損而發(fā)生的退行性病變，其關(guān)鍵在于腎虛精虧，筋脈失榮；脾虛生化不足，腦髓失充所致。六味地黃丸為治腎虛諸證的經(jīng)典補陰方劑，重用熟地，滋陰補腎，填精益髓為君藥。山萸肉補養(yǎng)肝腎，山藥補益脾陰，共為臣藥。三藥相配，滋養(yǎng)肝脾腎，為“三補”。佐以茯苓、澤瀉、丹皮“三瀉”，滲濕濁，清虛熱，六味合用，三補三瀉，以補為主，肝脾腎三陰并補，以補腎陰為主。已有研究表明六味地黃丸有抗氧化和抗衰老作用，可增強SOD活性，減少MDA的生成量，能顯著降低脂質(zhì)過氧化的含量［4］，有調(diào)節(jié)免疫［5］，抗血管內(nèi)皮細胞凋亡［6］的作用。本次實驗，使用MPTP制備PD模型，在運用六味地黃丸對其治療4周后，PD小鼠腦內(nèi)的SOD、GSHPx水平與模型組相比顯著提高，而其MDA的含量較模型組明顯下降，對于給藥組組間比較無顯著差異，考慮可能與樣本數(shù)少和給藥時間短有一定的關(guān)系，有待于實驗的進一步深入。

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篇9

【關(guān)鍵詞】 腦缺血再灌注損傷；血紅素結(jié)合蛋白；血紅素氧合酶-1

DOI：10.14163/ki.11-5547/r.2016.29.193

Hemopexin in HO-1 up-regulation for improving rat neuroethology after cerebral ischemia reperfusion injury DONG Bei-bei， ZHANG Zhi-shen， XIE Ke-liang， et al. Department of Anesthesiology， Tianjin Medical University General Hospital， Tianjin 300052， China

【Abstract】 Objective To investigate whether or not hemopexin （HPX） can improve rat cerebral ischemia reperfusion（IR） injury by its heme oxygenase-1 （HO-1） up-regulation. Methods A total of 60 male SD rats， aging 7～8 weeks and weighting 250～280 g， were divided by random number table into sham operation （Sham） group， ischemia reperfusion （MCAO） group， solvent （sodium azide） （MCAO+Vehicle） group， HPX （MCAO+HPX） group and HO-1 inhibitor （MCAO+HPX+ ZnppⅨ） group， with 12 rats in each group. Middle cerebral artery occlusion （MCAO） was applied to prepare model of rat ischemia reperfusion. MCAO group， MCAO+Vehicle group， MCAO+HPX group and MCAO+HPX+ZnppⅨ group received respectively single injection through paracele immediate at IR by normal saline （10 μl， 0.9%）， sodium azide （10 μl， 0.1%）， HPX （10 μl， 1.86g/L） and 10 μl HPX+ZnppⅨ （HPX 1.86 g/L+ sodium azide 0.1%）. Carcia evaluation was applied in 24 h and 7 d after IR for neurobehavior score （NBS）， along with real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction （RT-PCR） for HO-1 mRNA level in ischemic penumbra brain tissue. Results In 24 h after IR， Sham group， MCAO group， MCAO+Vehicle group， MCAO+HPX group and MCAO+HPX+ZnppⅨ group had NBS scores respectively as （15.50±2.43）， （5.17±1.60）， （5.00±2.10）， （10.83±1.47） and （5.33±1.97） points， and the difference had statistical significance （F=34.819， P

【Key words】 Cerebral ischemia reperfusion injury； Hemopexin； Heme oxygenase-1

對腦卒中患者進行溶栓治療會發(fā)生再灌注損傷， 缺血再灌注損傷涉及到氧化應(yīng)激[1]、細胞凋亡[2]、線粒體紊亂[3]等諸多機制 ， 針對上述機制進行干預(yù)的效果并不理想。過多的游離血紅素有強烈的細胞毒性， 能夠造成內(nèi)皮損傷[4]， HPX能夠清除過多游離血紅素， 而HO-1是游離血紅素代謝的關(guān)鍵限速酶。作者的前期動物實驗研究顯示：HPX 在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)元和脈管上皮細胞均有表達， 側(cè)腦室注射HPX可縮小大鼠腦梗死容積[5]。然而國內(nèi)外針對HPX的神經(jīng)保護作用及其機制的研究相對缺乏， 因此本實驗在前期研究基礎(chǔ)上， 探討HPX是否通過提高HO-1表達改善腦缺血再灌注損傷后行為學(xué)表現(xiàn)， 為促進腦卒中患者的認知功能恢復(fù)提供新思路。

1 材料與方法

1. 1 實驗動物來源 成年雄性SD大鼠60只， 7～8周齡， 體重250～280 g， 購自中國軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心， 許可證號：SCXK（軍）2009-003。分籠飼養(yǎng)于無特殊病原菌環(huán)境：溫度（22±2）℃， 相對濕度約55%～60%， 每日12 h晝夜交替， 自由飲食、飲水。采用隨機數(shù)字表法將其分為五組：Sham組、MCAO組、MCAO+Vehicle組、MCAO+ HPX組、MCAO+HPX+ZnppⅨ組， 每組12只。本研究已獲天津醫(yī)科大學(xué)實驗動物管理委員會批準。

1. 2 腦缺血再灌注模型制備 采用線栓法建立大鼠大腦中動脈栓塞模型， 參照文獻所述[6]， 10%水合氯醛（0.3 g/kg）腹腔注射麻醉， 暴露并分離右側(cè)頸總動脈（CCA）， 右頸外動脈（ECA）及頸動脈分叉， 直視下用眼科剪于CCA距離動脈分叉5～15 mm處剪一小口， 右手改用眼科鑷持準備好的栓線（購自北京西濃科技有限公司）經(jīng)此小口置入CCA內(nèi)向前送入顱內(nèi)， 至稍感阻力， 拉緊固定栓線。待栓塞1 h大鼠蘇醒后， 采用Longa法[7]評估大鼠行為表現(xiàn)， 評分1～3分提示造模成功。Sham組大鼠相同條件下暴露分離右側(cè)CCA， 右側(cè)ECA及頸動脈分叉， 結(jié)扎右側(cè)CCA和ECA， 但不插入栓線， 關(guān)閉切口。手術(shù)過程中使用電熱毯維持大鼠體溫， 使其直腸溫度維持在（37.0±0.5）℃。

1. 3 方法 參照文獻所述[8]， MCAO組、MCAO+Vehicle組、MCAO+HPX組、MCAO+HPX+ZnppⅨ 組大鼠分別在IR后即刻在立體定位儀下經(jīng)側(cè)腦室注射方式單次給予生理鹽水（10 μl， 0.9%）、疊氮鈉（NaN3）（10 μl， 0.1%）、HPX（10 μl， 1.86 g/L）和10 μl HPX+ZnppⅨ混合液（HPX 1.86 g/L+0.1%疊氮鈉）。

1. 4 觀察指標

1. 4. 1 NBS評分 參照文獻所述[9]， IR后24 h、7 d采用Carcia評分法由一個不了解本研究實驗分組情況的研究人員評價各組大鼠NBS評分。該評分法分為運動功能和感覺功能評價兩方面， 最高18分， 最低3分， 得分越高說明動物的神經(jīng)行為表現(xiàn)越好， 得分3～7分說明重度神經(jīng)功能障礙， 8～11分為中度神經(jīng)功能障礙， 12～18分為輕度神經(jīng)功能障礙。

1. 4. 2 RT-PCR法檢測缺血半暗帶區(qū)HO-1 mRNA水平變化 Sham組、MCAO組、MCAO+Vehicle組和MCAO+HPX組， 每組選取6只大鼠， 水合氯醛深麻醉， 然后進行左心室灌注， 直至肝臟色發(fā)白， 右心耳開口處流出的灌注液體基本變成清亮， 這時可認為灌注有效。經(jīng)灌注死亡后斷頸取大鼠缺血半暗帶腦組織， 提取總RNA， 反轉(zhuǎn)錄合成cDNA， 使用SYBR Green法進行實時熒光定量PCR檢測， 以GAPDH為內(nèi)對照。HO-1引物長度77bp， 上游引物5′-CGACAGCATGTCCCAGGATT-3′， 下游引物5′-TCGCTCTATCTCCTCTTCCAGG-3′；GAPDH引物長度95 bp， 上游引物5′-CAGTGCCAGCCTCGTCTCAT-3′， 下游引物 5′-AGGGGCCATCCACAGTCTTC-3′。用iQTM多重實時熒光定量PCR儀（Bio-Rad公司， 美國）進行擴增并分析處理數(shù)據(jù)。用2-ΔΔCT法計算mRNA相對表達量。

1. 5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標準差（ x-±s）表示， 組間比較用單因素方差分析， 兩兩比較用LSD檢驗。P

2 結(jié)果

2. 1 NBS評分 IR后24 h Sham組、MCAO組、MCAO+Vehicle組、MCAO+ HPX組、MCAO+HPX+ZnppⅨ組大鼠的NBS評分分別為（15.50±2.43）、（5.17±1.60）、（5.00±2.10）、（10.83±1.47）、（5.33±1.97）分， 比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=34.819， P

2. 2 缺血半暗帶組織HO-1 mRNA水平 與Sham組比較， MCAO組大鼠IR后24 h、7 d缺血半暗帶區(qū)腦組織HO-1 mRNA水平顯著增加（P0.05）；與MCAO+Vehicle組比較， MCAO+HPX組大鼠IR后24 h、7 d缺血半暗帶區(qū)腦組織HO-1 mRNA水平顯著升高（P

3 討論

大腦中動脈是頸內(nèi)動脈的直接延續(xù)， 是血管缺血閉塞發(fā)生率最高的動脈分支；然而大腦中動脈提供大腦半球約80%的血供， 一旦發(fā)生閉塞， 造成的臨床癥狀更加廣泛嚴重。因此本研究通過采用經(jīng)典的MCAO法建立大鼠腦IR模型， 這與臨床上缺血性腦卒中發(fā)生的特點相一致。多種神經(jīng)行為學(xué)評價方法比較表明， Carcia評分法與缺血性腦卒中大鼠的梗死容積有更好的相關(guān)性[10]， 因此本研究采用Carcia評分法評價大鼠IR后的神經(jīng)行為學(xué)表現(xiàn)。本研究結(jié)果顯示， 與Sham組相比， MCAO大鼠IR后24 h和7 d的NBS明顯降低， 側(cè)腦室注射HPX能明顯的提高大鼠IR后24 h和7 d的NBS評分， 給予HPX時同時給予HO-1抑制劑ZnppⅨ后， HPX提高大鼠IR后的NBS評分的作用消失；大鼠IR后24 h和7 d的NBS評分降低到HPX治療前的水平， 側(cè)腦室注射疊氮鈉對大鼠IR后24 h和7 d的NBS評分無明顯影響， 表明HPX能夠有效改善大鼠IR后的神經(jīng)功能缺損， 提高其神經(jīng)行為學(xué)表現(xiàn)， HO-1可能是HPX發(fā)揮神經(jīng)功能保護作用的關(guān)鍵分子。

游離血紅素為親脂性結(jié)構(gòu)， 主要用于血紅蛋白、細胞色素P450、過氧化氫酶等的合成， 同時也還是調(diào)節(jié)這些蛋白基因表達的重要因子。然而越來越多的研究發(fā)現(xiàn)， 過多的游離血紅素有強烈的細胞毒性作用， 該毒性作用在血管內(nèi)皮細胞和神經(jīng)元中最為顯著， 多種組織損傷時伴隨游離血紅素的過度釋放[11]。游離血紅素的親脂性結(jié)構(gòu)特點使其能夠很容易的插入血管內(nèi)皮細胞膜脂質(zhì)分子中， 破壞內(nèi)皮結(jié)構(gòu)的完整性， 與此同時， 游離血紅素還參與了血管內(nèi)皮的氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)， 從而引起血管內(nèi)皮功能障礙[12]。HPX是血漿中與游離血紅素親和力最強的蛋白， 可清除過多有害游離血紅素。作者前期研究表明HPX在腦缺血后的脈管系統(tǒng)中表達增加， 側(cè)腦室注射HPX能夠呈劑量依賴性顯著縮小大鼠的腦梗死容積[5]。HO-1是催化血紅素分解的限速酶， 其作為機體內(nèi)源性的保護因子， 是細胞應(yīng)激最敏感的指標之一， 對多種血管源性損傷發(fā)揮保護作用[13]。缺血再灌注損傷發(fā)生時HO-1的表達增加， 外源性導(dǎo)入HO-1基因載體， 缺血再灌注后24 h動物神經(jīng)行為學(xué)評分明顯升高， 組織病理改變減輕， 梗死面積減少[14]。

本研究結(jié)果顯示， 與Sham組相比， MCAO大鼠IR后24 h缺血半暗帶區(qū)的HO-1 mRNA應(yīng)激性增加， 在IR后7 d下降到手術(shù)前水平；側(cè)腦室注射HPX能夠顯著上調(diào)大鼠IR后24 h缺血半暗帶區(qū)的HO-1 mRNA的轉(zhuǎn)錄水平， 該作用能持續(xù)到IR后7 d；給予HPX時同時給予HO-1抑制劑ZnppⅨ， 阻止了神經(jīng)行為學(xué)改善， 表明HPX通過上調(diào)HO-1表達改善腦缺血再灌注后行為學(xué)表現(xiàn)。

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篇10

【關(guān)鍵詞】 益智寧神口服液/藥理學(xué);抽動—穢語綜合征/中藥療法;神經(jīng)遞質(zhì);疾病模型，動物;大鼠;色譜法，高壓液相

抽動—穢語綜合征(tourette syndrome，ts)，又稱多發(fā)性抽動癥，是一種兒童期發(fā)病的慢性神經(jīng)精神障礙性疾病。wWW.133229.cOM臨床表現(xiàn)主要為突然、快速、反復(fù)、非節(jié)律性、不自主和刻板的運動性抽動和發(fā)聲性抽動，還可能伴有各種行為紊亂、強迫觀念與行為、認知障礙等，可不同程度地干擾和損害兒童的認知功能，影響社會適應(yīng)能力。本病病因尚未明確，具有明顯的遺傳傾向，多見于4～12歲的兒童，患病率約為005%～3%，近年來發(fā)病呈明顯上升趨勢，男孩多于女孩[1]。廣東省中醫(yī)院兒科在臨床實踐中運用自擬方益智寧神口服液治療該病，取得了較好的療效[2]。本實驗應(yīng)用亞氨基二丙腈腹腔注射建立抽動—穢語綜合征模型大鼠，觀察該藥對模型大鼠行為學(xué)和神經(jīng)生物學(xué)的影響，現(xiàn)報道如下。

1材料與方法

11實驗動物spf級sd大鼠60只，28～30d齡，體質(zhì)量(250±10)g，雌雄各半。由廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心提供(許可證號:粵監(jiān)證字2008d006，批號：0037766)。

12實驗藥品亞氨基二丙腈(iminodipropionitrile，idpn)購自alfa aesar公司(批號：c7323a)，中藥益智寧神口服液(由廣東省中醫(yī)院提供，批號：080201)，對照藥物為氟哌啶醇(上海信誼九福藥業(yè)有限公司，批號：08031121)。

13儀器及試劑lc26a 型高效液相色譜儀、spd26av 熒光檢測器、c2r4a 數(shù)據(jù)處理機均為日本島津公司產(chǎn)品，脫水機、包埋機、切片機和生物顯微鏡等設(shè)備為德國leica公司產(chǎn)品，微量組織勻漿器為millipore公司產(chǎn)品，zh藍星c/s型腦立體定位儀，高氯酸、乙二胺四乙酸二鈉(edtana2)均為分析純，甲醇為色譜純，對照品由中國藥品生物制品所提供。

14模型復(fù)制參考wakata[3]的方法，將亞氨基二丙腈溶解于生理鹽水，稀釋成濃度100mg/ml，給藥途徑為腹腔注射，劑量為150mg·kg-1·d-1，每天1次，共用7d。

15分組及給藥選用sd大鼠隨機分為4組：空白組和模型組各10只，中藥組和西藥組各20只，每組均雌雄各半。治療組在造模后第2天開始給藥，中藥組按20kg的兒童每天口服20ml益智寧神口服液的比例計算，每只大鼠灌胃約2ml/d;西藥組按20kg的兒童每天口服氟哌啶醇片1mg的比例計算，每只大鼠灌胃約015mg/d，連續(xù)14d。

16大鼠行為觀察[4]采用觀察評分，每次至少觀察1h，主要誘發(fā)癥狀為運動行為和刻板運動。(1)運動行為評分：0分：安靜或正常活動;1分：能過度興奮;2分：探究行為增加;3分：跑;4分：跑和跳;(2)刻板運動(或定型運動)評分：0分：無刻板運動;1分：旋轉(zhuǎn)行為;2分：頭和頸部的上下運動過多;3分：頭、頸部的上下運動過多加旋轉(zhuǎn)行為;4分：頭向側(cè)擺合并頭和頸部的上下運動過多。

17神經(jīng)遞質(zhì)水平檢測[5]第14天將所有實驗大鼠迅速斷頭處死，借助腦立體定位儀，取右腦海馬組織及邊緣系統(tǒng)(包括紋狀體、隔核、層殼核、基底節(jié)、齒狀回)，精確稱質(zhì)量，置入1ml處理液(含01mol/l高氯酸和05g/ledtana2)中，微量組織勻漿器冰溶下勻漿，4℃冰凍離心10000r/min，取上清液置入-20℃保存。采用高效液相色譜法測定多巴胺(da)和去甲腎上腺素(ne)濃度。測樣時，室溫下解凍，進樣20μl，以峰面積外標法定量。

18統(tǒng)計學(xué)方法采用spss130和sas913版本進行統(tǒng)計學(xué)處理和分析，各組神經(jīng)遞質(zhì)水平檢測數(shù)據(jù)分別進行方差齊性和正態(tài)分布檢驗，方差不齊采用秩和檢驗，檢驗水平α=005。

2結(jié)果

21各組行為學(xué)觀察和評分各組治療前后運動行為和刻板運動積分見表1。模型組行為學(xué)評分與空白組比較，差異有顯著性意義(p<001)，表明造模是成功的。

治療14d后，中、西藥組運動行為積分和刻板運動積分降低，與模型組比較差異有顯著性意義(p<005或p<001)，表明中藥組和西藥組對動物行為均有明顯改善作用，中藥組效果與西藥組相仿。

22各組治療前后腦組織da、ne含量變化比較表2結(jié)果顯示：模型組腦組織da水平降低，ne水平升高，與空白組比較差異均有顯著性意義(p<001);治療14d后，中、西藥組均可顯著升高da水平，降低ne水平，與模型組比較差異均有顯著性意義(p<005或p<001)，中藥組作用與西藥組相仿。表1各組治療前后運動行為和刻板運動積分比較(x±s)　表2各組治療前后神經(jīng)遞質(zhì)水平比較

3討論

idpn是一種中樞神經(jīng)毒素，50年代以后就用于神經(jīng)病理學(xué)的研究，本研究參考wakata[3]的方法復(fù)制模型，從神經(jīng)生物學(xué)和行為學(xué)兩方面觀察藥物治療對ts模型動物臨床行為學(xué)典型特征的影響。idpn誘發(fā)ts模型大鼠出現(xiàn)明顯刻板運動和運動行為異常，如過度興奮、探究行為、異常跑跳、旋轉(zhuǎn)行為和頭頸部上下側(cè)擺等動作均具有ts臨床行為學(xué)的典型特征，有時出現(xiàn)連續(xù)的嗤鼻、抬舉上肢等動作，類似于人類ts患兒喉部發(fā)聲、聳肩等特征行為。本研究通過對藥物治療前后ts模型大鼠運動行為和刻板運動行為評分的比較，發(fā)現(xiàn)中藥組在改善動物ts典型特征行為方面效果明顯，如頭部、頸部的抽動減輕，旋轉(zhuǎn)行為明顯緩解，每次異常行為發(fā)作持續(xù)時間縮短，異常抽動次數(shù)消失，異常跑動及不規(guī)律的彈跳運動明顯減少。

雖然目前對ts的神經(jīng)生物學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)還未完全闡明，但基本認為中樞神經(jīng)遞質(zhì)，特別是da、ne、5-羥色胺(5ht)等與ts之間關(guān)系密切[5]，因此，探討大腦多巴胺類神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物的水平是證明藥物神經(jīng)生物學(xué)療效的主要依據(jù)。本研究對大腦海馬區(qū)da和ne水平進行測定，結(jié)果表明：治療后中藥組da水平明顯升高，而ne水平有所下降，均趨向于正常水平。與ts有關(guān)的神經(jīng)遞質(zhì)包括乙酰膽堿、腎上腺素、5ht、多巴胺等，主要分布于紋狀體、隔區(qū)、藍斑、黑質(zhì)等海馬、基底前腦及邊緣系統(tǒng)，構(gòu)成復(fù)雜的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)[6-8]。有關(guān)藥物治療對大腦組織不同部位和核團神經(jīng)遞質(zhì)水平的影響文獻報道并不一致，而且與檢測時間點有很大關(guān)系[8]。本研究結(jié)果初步表明，中藥治療14d后，對大腦組織da和ne兩種神經(jīng)遞質(zhì)水平的變化產(chǎn)生顯著影響，對于治療過程中以及停藥后神經(jīng)遞質(zhì)的動態(tài)變化仍需進一步觀察。

益智寧神口服液的主要組成為：熟地黃、黃芪、白芍、龍骨、遠志、石菖蒲、五味子。其中熟地，其味甘，性微溫，入心、肝、腎經(jīng)，本品味厚氣薄，為補血生精、滋陰補腎之要藥，《珍珠囊》曰：“主補血氣，滋腎水，益真陰”。黃芪，味甘，性微溫，入脾、肺經(jīng)，質(zhì)輕升浮，為升陽補氣之圣藥?？裳a中氣、益元氣、溫三焦、壯脾陽，選以補脾益氣。白芍味苦、酸，性微寒，入肝經(jīng)，既能養(yǎng)血斂陰，又能平抑肝陽，還能柔肝止痙;而龍骨味甘、澀，性微寒，入心、肝經(jīng)，專攻平肝潛陽、鎮(zhèn)靜安神之用，兩者搭配，養(yǎng)陰寧心，平肝潛陽。五味子性溫，五味具備，酸能收斂，苦能清熱，咸能滋腎，溫而不燥，既能益氣生津，補腎養(yǎng)心，用其養(yǎng)心滋腎安神;遠志、石菖蒲有安神益智、化痰開竅之功效。諸藥配伍，具有健脾滋腎、平肝熄風(fēng)、寧神益智、化痰開竅之功效。氟哌啶醇是目前治療ts的最有效藥物之一[9]，療效確切，但因副作用明顯使其臨床應(yīng)用受到限制，通過實驗結(jié)合臨床用藥發(fā)現(xiàn)，益智寧神口服液的療效與氟哌啶醇無明顯差異，且療效更加穩(wěn)定，易為患兒及家屬接受。

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